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NF-kB激活促进肝星状细胞的增殖
核转录因子kB(nuclear factor-kB,NF-kB)是一种重要的真核基因调节蛋白,对多种参与机体重要生理反应的基因表达起调控作用,这些反应包括免疫反应、急性炎症、细胞粘附、细胞分化和凋亡等,一些研究表明NF-kB有防止细胞凋亡的作用.但是,NF-kB对肝星状细胞增殖的调控作用尚未见报道.我们用国际公认的NF-kB抑制剂pyrrolidin-edithiocarbamate(PDTC)作用大鼠肝星状细胞,观察大鼠肝星状细胞的增殖状况.
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真核细胞表达基因工程抗体的研究进展
大肠杆菌E.coli表达系统是非常常用、有效和方便的表达系统,可以进行许多异源蛋白的高效表达.然而原核细胞系统表达蛋白时,存在多种缺陷:真核基因通常含有内含子,原核细胞不能对其进行正确的剪切和拼接;缺乏真核生物的蛋白翻译后修饰和加工;表达产物多以包涵体形式存在,复性困难且效率很低;背景杂蛋白多、不易于纯化等,因此不可避免地对利用原核细胞表达基因工程抗体造成一定影响.
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泌乳乳腺作为真核基因的有效表达系统研究
目的探讨泌乳腺组织作为真核基因快速表达系统的可行性.方法以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在泛组织嗜性的巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和组织特异性的beta-酪蛋白启动子调控下的3种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK.制备各重组质粒后,以泌乳期羊乳腺作为支持系统,在处于稳定泌乳阶段分别注射不同量的重组质粒于山羊乳腺组织中.在注射后不同时间采集奶汁,检测纤溶活性.结果蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达,注射后6～9 h蚓激酶表达量达到高峰,并可持续至72 h以上;不同表达载体间表达量略有变化,但差异无统计学意义.结论泌乳乳腺组织可以作为真核基因的1种快速有效的表达系统.
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初步建立真核基因调控元件模块的搜索方法
依据基因调控知识对现有方法进行了综合及改进:(1)在序列搜索方面,结合多序列低分值查询与多个保守片段搜索两种方法获得匹配序列,然后序列相互打分,后进行聚类分析;(2)在位点搜索方面,综合应用位置权重矩阵、成对寡核苷酸及Smith-Waterman等方法;(3)在分析系统方面,采用面向对象的程序设计方法建立跨平台、可扩展、基于数据库的分析系统.本方法对MHC基因家族的初步分析结果表明,能较准确地找到一些基因调控元件模块所在的区域.
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染色质免疫沉淀技术及其在结直肠癌研究中的应用
基因表达调控是当前功能基因组学的一个重要领域,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核基因表达机制的基本途径.染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技术近年被广泛用于研究体内染色质结构、组蛋白修饰在基因表达中的作用、灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况,并已成为研究染色质水平基因表达调控的有效的方法[1],活跃表达基因的启动子和增强子等调节区域呈现组蛋白的高乙酰化,而沉默基因的相应区域则呈现组蛋白的低乙酰化[2,3].
