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重组结核抗原痘苗病毒免疫次数和免疫途径对免疫原性的影响
卡介苗(BCG)是目前用于预防结核病的惟一疫苗,但其对成年人结核病的预防效果不理想.本研究前期工作已构建了5种不同类型的表达结核杆菌特异抗原的重组痘苗病毒,其免疫小鼠2次后均可激发针对结核杆菌抗原的特异性细胞免疫.然而,重组安卡拉痘苗病毒(MVA)是一活的病毒载体[1],此重组病毒是否能多次免疫动物以及多次免疫动物后能否产生更有效的免疫反应尚不清楚.
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结核分枝杆菌抗原ESAT-6和CFP-10及rCFP10-ESAT6融合基因在大肠埃希菌中的表达及比较
目的 构建结核早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及重组CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融合蛋白的原核表达载体,获得纯化蛋白并比较三者表达特点.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增ESAT-6、CFP-10基因片段,融合PCR技术扩增rCFP10-ESAT6片段,分别连接到pGEM-T载体,测序正确后插入原核表达载体pET-32a(+)或 pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化3种蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析验证目的蛋白的抗原特异性.结果 pET-32a(+)-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达,分子量为31 kD,目的蛋白约占菌体总蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重组蛋白以可溶性形式表达,分子量分别为33 kD和28 kD,目的蛋白分别占菌体总蛋白的73%和48%;Western blot证实其均具有良好的抗原性.亲和层析法获得了纯度较高的重组蛋白.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融合蛋白及rCFP10-ESAT6重组蛋白,为深入研究其免疫原性和生物学特性奠定了基础.
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胸腔积液腺苷脱氨酶活性检测在结核性胸膜炎临床诊断中的应用
结核性胸膜炎是临床上常见的结核病类型,检查方法繁多,如痰常规查抗酸杆菌,结核抗原、抗体检测,胸膜活检等.自20世纪70年代末以来,腺苷脱氨酶(ADA)活性检测日益用于临床,多数人认为胸腔积液ADA活性检测在结核性胸膜炎临床诊断中具有肯定的临床意义,但对ADA活性是否能作为疗效判断指标尚未见报道.现将2003年至2004年我院对90例结核性胸膜炎胸腔积液ADA活性检测的临床结果分析报告如下.
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用基因工程抗原检测结核患者血清抗体(金标方法)的临床应用
现市场上供应的结核快速诊断试剂盒中应用的抗原均从结核杆菌中提取[1~3].目前我国城市人口中的大部分人均接受过卡介苗的注射,因此有部分假阳性存在.尤其刚接种不久的人群中假阳性率更高.本文应用基因工程表达结核抗原A60,将其应用斑点金免疫渗滤试验[4]以检测结核血清抗体.对活动性肺结核病人、正常人及非结核性病人的血清标本用该方法进行检测,现将结果报道如下.
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脑脊液结核抗原与抗结核抗体的临床诊断价值
ELISA测脑脊液TB-Ag和TB-Ab在结脑的免疫学诊断中具有重要意义,但儿童结脑未见报道.本文拟就29例患儿脑脊液的TB-Ag和TB-Ab的平行观察,以六项临床评价指标对二法在儿童结脑的临床诊断价值进行比较和探讨,报道如下:
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四种结核抗原的诊断效能分析与建立结核抗原诊断效能的评价体系
目的 通过对4种结核分枝杆菌抗原的诊断效能分析,初步建立其诊断效能评价体系,为结核病免疫学诊断筛选特异、有效抗原提供根据.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和受试者工作特征曲线法(Receiver Operating Characteristic,ROC)建立结核抗原诊断效能评价体系.然后,对4种重组结核抗原的诊断效能进行分析,得出各种抗原组合的检测阳性率,进而评价得出佳的抗原组合方式.结果 该结核抗原诊断效能的评价体系包括佳ELISA反应体系、ROC曲线的建立、确定各种抗原佳临界值(Cut-off value)、佳抗原组合方式的确定.ELISA检测体系的中CFP10、38kDa、MPT64和Ag85B的佳蛋白包被浓度分别为0.5μg/mL、2 μg/mL、2 μg/mL和1 μg/mL,佳血清稀释度分别为1∶250、1∶225、1∶225和1∶225;对这4种结核抗原及其不同组合的ELISA检测诊断效能进行了评价,以组合抗原的诊断效能较好,佳组合为38kDa+CFP10+MPT64,阳性率为64.7%.结论 成功建立了结核抗原诊断效能评价体系.结果 显示ELISA检测中以多组分抗原组合为宜.
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结核抗原快速检测在艾滋病合并结核病诊断中的应用
目的:通过与传统的结核病实验室诊断方法(直接涂片抗酸染色、结核培养)的比较,评价结核抗原检测在结核病快速诊断中的应用价值.方法:对48例临床确诊的艾滋病合并结核病患者的痰标本进行抗酸染色检测和培养,外周血标本用于结核培养,并将分离的外周血血清用于检测结核抗原,对三种方法的结果进行分析比较.结果:艾滋病合并结核病患者的痰检组和血培养的阳性率分别是21.42%(9/42)、4.35% (2/46),特异性分别为100%和50.0%.结核抗原血清学检测组阳性率和特异性分别为31.11%(14/45)、100%.单个样本阳性率表明,检测血清中结核抗原方法的阳性率高,阳性率低的是血培养检测组.结论:血清抗原检测结核分枝杆菌是一种简单、快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法.
关键词: 结核分支杆菌 结核抗原 抗酸染色 艾滋病合并结核病感染