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S-2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯对白血病细胞系HL-60细胞增殖与凋亡的影响
本研究探讨S-2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯(WR-2721,Amifostine)对白血病细胞系HL-60细胞增殖与凋亡的影响.采用XTT法检测细胞增殖及药物敏感性,用annexin/PI双染色法检测细胞凋亡,用流式细胞术检测细胞周期.结果表明:WR-2721对HL-60细胞增殖呈浓度时间依赖性抑制作用,0.5 mmol/L WR-2721 37℃处理30分钟后的HL-60细胞对VP16的敏感性增强,IC50由52.5μg/ml下降为40.5 μg/ml.WR-2721 5.0 mmol/L作用72小时后,早期细胞凋亡由(5.5±1.9)%增加至(48.5±8.4)%(P＜0.001),晚期细胞凋亡由(1.2±0.5)%增加至(39.0±4.0)%(P＜0.001),并出现G2-M期细胞阻滞.结论:S-2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯能增强HL-60细胞对VP16的敏感性,并可通过G2-M期阻滞,诱导细胞凋亡,从而抑制HL-60细胞的增殖.
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广枣黄酮槲皮素和山萘酚促人白血病HL-60细胞系凋亡及其机制探讨
本研究旨在探讨广枣黄酮主要成份槲皮素及山萘酚的抗白血病作用及其可能的作用机制.采用MTT法测定槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测药物对HL-60细胞周期的影响及其诱导凋亡作用;通过Western blot观察药物诱导的HL-60细胞凋亡中survivin蛋白表达情况.结果表明,槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增长有显著的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(槲皮素相关系数r=0.77,山萘酚相关系数r=0.76).给药后HL-60细胞发生G2/M期阻滞和凋亡.药物诱导HL-60细胞survivin蛋白表达下调.结论:广枣黄酮的主要成份槲皮素及山萘酚有明显的抗白血病作用,且槲皮素诱导凋亡作用强于山萘酚.其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、细胞周期阻滞、抑制survivin蛋白而诱导细胞凋亡.
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青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究
本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化.采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况.结果表明:青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低.结论:青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子.
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尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制影响的研究
为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制的影响,采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带,用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达.结果表明,实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带.Bcl-2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降,而Bax蛋白的表达则逐渐增加,Bcl-2/Bax比值逐渐下降,8小时就与对照组出现差异(P＜0.05).结论:尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL-60细胞凋亡,诱导其凋亡的机制与下调bcl-2及上调bax基因的蛋白表达有关.尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL-60细胞凋亡,其机制与协同下调bcl-2的表达有关.
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重组人粒细胞集落刺激因子对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响
为了研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对阿糖胞苷(Ara-C)诱导HL-60细胞凋亡的影响,体外培养HL-60细胞,加入rhG-CSF和(或)Ara-C,瑞氏染色观察细胞形态变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察细胞凋亡情况,MTT实验检测细胞增殖活性.结果表明:加入rhG-CSF后Ara-C诱导的HL-60细胞的凋亡率升高(P＜0.01),而MTT实验的OD值降低(P＜0.01).结论:rhG-CSF有诱导HL-60细胞凋亡的作用,rhG-CSF可以促进Ara-c诱导HL-60细胞凋亡的作用.
关键词： 重组人粒细胞集落刺激因子 细胞凋亡 HL-60细胞系 -
参术抗白血病细胞作用的研究
目的:探讨参术对白血病细胞有无杀伤或诱导凋亡及分化作用,从细胞和分子水平探讨其作用机理,为寻找一种选择性杀伤白血病细胞、高效低毒的诱导凋亡及分化的中药方剂提供实验依据.方法:a.通过MTT试验、台盼蓝拒染检测活细胞数,观察不同浓度参术作用后HL-60细胞增殖的改变;b.通过细胞形态学、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳进行细胞凋亡的检测和观察;c.以药物维甲酸为阳性对照组,采用6.25mg/mL浓度参术作用HL-60细胞72 h,通过细胞形态学观察、硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、细胞吞墨实验来观察参术作用后HL-60细胞分化情况.结果:a.在6.25～50 mg/mL浓度范围内,参术对HL-60细胞的增殖有抑制作用并呈剂量、时间依赖关系,半数抑制浓度约为25.0 mg/mL,b.典型的细胞形态学改变、DNA琼脂糖凝胶电泳条形梯带的出现和流式细胞仪检测亚G1峰的检出等证实参术能诱导白血病细胞凋亡;c.NBT还原实验和细胞吞墨实验:在参术(浓度为6.25 mg/mL)作用72 h后,NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为50.8%和56.0%,明显高于对照组(分别为7.8%和8.0%)P＜0.05.全反式维甲酸(10-6mol/L)作用组NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为55.3%和69.0%,稍高于参术作用组,但无统计学差异P＞0.05.形态学观察可见细胞向成熟细胞阶段分化.结论:本实验发现参术抑制HL-60细胞增殖并呈剂量、时间依赖关系,既能影响细胞周期时相,使细胞滞留于G1期,诱导HL-60细胞凋亡,又能促进HL-60细胞分化,其诱导分化能力与阳性药物维甲酸相近.
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干扰素α-2b对人类早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的抑制增殖与促进凋亡的作用
背景:儿童急性白血病复发的主要根源是微小残留白血病细胞的存在,在试图清除微小残留病的众多治疗方法中,免疫生物治疗越来越受重视.以前的研究发现干扰素α-2b能有效抑制神经母细胞瘤和恶性淋巴瘤患儿体内肿瘤细胞的增长,其能否抑制白血病细胞的增长?目的:通过体外实验观察干扰素α-2b对白血病细胞的影响.设计:以人类早幼粒白血病细胞株HL-60为观察对象,对比观察实验.单位:青岛大学医学院附属医院儿科研究所细胞培养室、免疫实验室、细胞室.材料:HL-60细胞系由山东省医学科学院基础所提供.干扰素α-2b购自Megagene公司,FITC-兔抗鼠Ig工作液(CatEK001)和CD13抗人单克隆抗体工作液(Cat.DK013Y)购自协和干细胞基因工程有限公司.方法:体外建立HL-60细胞培养体系,调整细胞浓度为1×109 L-1,分为对照组和实验组,各实验组中加入终含量分别为5×105,1×106,2×106,5×106,1×107 U/L的干扰素α-2b,对照组加入等量生理盐水,继续培养48 h.光镜下采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化,采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色观察细胞凋亡,通过CD13蛋白表达测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化,通过MTT实验检测HL-60细胞增殖活性.主要观察指标:根据HL-60细胞核染色质是否均匀一致及着色情况,判断细胞是否发生凋亡;根据酶标仪检测的吸光度(A值)判断HL-60细胞增殖情况;根据CD13阳性细胞数量判断HL-60细胞成熟程度.结果:①HL-60细胞凋亡:培养48 h,当干扰素α-2b为5×105 U/L时,以早期凋亡细胞为主,当干扰素α-2b含量为1×107 U/L时,以晚期凋亡细胞为主,HL-60细胞凋亡率均高于对照组,差异有显著性意义(χ2=23.79,29.57,P＜0.01).②HL-60细胞增殖情况:当干扰素α-2b含量为2×106 U/L和1×107 U/L时,A值均低于对照组,差异有显著性意义(t=5.65,11.31,P＜0.01).③HL-60细胞成熟程度:当干扰素α-2b含量为1×106 U/L和1×107 U/L时,CD13+细胞百分比均低于对照组,差异有显著性意义(χ2=26.89,14.73,P＜0.01).结论:干扰素α-2b有促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟的作用.
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RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达
目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础.方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析.以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析.结果:经Acc 65Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果优,干扰效率达到62%.结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础.
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尼莫地平对HL-60细胞凋亡的影响及其机制
目的研究尼莫地平(NMDP)对HL-60细胞的作用及其机制.方法取对数生长期HL-60细胞并调整细胞浓度为5×108/L,分为对照组和实验组,置24孔板培养,每孔加入HL-60细胞培养液1.5 mL,实验组各孔再加NMDP 0.01 g/L.分别培养0、8、16、24 h,通过倒置显微镜观察细胞的动态变化;采用Giemsa染色光学显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的碎片;流式细胞仪检测DNA含量;细胞免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达.结果实验组细胞从培养8 h起,可见不同程度的变形、出泡,细胞和小泡仍保持膜的完整性,随着培养时间延长,出泡细胞增加,细胞体积变小,部分细胞裂解;对照组细胞一直无形态学变化.Giemsa染色可见实验组细胞核膜裂解,染色质呈紫红色或蓝紫色,分割成块状,浓缩、靠近核膜,呈边集现象,并有典型的凋亡小体形成;对照组细胞保持大小一致,胞内染色质呈紫红色或蓝紫色,分布均匀.DNA凝胶电泳显示,实验组在8、16、24 h出现典型的梯形带.实验组细胞的凋亡率随时间延长而增加,自8 h起与对照组差异有显著意义(t=15.06～20.75,P＜0.01).实验组Bcl-2蛋白表达下降,16、24 h与对照组比较差异有显著意义(t=3.66、5.62,P＜0.05);Bax蛋白表达升高,与对照组比较,16、24 h有显著性差异(t=4.13、7.55,P＜0.01).Bcl-2/Bax蛋白表达比值逐渐下降,与对照组比较,8、16、24 h差异皆有显著性(t=5.32～7.76,P＜0.05).结论NMDP可诱导HL-60细胞凋亡.Bcl-2/Bax蛋白比值下降,可能是NMDP诱导HL-60细胞凋亡的机制之一.
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重组人粒细胞集落刺激因子对HL-60细胞影响的研究
目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对HL-60细胞的影响.方法瑞氏染色观察细胞形态的变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察凋亡情况,NBT和CD13测定观察成熟分化情况,MTT实验观察增殖活性.结果加入rhG-CSF 48 h后,HL-60细胞凋亡率升高,增殖活性下降,而且随着rhG-CSF浓度的升高,这种作用更加明显.成熟分化特征变化不明显.结论 rhG-CSF有促进HL-60细胞凋亡并抑制其增殖的作用.
关键词： 重组人粒细胞集落刺激因子 凋亡 HL-60细胞系 -
姜黄素在急性髓性白血病HL-60细胞中对凋亡调控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影响
为了探讨姜黄素在诱导急性髓性白血病HL-60细胞凋亡时，Bcl-2基因家族成员是否参与了其调控过程。选用Bcl-2基因家族成员Mcl-1、Bax、Bak蛋白为研究对象，SABC法检测其表达状况；用流式细胞术测定DNA直方图中Sub-G1峰值、末端TdT酶标技术检测TUNEL细胞阳性率。发现当25 μmol/L姜黄素分别处理HL-60细胞24 h、36 h、48 h后，可使Mcl-1表达下调，Bax和Bak上调，呈时间依赖性。在各处理组，Mcl-1、Bax、Bak表达同对照组相比有显著差异(F值分别为3.443、8.328；P值分别为0.040、0.001)。结果表明：Bcl-2基因家族成员确实参与了姜黄素诱导HL-60细胞凋亡的调控过程。
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急性早幼粒白血病HL-60细胞动物模型的建立与鉴定
目的建立人急性早幼粒白血病HL-60细胞系重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠移植瘤模型,探讨HL-60细胞系在SCID小鼠体内的生物学行为.方法分别在SCID小鼠腹腔或静脉注入5×106个白血病细胞,应用病理组织学、染色体核型分析等方法监测SCID小鼠外周血、肝、脾、骨髓中的白血病细胞.结果腹腔或静脉注射均可在SCID小鼠体内形成白血病移植瘤.腹腔注射瘤块生长快, 生存周期比静脉注射短.结论 SCID小鼠中白血病增殖和浸润程度反映了白血病细胞基本生物学特征, 提示HL-60/SCID小鼠模型为良好的肿瘤体内研究模型.
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血管内皮生长因子基因反义核酸设计及其对HL60细胞生长的影响
目的:用计算机设计筛选出血管内皮生长因子(VEGF)的高效反义核酸;用实验方法研究VEGF反义核酸对HL60细胞生长的影响.方法:用RNAstructure(version 3.7)软件,选择总自由能(Overall △G37)的相对低的反义核酸,共计7条,长度18～20核苷酸,全硫代修饰;细胞培养72h,采用胎盼蓝拒染法观察存活细胞,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,分析反义核酸对HL60细胞的作用.结果:筛选出6条反义药物对HL60细胞生长有明显抑制作用,其中4条优于阳性对照组(A2);A7组细胞生长抑制率达41.74%.培养液中VEGF蛋白表达抑制率达47.81%.Overall△G32与反义核酸活性密切相关(r=-0.842,P＜0.01).结论:计算机辅助设计有助于获得更好的反义药物,VEGF反义核酸可抑制HL60细胞生长及VEGF蛋白表达,VEGF可能成为白血病治疗的新靶点.
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五种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响
目的:体外研究5种中药注射液(榄香烯注射液、鸦胆子油乳注射液、康莱特注射液、生脉注射液和参附注射液)对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响.方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定药物对细胞增殖的影响.结果:5种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖的抑制强度依次为:榄香烯注射液＞鸦胆子油乳注射液＞康莱特注射液＞生脉注射液＞参附注射液.结论:榄香烯注射液和鸦胆子油乳注射液对HL-60细胞系具有显著的抑制作用,具有一定的研究价值.本实验只是从体外的角度观察了5种中药注射液对HL-60细胞增殖的影响,至于其临床应用的具体实际效果,尚有待于进一步的临床观察和验证.
