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梅花鹿S100A4基因的克隆及原核表达
目的 构建梅花鹿S100A4基因重组质粒,并进行原核表达,为研究S100A4蛋白在鹿茸发生中的作用机制奠定基础. 方法 梅花鹿锯茸血细胞中提取总RNA并进行反转录,用设计的特异性引物扩增梅花鹿S100A4基因,PCR产物克隆到pMD18-T载体并测序.将扩增的S100A4基因片段和原核表达质粒pET 28a(+)分别用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21 (DE3),用TPIG表达菌株进行诱导表达. 结果 序列分析显示,梅花鹿S100A4基因与牛S100A4基因同源性高,为98.4％.酶切鉴定显示,表达梅花鹿S100A4基因重组质粒pET28aS100A4构建成功,SDS-PAGE电泳检测表达蛋白分子质量单位为12 ku,与预期值相符. 结论 构建了梅花鹿S100A4基因重组质粒,并在大肠埃希菌中成功表达梅花鹿S100A4蛋白,为研究S100A4蛋白在鹿茸生长过程中的作用机制奠定了基础.
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肿瘤转移相关基因S100A4的研究进展
肿瘤的发生发展受多种基因的调控.S100A4基因是近几年发现的一种具有促肿瘤作用的基因,该基因编码一种钙离子结合调节蛋白,通过与钙离子结合在肿瘤发生发展中发挥重要作用.本文就S100A4基因的结构、促肿瘤的作用及机制作一综述.
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S100A4基因与恶性肿瘤研究进展
目前的研究已经证实,肿瘤的发生与演进是多因素协同参与、多基因共同作用、多阶段逐步发展的过程,这一过程涉及多种癌基因以及抑癌基因的异常改变.其中S100A4是一个被筛选出来的特异性蛋白,其与恶性肿瘤生物学行为、特别是侵袭与转移密切相关,并且与患者预后关系密切,是目前肿瘤研究的热点基因.S100A4是S100钙结合蛋白家族成员之一,本文主要对S100A4在肿瘤组织中作用的研究现状及与恶性肿瘤侵袭转移的关系做一综述.
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S100A4基因在肿瘤研究中的进展
肿瘤转移是目前肿瘤治疗失败的原因之一.已经证实,良性肿瘤转变为恶性肿瘤是由于肿瘤细胞具有穿透组织屏障并且浸润周围组织的能力.近年来,已经发现许多与肿瘤发生或(和)潜在转移相关的基因,S100A4是与肿瘤转移密切相关的基因,它是S100钙结合蛋白家族成员之一,其表达与肿瘤转移直接相关.本文主要对S100A4在肿瘤组织中的研究现状及进展做一综述.
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nm23H1和S100A4 mRNA表达与胃癌细胞体外侵袭力的关系
目的:探讨S100A4 、nm23H1基因mRNA表达与胃癌细胞体外侵袭力的关系.方法:采用Boyden小室法测定4种胃癌细胞系MKN1、MKN45、GT3TKB 、BGC823的体外侵袭力,RT-PCR检测4种细胞系的S100A4和nm23H1 mRNA表达水平.结果:胃癌细胞体外侵袭力高低的顺序依次为:MKN45 高,BGC823 、MKN1次之(二者无显著差异), GT3TKB低(P<0.001). nm23H1、S100A4 基因mRNA各自表达与胃癌细胞体外侵袭力无明显关系.nm23H1/S100A4 mRNA相关表达水平的顺序依次为:GT3TKB高,BGC823 和MKN1次之(二者无显著差异,P>0.05)、MKN45 低(P<0.001),其相关表达与胃癌细胞体外侵袭力呈反比关系.结论:nm23H1/S100A4 mRNA的相关表达在评价胃癌细胞体外侵袭力方面具有重要价值.
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活化T细胞核因子5对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡能力的影响
目的:探讨活化T细胞核因子5 (nuclear factor 5 0f activatedT cells,NFAT5)对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡能力的影响及其可能的机制.方法:设计并合成3条靶向NFAT5基因的siRNA(siRNA2567、siRNA2714和siRNA4562)及1条与NFAT5基因无同源性的阴性对照siRNA(NC-siRNA),脂质体介导转染人胃癌MGC803细胞后,采用Real-time PCR检测分析细胞中NFAT5 mRNA表达水平的变化,进而筛选出有效抑制NFAT5基因表达的siRNA (NFAT5-siRNA).NFAT5-siRNA转染MGC803细胞48 h后,进一步采用Real-time PCR和Western blotting验证并检测细胞中NFA T5和S100A4mRNA及蛋白表达水平的变化,流式细胞术和CCK-8法分析抑制NFAT5表达对细胞增殖及凋亡的影响.结果:转染siRNA2567对NFAT5 mRNA的表达抑制为明显(P＜0.01),siRNA2567被验证为NFAT5-siRNA.转染NFAT5-siRNA 48 h后,NFA T5和S100A4 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.05);与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组MGC803细胞的增殖率在72 h和96 h均显著降低(P＜0.01);NFAT5基因沉默48h后,MGC803细胞的凋亡率由(2.7±0.2)％上升至(7.9±0.2)％(P＜0.01).结论:NFAT5-siRNA能有效沉默人胃癌MGC803细胞中NFAT5基因表达,在抑制细胞增殖率的同时能够有效促进细胞凋亡,该作用可能通过调控S100A4表达实现.
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S100A4蛋白在膀胱癌中的表达及其临床意义
目的 探讨膀胱癌中S100A4的表达及意义.方法 采用免疫组化S-P法检测65例膀胱癌中S100A4的表达情况,分析其表达与临床病理特征之间的关系.结果 S100A4的表达与组织学分级、淋巴结转移呈正相关(P＜0.05).结论 膀胱癌中S100A4的表达与肿瘤的进展密切相关,是判断膀胱癌生物学行为、预测转移趋势的有价值的指标.
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S100A4和血管内皮生长因子C、D在胃癌组织中的表达及其与淋巴结转移和预后的关系
目的 观察人胃癌S100A4和血管内皮生长因子(VEGF)-C、VEGF-D的表达,探讨其与临床病理特征及预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测108例人胃癌及20例癌旁组织中S100A4和VEGF-C、VEGF-D的表达.分析S100A4和VEGF-C、VEGF-D表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、浸润深度、淋巴结转移和肿瘤TNM分期的关系,并作预后分析.结果 S100A4和VEGF-C、VEGF-D在胃癌组织中的阳性率明显高于癌旁组织(P＜0.05).S100A4的表达与肿瘤大小和淋巴结转移有关(P＜0.05),VEGF-C的表达与淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.05),VEGF-D的表达与淋巴结转移和TNM分期无明显相关(P＞0.05),肿瘤组织内S100A4和VEGF-C两者表达呈正相关(P＜0.05).S100A4和VEGF-C、VEGF-D阳性胃癌患者5年生存率分别低于阴性患者,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 S100A4和VEGF-C的表达与胃癌的淋巴结转移有关,S100A4可能参与VEGF-C淋巴管生成通路,在胃癌的淋巴结转移中发挥重要作用.
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非小细胞肺癌中S100A4和上皮钙粘蛋白的表达及意义
目的 探讨非小细胞肺癌中S100A4和上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测76例乳腺癌中S100A4,E-cad表达情况,分析二者的表达与临床病理特征之间的关系.结果 S100A4的表达与组织学分级、淋巴结转移呈正相关(P＜0.01).E-cad的表达与组织学分级、淋巴结转移呈负相关(P＜0.01).结论 非小细胞肺癌中S100A4的表达和E-cad的表达缺失与肿瘤的进展密切相关,是判断非小细胞肺癌生物学行为、预测转移趋势的有价值的指标.
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S100A4基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义
目的:探讨S100A4基因在膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)中的表达及意义.方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测38例膀胱移行细胞癌组织及其相应癌旁组织中S100A4基因的表达情况,结合临床及组织病理学特点探讨S100A4基因与膀胱癌发生及发展的关系.结果:S100A4基因在膀胱移行细胞癌及正常膀胱移行上皮组织中的阳性表达率分别为60.5%(23/38)和0%(0/38).膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率明显高于正常膀胱移行上皮组织(P<0.005).其中膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率随肿瘤分级、分期的增高及淋巴结转移而相应增高(P<0.05).结论:S100A4基因表达与移行膀胱癌分化有关,癌组织S100A4基因有可能成为膀胱癌的一个新的肿瘤标记物;S100A4基因差异表达与移行膀胱癌侵袭和转移明显相关,移行膀胱癌组织中S100A4基因可望作为移行膀胱癌的病情发展及指导临床治疗的标记物之一.
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S100A4蛋白与膀胱癌
膀胱癌是我国常见的恶性肿瘤,占全部恶性肿瘤1%～2%,在国内无论其发病率和死亡率均占泌尿系肿瘤的首位,且近年有增加的趋势.
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S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义
目的:探讨正常人与类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,分析差异蛋白在RA发病中的作用.方法:应用固相pH梯度(IPC)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者滑膜成纤维细胞总蛋白质;应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析;应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质,并用Westem Blot、免疫细胞化学技术验证表达差异蛋白质.结果:正常人及RA患者滑膜成纤维细胞蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示896和992个点.有64个蛋白质点表达存在2倍以上的差异.选取9个在RA滑膜成纤维细胞中表达上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100A4和S100A10两个蛋白质.经Western Blot、免疫细胞化学技术验证这两个蛋白在RA滑膜成纤维细胞中表达上调,与上述结果一致,并且发现S100A4在RA滑膜成纤维细胞中的表达分布发生了变化.结论:结合蛋白S100A4和S100A10可能参与RA的发病.S100A4在细胞中的表达易位可能与RA滑膜成纤维细胞表型改变有关.
