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粉尘螨两种溶性抗原糖蛋白的组分与糖链研究
目的研究水溶性和尿素溶性粉尘螨糖蛋白的组分及结合糖链的构成. 方法用粉尘螨脱脂干粉提取水溶性抗原(Der fA)和尿素溶性抗原(Der fU),经SDS-PAGE,Western blot,免疫染色,胶体金染色和糖定性检测两种抗原糖蛋白的组分,并用9种HRP-植物血凝素进行结合糖链鉴定. 结果 Der fA显示4条蛋白带,分别为18 ku、30 ku、50 ku和58 ku,Der fU显示2条蛋白带(46 ku、58 ku),其中58 ku糖蛋白检测阳性.Der fA存在α-甘露糖(α-Man)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAC)、α-葡萄糖(α-Glc),不存在寡糖(Oligosaccharide)、岩藻糖(α-Fuc)、β-半乳糖(β-Gal)、β-半乳糖-乙酰氨基半乳糖(β-Gal-GalNAC)及唾液酸(AS);Der fU只存在α-甘露糖,不存在其它7种糖链和唾液酸. 结论α-甘露糖是粉尘螨优势糖蛋白,其次是N-乙酰葡萄糖胺和α-葡萄糖.
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抗囊虫单抗的制备及其应用研究
目的制备分泌特异性抗猪囊虫单抗的杂交瘤细胞株,建立以特异性单抗检测囊虫病患者循环抗原(CAg)的特异敏感的ELISA方法. 方法制备水溶性抗原(Ag-w)和尿素溶性抗原(Ag-u),将实验用BALB/c小鼠分为Ag-u和Ag-w组,分别以Ag-u和Ag-w免疫,取两组免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA法进行筛选,所获特异性阳性克隆加以扩大培养,并分别与包虫、血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定. 结果获得稳定分泌特异性抗囊虫单抗的杂交瘤细胞5株,其中1株N1B10来自于Ag-w组,另4株U2A6、U2B3、UB5H6和UE10H5来自于Ag-u组.对N1B10、U2A6和U2B3初步鉴定结果表明,其抗体类型分别为IgG2b、κ,IgG1、κ,IgG2b、κ;腹水的效价分别为1.024×106、1.6×104和3.2×104;免疫组化显示N1B10定位于囊虫囊壁的基底膜,U2A6和U2B3定位于囊虫的头节.杂交瘤细胞经连续培养,液氮反复冻存复苏后仍能稳定分泌单抗.取3株单抗和兔抗囊虫血清建立了检测囊虫病患者CAg的ELISA方法,测定48份临床确诊囊虫病病人血清,阳性率达95.8%. 结论成功制备了抗囊虫单克隆抗体,所建立的ELISA方法敏感性高,特异性强,可用于囊虫病患者CAg的检测.
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应用尿素溶性抗原制备抗猪囊虫单抗的研究
目的为提高抗猪囊虫单抗的特异性.方法使用猪囊虫尿素溶性抗原(Ag-u)并用水溶性抗原(Ag-w)作对照分别免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞分别与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA法进行筛选.同时筛选出的阳性克隆扩大培养,取上清单抗分别与包虫、血吸虫、肝吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定.结果 Ag-u和Ag-w的阳性克隆率分别为13.5%(13/96)和12.5%(12/96),特异性阳性克隆率分别为30.8%(4/13)和8.3%(1/12).SDS-PAGE分析Ag-u和Ag-w的条带数分别为9和17,分子质量>97.4 ku的条带比率分别为66.7%(6/9)和29.4%(5/17).免疫组化显示来自Ag-u的2株单抗定位于囊虫的头节,而来自Ag-w的1株单抗定位于囊虫的囊壁.结论 Ag-u用于制备单抗的阳性克隆得率与Ag-w没有明显的差异,而特异性阳性克隆的得率是Ag-w的4倍,亦即Ag-u不仅有良好的免疫原性,而且特异性更高.
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旋毛虫病免疫诊断液、固相抗原效果多重比较
旋毛虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病.已知约有120多种哺乳动物有自然感染.人群高发区主要是云南、河南、湖北、吉林等省.治疗不及时,病人死亡率可高达3-30%,猪旋毛虫的检出率以河南、湖北高,并呈逐年上升趋势.大多旋毛虫病与多种寄生虫病混合流行于同一地区,误诊率较高.传统的病原学检查方法由于取材部位、时间、感染程度等因素影响,检出率仅50%|2|,而且有创伤性,不易被病人接受,现场应用时受到限制.随着免疫技术的发展,新的免疫学方法的敏感性特异性已不断提高,有在临床检验中已逐渐取代病原学诊断方法,而更为广泛的应用于流行区的筛选病人和普查工作.为此,本实验研究ELISA和IEST应用于检测流行区现场采集样本的效果试图通过选择实用性抗原、改进实验条件和完善实验方法等方面的探索,筛选出一种适于流行区推广使用、特异性高、敏感性强的诊断抗原,为现场工作提供重现性好、操作简便、成本低、有疗效考核价值的免疫诊断方法.研究结果显示,旋毛虫尿溶性与水溶性纯化抗原同样有较好的敏感性及更高的特异性.水溶性抗原与固相抗原敏感性和特异性无显著性差异.
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斯氏肺吸虫3次提取的抗原单用及配用的诊断价值
以往制备斯氏肺吸虫水溶性抗原(Ps-AWA),均为短时间(4～5d)一次性浸提,残渣即被弃去.然而,近年来多数斯氏肺吸虫病流行区的生态环境已经或正在发生变化,蟹体内囊蚴的感染密度较以往大大降低,这就给本病的实验研究尤其是制备抗原带来一定困难,如何有效利用虫体资源,尽可能将有效抗原成份大限度提出,是一个值得探索的问题.
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华支睾吸虫代谢抗原的应用价值研究
ELISA检测华支睾吸虫抗体(IgG),通常是以华支睾吸虫成虫水溶性抗原(CSA)为诊断抗原.余海昕等(1988)报告以华支睾吸虫代谢抗原(CSMA)作诊断抗原,用ABC-ELISA检测感染华支睾吸虫兔血清,证实CSMA有较高的诊断敏感性,与正常兔及感染血吸虫、蛔虫的兔血清反应的OD值低于CSA[1],但迄今尚未见到有关CSMA用于人体华支睾吸虫病特异抗体(IgG)的检测报告.为此,我们以CSMA和CSA作诊断抗原,用白色PVC快速Dot-ELISA法[2]比较检测人体华支睾吸虫病血清,以评价CSMA诊断的敏感性及特异性.
