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组蛋白H3K9甲基修饰酶在2周、4周和6周龄小鼠肝脏中的表达
目的 探讨不同周龄小鼠肝脏组蛋白H3K9甲基转移酶(KMT)和去甲基化酶(KDM)的表达.方法 取2周、4周和6周龄BALB/c雄性小鼠肝脏组织,分别提取总mRNA和蛋白质,应用实时定量反转录-聚合酶链式反应(RT-qPCR)确定几种H3K9甲基转移酶和去甲基化酶的表达差异,使用Western blotting 检测两种H3K9去甲基化酶KDM3A和KDM4B的蛋白含量.结果 几种H3K9甲基转移酶(包括KMT1C、KMT1E和PRDM2)和去甲基化酶(包括KDM3A、KDM3B、KDM4A和KDM4B)的mRNA在小鼠不同年龄阶段的表达存在差异(P＜0.05,每年龄段5只小鼠),而两种组蛋白去甲基化酶KDM3A和KDM4B在蛋白水平也有明显不同,6周龄小鼠肝脏中两种蛋白表达明显低于2周和4周(P＜0.05,每年龄段5只小鼠).结论 特定基因位点的H3K9甲基化状态与肝脏发育和生物学功能可能存在密切联系.
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组蛋白H3K9甲基修饰酶在2周、4周和6周龄小鼠肝脏中的表达
目的 探讨不同周龄小鼠肝脏组蛋白H3K9甲基转移酶(KMT)和去甲基化酶(KDM)的表达.方法 取2周、4周和6周龄BALB/c雄性小鼠肝脏组织,分别提取总mRNA和蛋白质,应用实时定量反转录-聚合酶链式反应(RT-qPCR)确定几种H3K9甲基转移酶和去甲基化酶的表达差异,使用Western blotting 检测两种H3K9去甲基化酶KDM3A和KDM4B的蛋白含量.结果 几种H3K9甲基转移酶(包括KMT1C、KMT1E和PRDM2)和去甲基化酶(包括KDM3A、KDM3B、KDM4A和KDM4B)的mRNA在小鼠不同年龄阶段的表达存在差异(P＜0.05,每年龄段5只小鼠),而两种组蛋白去甲基化酶KDM3A和KDM4B在蛋白水平也有明显不同,6周龄小鼠肝脏中两种蛋白表达明显低于2周和4周(P＜0.05,每年龄段5只小鼠).结论 特定基因位点的H3K9甲基化状态与肝脏发育和生物学功能可能存在密切联系.
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姜黄素干预乙醇对心肌祖细胞H3K9的高乙酰化失衡及心脏发育相关基因表达异常
目的:探讨乙醇对心肌祖细胞毒性作用的表观遗传机制.方法:以心肌祖细胞株为研究对象,用200 mmol/L乙醇和溶解于该浓度乙醇的不同浓度姜黄素(5 μmol/L,15 μmol/L,25 μmol/L)处理.Western blot检测组蛋白H3K9乙酰化水平,筛选出姜黄素的有效干预浓度,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5 mRNA表达量的变化.结果:200 mmol/L乙醇使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.76倍(P<0.05),同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达均增加,其中GATA4,Mef2c较对照组有统计学差异(P<0.05).5 μmol/L、15 μmol/L姜黄素分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.22、1.58倍(P<0.05);25 μmol/L姜黄素使组蛋白H3K9乙酰化水平降至对照组水平,同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达较乙醇组均下降,且与对照组无差异(P>0.05).结论:姜黄素可干预乙醇对心肌祖细胞的高乙酰化失衡以及进而发生的相关基因的表达异常,可为了解乙醇致畸的机制以及临床预防先天性心脏病提供新的思路.
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山姜素通过促进H3K9去乙酰化抑制鼠巨噬细胞IL-6分泌的分子机制
目的 通过检测鼠巨噬细胞(RAW246.7)IL-6启动子部位H3K9乙酰化修饰状态以及转录因子P40和CREB含量,初步揭示H3K9去乙酰化在山姜素调节RAW246.7炎症因子表达过程中的分子机制.方法 RAW246.7按照不同干预分为对照组、山姜素组(终质量浓度分别为50、100、200 μg/ml),山姜素+GW9662组,山姜素+HDAC1(组蛋白去乙酰化酶1)或Pgene(对照质粒)SiRNA组,培养完成后ELISA法检测培基中IL-6水平,Western blot检测胞核PPAR、P40和CREB表达水平,并采用染色质免疫共沉淀(Chip-qPCR)检测RAW246.7 IL-6启动子部位结合的去乙酰化H3K9、P40以及CREB的相对表达水平.结果 与对照组相比,山姜素呈剂量依赖性促进RAW246.7核内PPAR表达并遏制IL-6合成,可促进去乙酰化H3K9表达,并下调核内以及IL-6启动子结合的转录因子水平;GW9662遏制山姜素诱导的核内PPAR表达,逆转山姜素诱导的去乙酰化H3K9表达,同时恢复启动子部位、核内P40和CREB含量以及IL-6合成;HDAC1干扰对山姜素诱导的PPAR表达以及核内P40和CREB合成下降无显著影响,但可遏制山姜素诱导的去乙酰化H3K9表达,从而恢复IL-6启动子结合P40和CREB含量以及IL-6合成,但表达水平低于GW9662组.结论 PPAR激动剂山姜素通过激活去乙酰化酶促进IL-6启动子部位H3K9去乙酰化,以上改变可能干扰转录因子P40和CREB结合于启动子部位,从而干预IL-6表达,而H3K9去乙酰化不影响P40和CREB合成.
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肝癌模型大鼠癌组织组蛋白乙酰化水平观察
目的:观察肝癌模型大鼠癌组织中组蛋白H3K9 、H4K12、H4K16位点的乙酰化水平.方法:50只大鼠随机分为模型组(40只)及对照组(10只),予模型组大鼠2.5 g/L二乙基亚硝胺(DEN)溶液自由饮用14周建立肝癌模型,对照组大鼠白由饮用灭菌食用水;造模结束后,取肝组织镜下观察,确认造模成功,采用免疫组织化学及Western blot检测肝癌组织中组蛋白H3 K9、H4K12及H4K16乙酰化水平.结果:造模过程中模型组大鼠死亡20只,另20只大鼠肝组织肝小叶结构破坏,假小叶形成,在11个标本中可见肝癌细胞;免疫组织化学染色及Western Blot检测结果显示,模型大鼠肝癌组织组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点乙酰化水平均低于对照组大鼠肝组织(P＜0.05).结论:DEN诱导的肝癌模型大鼠肝癌组织组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点的乙酰化水平均明显降低,提示组蛋白H3K9、H4K12、H4K16位点的低乙酰化可能参与了肝癌的发生.
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组蛋白乙酰化水平对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响
目的:观察人肝细胞株LO2及不同转移能力的肝癌细胞株HepG2、MHCC-97L和LM3中组蛋白H3K9、H4K12及H4K16位点的乙酰化水平,并探讨组蛋白乙酰化对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响.方法:采用Western blot实验检测LO2、HepG2、MHCC-97L和LM3中组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平;应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(SAHA,1.5 μmol/L和3μmol/L)处理肝癌LM3细胞株24 h、48 h后,Western blot检测其组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平变化,transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化.结果:H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平由高到低为HepG2、MHCC-97L、LM3,3种肝癌细胞株的乙酰化水平均低于人肝细胞LO2(P ＜0.05);去乙酰化酶抑制剂SAHA作用后,LM3细胞组蛋白H3K9、H4K12及H4K16乙酰化水平明显提高,细胞的迁移、侵袭能力明显降低,与未用SAHA处理的LM3细胞比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:提高组蛋白H3K9、H4K12、H4K16位点的乙酰化水平,能抑制肝癌细胞的迁移、侵袭能力.
