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Aurora激酶抑制剂MK-0457治疗多种恶性血液病的研究进展
近年来研究的一种Aurora激酶抑制剂MK-0457(VX-680),是Aurora激酶A、B、C及BCR-ABL、FLT-3、JAK-2等多种激酶的小分子抑制剂.它能阻断细胞生长周期,诱导人类多种肿瘤细胞凋亡.研究表明,MK-0457能有效对抗野生型和包括13151在内的突变型bcr-abl融合基因的表达,并能抑制FLT-3、JAK-2及其突变型的活性;临床试验证实,它对治疗难治性及预后不良的慢性髓系白血病(CML)、Ph染色体阳性的急性淋巴细胞白血病(Ph+ ALL)、复发难治性的急性髓系白血病(AML)和JAK-2突变的骨髓增生性疾病(MPD)有效.随着基础研究的深入和Ⅱ期临床试验的进行,MK-0457将显示出对某些恶性血液病治疗的重大意义.本文就MK-0457的药理作用、临床试验及联合用药研究三个方面的进展做一综述.
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Aurora激酶抑制剂VX-680对慢性髓系白血病细胞增殖及凋亡的影响
本研究探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对白血病细胞系K562、KCL22和慢性髓系白血病(CML)患者骨髓CD34+细胞的增殖和凋亡的影响.利用CCK-8法观察VX-680对K562和KCL22细胞的增殖作用,细胞计数方法测定VX-680对CML的CD34+细胞增殖影响,Annexin V-PI凋亡检测试剂盒、流式细胞术分析VX-680对K562、KCL22细胞凋亡效应,集落形成试验检测VX-680对CML及正常供者(donor)的骨髓CD34+细胞集落形成能力影响.结果表明,Aurora激酶抑制剂VX-680(20-100 nmol/L)在处理细胞第3天时能明显抑制K562和KCL22细胞增殖(P＜0.01),并能抑制CML患者骨髓CD34+细胞增殖,而且随着剂量增加,抑制作用增强;VX-680(20nmoL/L)作用K562和KCL22细胞3天时可诱导细胞凋亡(P＜0.01);集落形成试验表明,CML患者骨髓CD34+细胞在VX-680的体外处理下集落形成能力较正常骨髓CD34+细胞明显下降(P＜0.01).结论:Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对慢性髓系白血病细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用.
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VX-680联合顺铂对人SK-HEP-1细胞株增殖影响机制探讨
目的:体外观察Aurora B激酶抑制剂VX-680与顺铂(cisplatin,DDP)联合对人肝癌细胞SK HEP-1细胞株增殖的抑制作用及化疗敏感性,并且初步探讨其机制.方法:MTT法检测VX-680单独或联合DDP对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的抑制作用.流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析单独用药及联合用药对SK-HEP-1细胞生长凋亡和周期的影响.蛋白质印迹法检测实验组中Aurora B、p53和Bcl-2蛋白的表达.结果:VX-680与DDP均能抑制SK-HEP-1细胞的生长,呈剂量依赖性,并且联合用药后的抑制率明显高于单用药组,P＜0.05.当VX-680为3.125 μmol/L和DDP为0.125 μg/mL联合时,产生协同作用,Q=1.36；FCM检测发现,联合用药组(17.4±0.3)％的细胞凋亡率明显高于对照组的(1.1±0.2)％,VX-680组为(5.97±0.5)％,DDP组为(7.53±0.7)％.细胞周期结果显示,联合用药组S期和G1期细胞减少,而停滞在G2/M期细胞比例明显增加(68.3±1.2)％,明显高于单用药组DDP的(16.7±0.9)％和VX-680的(43.6±1.1)％及对照组的(23.5±0.8)％,P＜0.05；并且通过蛋白质印迹检测发现,在联合用药组中的Aurora B激酶表达减少,p53表达增加,Bcl-2表达减少.结论:VX-680能够通过促进细胞凋亡抑制SK-HEP-1细胞的增殖,有效提高SK-HEP-1对DDP的化疗敏感性,其机制与Aurora B的表达减少、p53表达增加及Bcl-2表达减少有关.
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VX-680体外诱导异基因干细胞移植后复发AML细胞凋亡的初步研究
目的:探讨Aurora激酶抑制剂VX-680在体外对异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后复发的急性髓系白血病(AML)患者细胞增殖和凋亡的影响.方法:以正常人CD34+细胞为对照,体外用5 nmol/L浓度VX-680分别处理3例Allo-HSCT后复发的AML患者白血病细胞,48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞增殖活力,Hoechest33342方法观察细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡百分率,蛋白质印迹法检测Aurora-A磷酸化蛋白及Caspase-3凋亡蛋白的表达.结果:MTT法观察发现,体外VX-680均能抑制3例复发患者白血病细胞的增殖,增殖抑制率分别为(77.5±3.1)％、(76.8±4.7)％和(81.1±4.2)％,均明显高于正常对照的(11.2±1.6)％,P值均＜0.001; Hoechest33342方法观察发现,3例患者白血病细胞在VX-680作用下出现了明显的细胞凋亡形态,流式细胞术检测到凋亡百分率分别为(88.8±4.6)％、(98.7±0.9)％和(99.3±0.4)％,也均高于正常对照的(13.6±3.5)％,P值均＜0.001；蛋白质印迹法检测显示,VX-680处理后3例患者白血病细胞中Aurora-A磷酸化蛋白表达显著下降,而Caspase-3凋亡蛋白表达明显升高.结论:VX-680体外可通过诱导Allo-HSCT后AML复发患者的白血病细胞凋亡来抑制其增殖.
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Aurora-A激酶抑制剂VX-680对食管癌细胞凋亡的影响
目的 探讨Aurora-A激酶抑制剂VX-680对食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度的VX-680(10、30、50、100 nmol/L)处理EC9706细胞48 h,并设DMSO对照组和空白对照组,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 随着VX-680浓度的增加,贴壁细胞逐渐出现皱缩、变圆、脱落等现象;细胞存活率呈逐渐下降趋势(P＜0.01);细胞凋亡率均高于DMSO对照组,且50和100 nmol/L VX-680组细胞凋亡率与DMSO对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 VX-680能促进EC9706细胞凋亡,在食管癌临床治疗方面具有良好的应用前景.
关键词： 食管鳞癌 EC9706细胞 Aurora-A激酶 VX-680 细胞凋亡 -
AuroraA激酶抑制剂VX-680对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响
目的：探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响。方法以Aurora A激酶抑制剂VX-680抑制宫颈癌细胞株Caski中Aurora A的表达，再将宫颈癌细胞用不同浓度顺铂处理，Western Blot检测Aurora A蛋白受抑制情况，用流式细胞仪分析Aurora A表达下调后宫颈癌细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。结果 Aurora A表达下调使顺铂对宫颈癌细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均升高（P均＜0．01）。结论 Au-rora A激酶抑制剂VX-680可使人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性增强，抑制Aurora A可望提高顺铂对宫颈癌的治疗效果。
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Aurora激酶抑制剂对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察Aurora激酶抑制剂VX-680对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的VX-680处理MDA-MB-231细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,用噻唑监(MTT)比色法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖,碘化丙锭(PI)单染法检测细胞周期,免疫荧光观察核和纺锤体形态变化,免疫印迹法检测AuroraA/B蛋白、组蛋白和凋亡相关蛋白表达,Yo-Pro-1荧光染色观察细胞凋亡形态学变化.结果 VX-680显著抑制MDA-MB-231增殖,24、48 h半数抑制浓度( IC50)分别为(2.362±0.599)、(0.102±0.556) μmol/L;经药物作用24h后,贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落；克隆形成率南( 93.00 ±0.03)％降至(0.01±0.01)％,G0/G1期细胞由(51.27±0.75)％降至(5.87±0.49)％,G2/M期细胞由(17.67±1.25)％升高至(91.93±1.96)％,荧光染料法显示凋亡细胞数由(4.33±0.03)％增高至(44.00±0.04)％,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；细胞核与纺锤体结构紊乱；免疫印迹检测提示磷酸化AuroraA/B、磷酸化Histone H3表达水平降低,Caspase-3和PARP被剪切.结论 VX-680抑制乳腺癌细胞MDA-MB231增殖、诱导凋亡呈剂量依赖性.
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Aurora激酶抑制剂与BH3模拟剂协同诱导乳腺癌细胞凋亡
目的 观察VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞增殖的影响；Westen blot法检测凋亡指标；免疫荧光染色及流式细胞术观察多核现象；荧光染色观察细胞凋亡形态学变化；流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,VX-680单独用药对细胞抑制作用不明显,半数抑制浓度(IC50)为( 25.457±1.406)mol/L,ABT-737明显降低了VX-680在T47D中的IC50 (0.277±0.057) μmol/L,AB-737增加VX-680的细胞抑制作用呈剂量关系；ABT737 单药对细胞抑制作用不明显,IC50为(0.959±0.018) μmol/L,VX.-680与ABT737联合对细胞的抑制作用明显增加,IC50(0.268±0.072) μmol/L;免疫荧光染色结果显示1μmol/L VX-680作用48 h出现多核现象；Western blot 检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)结果显示,与单独用药比较,VX-680与ABT737联合用药时PARP、Caspase-3剪切明显增加,B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-xL表达减少、bax 表达增加,呈剂量和时间依赖性.流式细胞术显示VX-680联合ABT-737时T47D细胞凋亡率可达(46.40 ±0.41)％.结论 ABT-737可显著提高VX-680对乳腺癌T47D细胞的诱导凋亡作用.
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Aurora激酶抑制剂VX-680对未分化甲状腺癌细胞增殖的影响
目的：研究Aurora-A 激酶抑制剂 VX-680对未分化甲状腺癌8305C 细胞增殖的影响，并探讨其相关机制。方法：采用MTT法检测VX-680对8305C细胞增殖活性的影响；利用免疫荧光化学方法检测甲状腺癌细胞在药物作用下Aurora-A、Bax和Bcl-2的表达变化。结果：随药物浓度增加甲状腺癌细胞生长受到明显抑制（P ＜0．05）；随作用时间延长，药物的抑制作用也增强（P ＜0．05）。48 h 细胞免疫荧光结果显示400 nmoL浓度处理的8305C 细胞，Aurora-A激酶和Bcl-2蛋白表达明显降低（P ＜0．05），Bax 蛋白量变化不明显（P ＞0．05）。结论：VX-680通过抑制Aurora-A 表达，抑制细胞有丝分裂，同时通过抑制Bcl-2表达，导致Bcl-2／Bax比例失衡，诱发细胞凋亡。 VX-680是未分化甲状腺癌的一种非常有潜力的靶向抑制剂。
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VX-680诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响
目的：探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响及意义。方法：体外培养T24细胞，分别给予不同浓度及作用时间的VX-680，Annexin V/PI检测细胞凋亡；Hoechst 染色法检测细胞凋亡形态学改变；RT-PCR 和Western blot 检测细胞 Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果：Annexin V/PI显示，凋亡率分别随着浓度增高和时间增长而增加，呈浓度及时间依赖性；Hoechst染色发现细胞在处理72 h 后，其凋亡增多程度及Bcl-2 mRNA 和蛋白表达下调水平均随浓度增高而增加，呈浓度依赖性。结论：Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调Bcl-2表达显著诱导人膀胱癌T24细胞凋亡，且具有浓度依赖性。
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VX-680对T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinD1和CyclinB1表达的影响
目的:探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinD1和CyclinB1 mRNA表达的影响及意义.方法:体外培养T24细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的VX-680,采用MTT法检测细胞增殖能力;RT-PCR检测T24细胞CyclinD1和CyclinB1 mRNA的表达水平.结果:MTT结果显示:100～500 nmol/L VX-680作用24、72 h均对T24细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性且72 h时抑制效果更显著;100～500 nmol/L VX-680作用72 h后,各组T24细胞CyclinD1和CyclinBmRNA的表达水平下调,呈浓度依赖性.结论:Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调CyclinD1和CyclinB1 mRNA表达显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖,且具有浓度依赖性.
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PLK1及STK15基因在结肠癌细胞中的表达及其特异性抑制剂对结肠癌细胞增殖的影响
目的 研究保罗样激酶1 (polo-like kinase 1,PLK1)及丝氨酸/苏氨酸激酶15 (serine/threonine kinase 15,STK15) mRNA及其蛋白在结肠癌细胞中的表达,以及其特异性抑制剂对结肠癌细胞增殖的影响.方法 选取人宫颈癌Hela细胞和人结肠癌HCT-116细胞、HT-29细胞及CACO-2细胞,以β-actin为内参照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PLK1 mRNA和STK15 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测PLK1蛋白和STK15蛋白的表达水平;采用偶氮唑盐(MTT)法检测Dulbecco改良细胞培养基(DMEM培养基)、二甲基亚砜(DMSO)、SBE13(PLK1蛋白特异性抑制剂)或VX-680 (STK15蛋白特异性抑制剂)处理后4种癌细胞的增殖活性.结果 与Hela细胞比较,HCT-116细胞、HT-29细胞及CACO-2细胞的PLK1和STK15 mRNA及其蛋白的表达水平均较高(P＜0.05).①Hela细胞:与DMEM组比较,SBE13组、VX-680组及SBE13 +VX-680组的增殖能力无明显变化(P＞0.05).②HCT-116细胞和HT-29细胞:与DMEM组比较,VX-680组和SBE 13+ VX-680组的增殖能力均降低(P＜0.05),但SBE13组的差异无统计学意义(P＞0.05).③CACO-2细胞:与DMEM组比较,SBE13组、VX-680组及SBE 13+ VX-680组的增殖能力均降低(P＜0.05).结论 HCT-116、HT-29及CACO-2结肠癌细胞的PLK1 mRNA和STK15 mRNA及其蛋白的表达水平均高于Hela细胞,应用其特异性抑制剂可抑制部分结肠癌细胞系的生长.
关键词： 保罗样激酶1 丝氨酸/苏氨酸激酶15 结肠癌 SBE13 VX-680
