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人工合成拟Smac多肽增强膀胱癌细胞化疗敏感性的实验研究
背景与目的: Smac是目前发现的惟一能直接同时抑制多个IAPs家族成员活性的凋亡相关蛋白,其N端的4个氨基酸残基AVPI(Ala-Val-Pro-Ile)是重要的促凋亡结构域,我们通过人工合成可穿透细胞的促凋亡融合多肽SmacN7,探讨其对膀胱痛化疗药物敏感性的促进作用.方法: 噻唑蓝(MTT)检测SmacN7融合多肽对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌T24细胞的相对存活率的影响;Annexin V/PI双标流式细胞术检测T24细胞的凋亡:Western印迹检测SmacN7融合多肽与MMC联用后T24细胞内XIAP、Caspase-3的表达;同时检测Caspase-3活性及SmacN7融合多肽与MMC联用对T24细胞的杀伤作用.结果: SmacN7融合多肽能穿透细胞并与内源性XIAP结合,增加低剂量MMC诱导的T24细胞凋亡并呈时间和浓度依赖性;并能显著降低细胞内xlAP的表达水平,增强Caspase-3的表达及活性;在24 h和48 h,SmacN7+MMC组与单用MMC组相比,T24细胞的存活率分别降低55%和72.7%.结论: 人工合成可穿透细胞的促凋亡融合多肽SmacNT能促进化疗药物诱导的膀胱癌T24细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强膀胱癌细胞对MMC的化疗药物敏感性.
关键词： Smac/DIABLO 合成肽 膀胱癌 化疗敏感性 -
Smac合成肽靶向下调凋亡抑制蛋白XIAP提高胰腺癌细胞化疗敏感性
目的:探讨包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能否增强胰腺癌细胞的化疗药物敏感性及其作用机制.方法:化学合成SmacN7细胞可穿透融合多肽,共沉淀实验观察SmacN7细胞穿透肽与胰腺癌Panc-1细胞内的XIAP的相互作用,应用流式细胞术检测SmacN7细胞穿透肽与顺铂、5-FU联用对Panc-1细胞凋亡的影响,MTT法检测SmacN7细胞穿透肽应用前后Panc-1细胞的化疗药物敏感性.结果:SmacN7融合多肽能与内源性XIAP结合,明显下调Panc-1细胞XIAP表达水平,显著增强顺铂或5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,使其对顺铂、5-FU的药物半数抑制浓度(IC50)分别降低1.98倍、2.62倍.结论:应用包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能靶向下调胰腺癌Panc-1细胞XIAP表达,显著提高其化疗敏感性,为胰腺癌的生物治疗协同化疗提供了新思路.
关键词： Smac/DIABLO X-相关凋亡抑制蛋白 合成肽 胰腺癌 化疗敏感性 -
线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO及其与肿瘤的关系
Smac/DIABLO即第2个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活剂/低pI的IAP直接结合蛋白,是近年发现的一种线粒体促凋亡蛋白,存在于线粒体并通过拮抗凋亡抑制蛋白(IAPs)的作用激活caspase-9和caspase-3而诱导细胞凋亡,并可促进肿瘤坏死因子相关的凋亡促使配体(TRAIL)诱导的凋亡.Smac/DIABLO还可以通过其N-或C-末端促进肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤免疫及影响肿瘤细胞周期等机制抗肿瘤,并且增加肿瘤对放化疗的敏感性.本文主要就Smac/DIABLO的结构功能、作用机制及与肿瘤发生和治疗的关系作一综述.
关键词： 肿瘤 Smac/DIABLO 线粒体蛋白质类 促凋亡蛋白质类 凋亡抑制蛋白类 -
柔肝通络汤对MCAO大鼠脑组织XIAP及Smac表达的影响
目的:探讨柔肝通络汤对大脑中动脉阻断(MACO)所致脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织X-连锁凋亡蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、Smac/DIABLO表达的影响.方法:将126只健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组及柔肝通络汤高、中、低剂量组.采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,各组分别予生理盐水和不同剂量柔肝通络汤灌胃干预7d,采用蛋白免疫组化染色(SP)法分别观察缺血再灌注后3h、6h、12h、24h、48 h各组大鼠脑组织XIAP、Smac/DIABLO的蛋白表达量及其关系曲线.结果:XIAP及Smac/DIABLO在MCAO模型中广泛表达,明显高于假手术组(P＜0.05);高、中剂量柔肝通络汤组XIAP蛋白表达量显著高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),Smac/DIABLO蛋白表达量明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01);两者蛋白表达动态趋势呈负相关(r=-0.999,P＜0.001).结论:XIAP及其负性调控因子Smac/DIABLO参与脑缺血/再灌注损伤后神经元凋亡的调控;柔肝通络汤对脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用,上调XIAP的表达、下调Smac表达是其神经保护作用的机制之一.
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褪黑素对重症急性胰腺炎的保护作用
目的 探讨褪黑素(melatonin,MT)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA表达的影响及可能机制.方法 54只SD大鼠随机分成假手术(SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)组以及MT干预SAP(MS)组,每组18只.通过胰胆管逆行注射3.5%脱氧胆酸钠方法 制备大鼠SAP模型,MS组制造模型前30 min腹腔注射MT.收集各模型组3 h、6 h、12 h标本,观察胰腺组织,检测胰腺组织细胞凋亡.实时定量(real-time)PCR分析胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达.结果 SAP组和MS组胰腺组织损伤较SO组严重.与SAP组相比,在3 h、6 h、12 h各时点MS组胰腺病理损伤明显减轻,细胞凋亡指数下降(P<0.05),胰腺组织中Smac/DIABLO mRNA表达下调(P<0.05),XIAP mRNA表达上调(P<0.05).结论 MT能明显改善SAP胰腺组织损伤,对急性胰腺炎有保护作用;这可能与调节Smac/DIABLO、XIAPmRNA的表达有关.
关键词： 褪黑素 急性胰腺炎 细胞凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 -
MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应
目的 探讨miR-24在结肠癌中发挥的作用并研究其是否和多柔比星的体外治疗有关.方法 用RT-qPCR法检测miR-24在结肠癌患者血浆中及结肠癌细胞系中的表达水平.MTT法检测miR-24反义核酸对多柔比星杀伤结肠癌细胞能力的影响.利用生物信息学、定量PCR及Western blot法验证miR-24是否调节结肠癌细胞BIM的表达.运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot法研究miR-24反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路.结果 结肠癌患者血浆及结肠癌细胞系中miR-24表达水平显著升高.miR-24反义核酸可显著增强多柔比星对SW480细胞的杀伤活性.定量PCR及Western blot实验表明miR-24的靶基因可能为BIM.miR-24反义核酸联合多柔比星可引起SW480细胞线粒体膜电位的丧失并诱导线粒体内Smac/DIABLO的释放,进而引起caspase-3的活化和凋亡的发生.转染BIM siRNA后miR-24反义核酸联合多柔比星对SW480细胞的凋亡诱导效应显著降低.结论 MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应.
关键词： miR-24 BIM Smac/DIABLO SW480 多柔比星 -
Smac基因过表达联合天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响及其相关机制的研究
目的 探讨Smac基因过表达联合天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌Caski细胞凋亡影响及其相关机制.方法 构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/Smac,稳定转染入宫颈癌Caski细胞后,筛选Smac高表达的细胞株Caski/Smac；RT-PCT和Western blot法分别用于测定Smac基因在mRNA和蛋白水平上的表达水平；MTr法观察Smac高表达对Caski细胞生长及对TCS敏感性的影响；流式细胞仪分析TCS对Caski细胞凋亡的影响.结果 ①TCS能诱导Caski细胞内Smac基因表达,且呈时间与浓度依耐性；②成功获得Smac基因高表达的细胞株Caski/Smac；③Smac高表达使Caski细胞生长速度明显减慢(P＜0.01),且对TCS的敏感性显著性增加(P＜0.01)；④TCS作用于Caski细胞可诱发其凋亡,但Smac高表达的细胞凋亡更为明显,差异具有显著性(P＜0.01).结论 Smac基因过表达能增加Caski细胞对TCS的敏感性,在同等药物浓度下能更明显抑制细胞增殖和促进其凋亡.此外,TCS也能够诱导细胞中Smac基因表达,这可能是其促细胞凋亡的机制之一.
关键词： Smac/DIABLO 宫颈癌细胞 天花粉蛋白 基因 -
Smac/DIABLO与肿瘤治疗
0引言Smac/DIABLO被称为第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspase,Smac)或低等电点IAP直接结合蛋白(direct IAP-binding protein with low Pi,DIABLO),是2000年才发现的一种存在于线粒体并且调节细胞凋亡的蛋白质[1],经过仅4年来的研究,现在成为了细胞凋亡研究中的一个热点,并且在肿瘤治疗方面也有重要应用.
关键词： Smac/DIABLO 线粒体 细胞凋亡 肿瘤治疗 -
Smac/DIABLO在大鼠缺血皮质的变化及意义
目的:观察大鼠缺血区皮质Smac/DIABLO的动态变化,探讨Smac/DIABLO在缺血后神经元凋亡过程中的可能作用机制.方法:SD大鼠130只,随机分为对照组50只和模型组80只,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot方法分别从mRNA和蛋白水平测定2组大鼠缺血区皮质在脑缺血后不同时间点Smac/DIABLO的表达变化.结果:Smac/DlABLO基因转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性.RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血后3 h就有明显的Smac/DIABLOmRNA表达上调,持续至24 h后逐渐下降,48 h时恢复至缺血前水平;免疫组化和Western blot显示在脑缺血后3 h Smac/D1ABLO蛋白表达增加,6 h蛋白表达至高峰(P<0.01),48 h基本恢复至缺血前水平.Smac/DlABLO mRNA转录水平改变提前于Smac/DlABLO蛋白表达.结论:Smac/DIABLO可能在脑缺血后神经细胞凋亡过程中起重要作用.
关键词： 缺血性脑损伤 Smac/DIABLO 细胞凋亡 -
促红细胞生成素对颅脑损伤后大鼠脑组织中XIAP和Smac/DIABLO表达的影响
目的 观察重组人促红细胞生成素(r-HuEPO)对颅脑损伤后大鼠脑组织中抗凋亡因子X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和促凋亡因子第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac/DIABLO)表达的影响,并探讨二者在r-HuEPO抗凋亡中的作用.方法 采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型,在伤后不同时间点用末端标记原位细胞凋亡检测法(TUNEL法)检测细胞凋亡,用免疫组织化学法检测XIAP和Smac/DIABLO表达的变化.结果 与假手术组相比,颅脑损伤后打击周边区的细胞凋亡数显著增加fP<0.011,XIAP和Smac/DIABLO表达水平明显升高(P<0.05);与对照组相比,r-HuEPO治疗组XIAP的表达在2～72 h时间点明显升高(P<0.05),Smac/DIABLO的表达和细胞凋亡数在6h至7d时间点显著下降(P<0.05).结论 r-HuEPO可能通过促进XIAP的表达和抑制Smac/DIABLO的表达减少颅脑损伤后的细胞凋亡,发挥脑保护作用.
关键词： 重组人促红细胞生成素 颅脑损伤 XIAP Smac/DIABLO -
大鼠脑缺血区皮层的Smac/Diablo变化
目的 观察大鼠缺血区皮层Smac/Diablo的动态变化,并探讨其在缺血后神经元凋亡过程中的可能作用.方法 采用RT-PCR,Western blot方法 分别测定大鼠脑缺血后不同时间点在缺血区皮层Smac/Diablo mRNA和蛋白水平的表达水平.结果 Smac/Diablo基因转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性;RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血3 h就有明显的Smac/Diablo mRNA表达上调,6 h达高峰,持续至24 h后逐渐下降,48 h时恢复至缺血前水平;western blot显示在脑缺血后3 h有Smac/Diablo蛋白表达的增加,6 h时Smac/Diablo蛋白表达至高峰(P＜0.01),48 h基本恢复到缺血前水平.结论 Smac/Diablo在脑缺血损伤后的病理生理过程中具有重要作用.
关键词： 缺血性脑损伤 Smac/DIABLO 细胞凋亡 -
附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究
目的:建立体外缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制.方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组( Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组.MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达.结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加.与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值.结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关.
关键词： 附子多糖 缺氧/复氧损伤 细胞凋亡 Smac/DIABLO -
Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制.方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡.应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生.用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布.分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Westem印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平.结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多(P＜0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡.
关键词： 凋亡 Smac/DIABLO X-连锁凋亡抑制蛋白 肾小管上皮细胞 腺苷三磷酸 -
Smac/DIABLO在子宫内膜癌中的表达及促凋亡机制
目的 检测Smac/DIABLO在子宫内膜癌中的表达并探讨其发挥作用的可能机制.方法 荧光定量PCR检测Smac/DIABLO在子宫内膜癌、非典型增生内膜和正常内膜中的不同表达,分析其与内膜癌临床病理分期的关系.在子宫内膜癌Ishikawa细胞中上调Smac/DIABLO表达,Western blot检测通路相关蛋白Caspase-3,7,9表达.结果 Smac/DIABLO在子宫内膜癌组表达量明显减少(P<0.01),其表达与FIGO分期、淋巴结转移及肌层浸润深度有关(P<0.05),与年龄、组织分化程度无关(P>0.05).过表达Smac/DIABLO后通路相关蛋白Caspase-3,7,9表达量明显增加(P<0.01,P<0.05).结论 Smac/DIABLO表达与内膜癌FIGO分期、淋巴结转移及肌层浸润深度相关,推测其通过线粒体和死亡受体介导的两条凋亡通路发挥作用.
关键词： 子宫内膜癌 Smac/DIABLO 过表达 凋亡通路 Caspase -
促凋亡因子Smac/DIABLO的研究进展
促凋亡因子Smac/DIABLO,由于其独特的分子特征及其野生型蛋白独有的双重生物学功能,决定了它在肿瘤细胞的凋亡诱导中具有十分重要的作用;而且,Smac/DIABLO在体外实验中已成功应用于肿瘤的治疗.运用由它衍生的含AVPI的小分子肽为原型的药物,必将成为肿瘤治疗的一个新举措.
关键词： Smac/DIABLO Caspase 凋亡 -
促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定
目的 利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白.方法 ①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO.②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度.③对成人肝cDNA文库的筛选.选择能同时激活His、Ura、LacZ 3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定.结果 成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25 mmol/L.经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用.结论 Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控.
关键词： Smac/DIABLO NR4A1 酵母双杂交 -
Smac--一种新的促凋亡蛋白
Smac(DIABLO)是一种新发现的线粒体蛋白,在细胞发生凋亡时与细胞色素c一同释放入胞浆,在细胞色素c/Apaf-1/Caspase-9凋亡途径中促进Caspase的激活.Smac通过解除凋亡抑制蛋白对Caspase 3,-7,-9的抑制作用而诱导凋亡.Smac高表达可增加细胞对凋亡刺激的敏感性.Smac可促进化疗药物、TNF-related apoptosis-inducing ligand诱导的凋亡,对肿瘤的治疗有重要的意义.
关键词： Smac/DIABLO 细胞凋亡 凋亡抑制蛋白 肿瘤 -
Smac/DIABLO与Livin在乳腺癌组织表达及其临床意义
目的:探讨凋亡促进因子Smac/DIABLO和凋亡抑制因子Livin在人乳腺癌组织中的表达及相关性,分析其与乳腺癌转移复发的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测76例乳腺癌组织和相应的癌旁组织中Livin 和Smac 蛋白的表达情况.结果:76例乳腺癌组织中Livin蛋白表达的阳性率为67.8 %(51/76),显著高于相应的癌旁组织的59.2%(36/76),P<0.05;乳腺癌组织中Smac表达为52.6 %(40/76),显著低于癌旁组织的75.0 %(57/76),P<0.05.两者的表达与组织学分级、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移以及术后复发密切相关,P<0.05.Livin和Smac表达呈显著负相关,γ=-0.238,P<0.05.结论:Livin 的高表达及Smac/DIABLO 的低表达或失活可能在乳腺癌的发生、发展中起重要作用.
关键词： 乳腺癌 Smac/DIABLO Livin -
大鼠脑损伤后XIAP与Smac/DIABLO表达的实验研究
目的:观察大鼠颅脑损伤后脑组织中XIAP与Smac/DIABLO表达变化及神经细胞凋亡,探讨颅脑损伤后神经细胞凋亡机制.方法:36只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(sham组)及脑损伤组(TBI组),采用自由落体法建立大鼠脑损伤模型,用免疫组织化学方法检测XIAP、Smac/DIABLO的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与sham组相比,TBI组XIAP与Smac/DIABLO的表达和TUNEL(+)细胞数均显著增加(P＜0.05).结论:颅脑损伤可诱导XIAP与Smac/DIABLO的表达,提示XIAP对脑损伤后神经细胞继发凋亡损害起保护作用,而Smac/DIABLO则促进神经细胞的凋亡.
关键词： 颅脑损伤 XIAP Smac/DIABLO 凋亡
