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急性髓系白血病CD33+/CD34+细胞表面核酸适配体的筛选及结构分析
目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法.为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponenti enrichment,cSELEX)技术,筛选与急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)M2型(AML-M2)患者CD33+/CD34+细胞结合的核酸适配体(aptamer),为寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物提供基础.首先,通过免疫磁珠方法分选出AML-M2患者骨髓CD33+/CD34+细胞并将其作为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用cSELEX技术,从单链DNA(single strand deoxyfibonucleic acid,ssDNA)文库中筛选与AML-M2CD33+/CD34+细胞结合的适配体.随后,通过克隆和测序分析各适配体的结构.结果显示,经过13轮次的反复筛选,ssDNA文库的适配体与AML-M2患者CD33+/CD34+细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,至第13轮时趋于稳定.对所获得的30个适配体序列分析表明,大多数适配体含有CCCCT、CTCTC和CTCAC保守序列中的一种.二级结构分析显示,30个适配体中含有3种不同类型的模拟二级结构.结论:本研究成功筛选到AML-M2型白血病CD33+/CD34+细胞的适配体,这为进一步寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物以及AML-M2型白血病的分子诊断创造了基础.
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电针预处理对脑缺血再灌注后小胶质细胞活化状态的影响
目的:观察电针预处理对脑缺血再灌注后小胶质细胞活化状态的影响.方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血组(MCAO)、电针处理组(EA+MCAO)三组.采用大脑中动脉栓塞(MCAO)诱导大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.缺血再灌注后6h、24h、3d和7d取材,运用Western blot及免疫荧光技术检测缺血半暗带小胶质细胞活化状态以及M1/M2型特异性标志分子的表达水平.结果:脑缺血再灌注后,小胶质细胞被激活,数量表达增加(P＜o.05,vs.sham组),形态从静息状态的分支状转变为圆形的阿米巴状.M1型标志分子iNOS主要表达于缺血再灌注后24小时(P＜0.05,vs.sham组),M2型标志分子Arginase主要表达于缺血再灌注后7天P＜0.05,vs.sham组).电针预处理上调Arginase的表达水平,下调iNOS的表达水平(P＜0.05,vs.MCAO组).结论:缺血再灌注后小胶质细胞被激活,电针预处理促使活化的小胶质细胞由M1向M2转化.
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成人急性髓系白血病M2型免疫表型分析
目的:探讨成人急性髓系白血病M2型(acute myeloid leukemia-type M2,AML-M2)白血病细胞免疫表型的特征及临床意义.方法:采用多参数FCM和CD45/侧向角散射(side scatter,SSC)设门,对93例AML-M2患者的白血病细胞进行免疫表型分析.结果:93例AML-M2患者骨髓白血病细胞表达髓系祖细胞抗原CD117(91.4％)、CD34 (80.6％)和HLA-DR (46.2％)及髓系相关抗原CD13(86.0％)、CD33 (67.7％)和CD71 (50.5％).部分患者伴有淋系分化抗原的表达,CD7阳性表达率高(31.2％),其次为CD56 (25.8％).17例R UNX1-R UNX1 T1融合基因阳性AML-M2患者白血病细胞阳性表达率高的抗原为CD34 (76.4％),其次为CD33 (70.6％)、CD117 (70.6％)和CD13 (52.9％).76例RUNX1-RUNX1 T1融合基因阴性AML-M2患者白血病细胞高表达CD117 (96.1％)、CD13 (93.4％)、CD34 (81.6％)、CD33 (67.1％)和CD71 (55.3％).在RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性患者中,阳性表达率高的淋系分化抗原为CD56(47.1％);在RUNX1-RUNX1T1融合基因阴性患者中,阳性表达率高的淋系分化抗原为CD7(35.5％).RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性患者的CD117、CD13和CD71阳性表达率低于RUNX1-R UNX1T1融合基因阴性患者(P值均＜0.05),而CD38和CD56阳性表达率均高于RUNX1-R UNX1 T1融合基因阴性患者(P值均＜0.05).结论:AML-M2白血病细胞抗原表达复杂,异质性强,强表达髓系相关抗原并常伴有淋系分化抗原的表达.RUNX1-RUNX1 T1融合基因阳性与阴性AML-M2患者表现出不同的免疫表型特征.
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热应激下肿瘤细胞促进巨噬细胞M2型转化及其反馈作用
目的 通过模拟不同热应激温度,探讨不同热应激条件下肿瘤细胞与巨噬细胞之间的相互作用.方法 收集射频消融(RFA)前后的人肝癌样本,比较两者巨噬细胞浸润程度.体外实验中将小鼠肝癌细胞分别以37℃、55℃、70℃水浴加热,收取肿瘤细胞上清液以培养巨噬细胞;实时聚合酶链反应(PCR)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(Arg)-1表达,MSD方法检测白细胞介素(IL)-10、IL-12分泌量并镜下观察不同条件下巨噬细胞形态变化及极性转变特征;收取不同条件刺激的巨噬细胞上清液以培养肿瘤细胞,观察肿瘤细胞增殖情况.结果 RFA后人肝癌组织巨噬细胞浸润增多.正常体温下肿瘤细胞早期接触即可导致巨噬细胞激活并向M1型极性转变,iNOS表达上调,IL-12分泌增多,而热应激后肿瘤细胞易导致巨噬细胞向M2型极性转变,Arg-1表达上调,IL-10分泌增多.热应激后巨噬细胞上清液可促进肿瘤细胞增殖.结论 肿瘤细胞热应激导致巨噬细胞向M2型转变,进而可潜在促进肿瘤发展.
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巨噬细胞诱导肾间质纤维化机制研究进展
肾间质纤维化是指胶原分子在肾间质的累积,是慢性肾脏病的终病理结局和共同死亡通路.肾间质纤维化发生、发展涉及多种细胞及分子,包括巨噬细胞、肌成纤维细胞、生长因子、基质金属蛋白酶或基质金属蛋白酶抑制物等.巨噬细胞在肾间质纤维化的进程中起重要作用,巨噬细胞的异质性可促进肾纤维化,且对肾脏损伤修复有重要作用.M1型活化巨噬细胞有促炎及促纤维化的作用,M2型活化巨噬细胞可能发挥抗纤维化及促进组织修复作用.本文就巨噬细胞诱导肾间质纤维化机制的研究进展作一综述.
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急性髓系白血病细胞单链DNA适体的体外筛选
目的:筛选识别急性髓系白血病M2型(acute myeloblastic leukemia M2 subtype,AML-M2) CD33+/CD34-细胞的核酸适体(aptamers).方法:以AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34-细胞为反筛选细胞,采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment,C-SELEX)技术,体外反复筛选单链DNA( single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库的适体,经聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增产生次级文库.然后将终轮次的次级ssDNA文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级结构.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示:每轮筛选出来的次级ssDNA文库PCR扩增产物均可见到清晰的DNA条带.经过13轮的反复筛选,次级ssDNA文库与细胞结合的荧光强度从2.14％上升到51.12％,至第13轮趋于稳定状态.对30个克隆子序列测定结果显示:22个适体一级结构分别含有AAGTA,TATCT,AGATG和AAATT 4个保守序列,另8个适体无此保守序列.二级结构模拟结果显示:30个适体含有4种不同的茎环、凸环模拟结构.结论:C-SELEX技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选,筛选到的AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞适体有望用于白血病的诊断与治疗.
关键词： 细胞-指数富集配体系统进化 急性髓系白血病 M2型 适体 -
小胶质细胞表型在反复轻度脑创伤模型大鼠中的变化研究
目的 探讨大鼠反复轻度脑创伤(rmTBI)后小胶质细胞表型的变化. 方法 雄性SD大鼠60只,按随机数字表法分为假手术组、伤后1周、2周、4周和6周组,每组12只.后4组大鼠采用控制性皮质撞击(CCI)法制备大鼠rmTBI模型,假手术组仅开骨窗,不做打击.分别于伤后不同时间每组取6只大鼠,免疫荧光染色检测受损脑皮层Iba-1阳性小胶质细胞,流式细胞技术检测受损脑组织中小胶质细胞表型的变化. 结果 与假手术组比较,伤后1周、6周组大鼠受损脑组织皮层Iba-1阳性小胶质细胞比例显著增加(分别为19％、12％),差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测显示CD45low/CD11b+细胞即小胶质细胞,约占CD11b+细胞的90％;与假手术组比较,rmTBI伤后1、2、4和6周M1型小胶质细胞增加,差异有统计学意义(P＜0.05),其中伤后6周M1型小胶质细胞增加为明显;与假手术组比较,rmTBI伤后1、2、4周M2型小胶质细胞均增加,差异有统计学意义(P＜0.05),其中伤后2周M2型小胶质细胞增加为显著,6周时基本趋于基线水平.结论 大鼠rmTBI后存在一定程度的小胶质细胞表型的变化,其不同表型的差异表达可能在大鼠rmTBI的病理生理过程中发挥重要作用.
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小胶质细胞M2型极化相关的调节分子研究进展
中枢神经系统(central nervous system,CNS)的固有免疫反应是对损伤、炎症以及退行性疾病产生的首要免疫应答.多种CNS疾病,如创伤、脑炎、帕金森病(Parkinson's disease,PD)、阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)、多发性硬化(multiple sclerosis,MS)等,其发展转归与CNS的免疫与炎症变化有着密切联系.由于免疫与炎症反应的双刃剑效应,对CNS的免疫炎症的调控一直难以解决,而近年来对CNS定居的非专职免疫细胞-小胶质细胞的极化现象研究为CNS固有免疫反应的调节带来新的解题思路.
