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microRNA-10a对脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg免疫功能的影响
目的 探讨脓毒症小鼠CD4+CD25+Treg(regulatory cell)细胞中microRNA-10a(miR-10a)表达规律及与细胞免疫功能的关系.方法 采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)模型,分别于术后1、3、5、7d处死小鼠,无菌留取脾脏,免疫磁珠法分选CD4+T细胞与CD4+CD25+T细胞(CD4+CD25+Treg).流式细胞术检测CD4+CD25+Treg胞内叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3(Forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3),CCK-8法检测脾效应T淋巴细胞增殖,实时定量PCR(Real-time PCR)检测Treg中miR-10a的基因表达水平.小鼠尾静脉注射慢病毒下调miR-10a,观察小鼠免疫功能.数据采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理,两组样本比较采用独立样本f检验,多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett-t检验.结果 正常组小鼠CD4+CD25+Treg细胞在CD4+T细胞中的比例为(7.34±1.2)％,造模后脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg比例1、3、5、7d明显升高(P＜0.05).与假手术组相比,脓毒症小鼠Foxp3的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)也明显高于假手术组(P＜0.05).Real-time PCR检测CD4+CD25+Treg中miR-10a的表达.结果发现假手术组小鼠与正常组小鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05).脓毒症小鼠Treg中miR-10a表达较假手术组升高(P＜0.05).脓毒症鼠尾静脉注射携带miR-10a抑制序列的慢病毒后,CD4+CD25+Treg/CD4+T比例明显升高(P＜0.05),且Foxp3的平均荧光强度也明显增强(P＜0.05),CD4+T细胞的增殖能力相应减弱(P＜0.05).结论 在脓毒症致病过程Treg中miR-10a表达上调,抑制miR-10a水平能够显著提高Treg的比例和促进免疫抑制功能.鉴于CD4+CD25+Treg在脓毒症免疫功能紊乱中的重要作用,miR-10a可能是脓毒症免疫调理治疗的有效靶点.
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MicroRNA-10a通过调控MMP的表达促进胶质瘤细胞侵袭
目的:研究microRNA-10a( miR-10a)对人脑胶质瘤细胞系U87MG侵袭性的影响.方法:脂质体包被miR-10a反义寡聚核苷酸(miR-10a antisense oligodeoxynucleotide,miR-10a-anti-ODN),转染胶质瘤U87MG细胞,并设无义miRNA转染组和空白对照组,流式细胞术和荧光显微镜检测miR-10a-anti-ODN对U87MG细胞的转染效率,流式细胞术检测转染miR-10a-anti-ODN后U87MG细胞的凋亡和细胞周期,MTT法检测U87MG细胞的增殖,Transwell实验检测miR-10a-anti-ODN对U87MG细胞迁移和侵袭的影响；RT-PCR和Western blotting法分别检测U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-14 mRNA及蛋白的表达.结果:转染miR-10a-anti-ODN后,U87MG细胞的增殖、周期和凋亡无明显改变,U87MG细胞的侵袭[(87±7.1)vs (155±3.7)、(149±6.6)个细胞,P＜0.05]和迁移[(78.0±5.2)vs (150.3±3.7)、(147.3±6.6)个细胞,P＜0.05]能力明显下降,侵袭相关因子MM-2、MMP-9、MMP-14的mRNA及蛋白表达水平也明显下降.结论:miR-10a通过调控MMP-2、MMP-9、MMP-14的表达促进胶质瘤U87MG细胞的侵袭,miR-10a可能是胶质瘤治疗的潜在靶点.
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microRNA-10 a对肝星状细胞LX-2增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的:探讨微小RNA-10 a(microRNA-10 a,miRNA-10 a)对LX-2细胞株增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响.方法:将miRNA-10a模拟物(mimics)、miRNA-10a抑制物(inhibitor)、miRNA-10a模拟物对照物(mimics NC)、miRNA-10a抑制物对照物(inhibitor NC)分别对LX-2细胞进行转染,Real-time PCR法检测转染后LX-2细胞中CollagenⅠ的表达量,CCK-8法检测转染后LX-2细胞增殖情况,流式细胞术检测转染后LX-2细胞的凋亡率.结果:Real-time PCR结果显示,miR-NA-10a mimics能促进CollagenⅠmRNA的表达,miRNA-10a inhibitor抑制了Collagen I mRNA的表达,与其对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);Western Blot结果显示,miRNA-10a mimics与其对照组比较,显著促进CollagenⅠ 的表达(P<0.01),miRNA-10a inhibitor与其对照组比较,显著抑制CollagenⅠ的表达(P<0.05);CCK-8结果显示,miRNA-10a mimics促进LX-2细胞的增殖,miRNA-10a inhibitor抑制LX-2细胞增殖,与其对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术结果显示,miRNA-10a mimics抑制LX-2细胞凋亡,miRNA-10a inhibitor促进LX-2细胞凋亡,与其对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:miRNA-10a能加速纤维化进程,促进肝星状细胞的增殖,抑制肝星状细胞凋亡.
关键词： 肝星状细胞 microRNA-10a 肝纤维化 细胞凋亡
