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不同类型GSK-3β抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的作用及量效关系
目的 观察TDZD-8干预大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾损伤的量效关系,并将三种常用GSK-3β 抑制剂TDZD-8、氯化锂(LiCL)、SB216763对该模型的作用效果进行对比,以探讨针对SAP并发肾损伤大鼠模型有效的GSK-3β 抑制剂类别及其有效、安全的佳剂量.方法 96只SPF级雄性Wistar大鼠,随机(随机数字法)分为8组(n=12):假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、TDZD-8预处理组0.25、0.5、1.0、2.0 mg/kg(TD组,分别标记为TD1、TD2、TD3、TD4组),LiCL预处理组(L组)和SB216763预处理组(SB组),胰胆管逆行注射5％ 牛磺胆酸钠制作SAP模型.术后12 h剖杀各组大鼠,测定各组大鼠腹水量、血清AMY、Cr、BUN和ALT水平,并观察胰腺、肾脏组织病理学变化.结果 SAP组腹水量、AMY、Cr、BUN、ALT水平以及胰腺、肾脏病理评分均较SO组显著升高(P<0.05);TD1组几乎对SAP无缓解作用,TD2、TD3、TD4、L组和SB组均能不同程度地减少SAP大鼠的腹水量,降低血清AMY、Cr、BUN水平,并显著降低胰腺组织病理评分,差异有统计学意义(P<0.05);TD2、TD3均能不同程度地减少ALT水平(P<0.05),而TD4组ALT水平较高,与SAP组相似;TD2对各个指标的效果不如TD3组作用显著,两者比较各项指标差异均有统计学意义(P<0.05).对SAP大鼠腹水量和ALT水平的改善作用,TD组中佳剂量组TD3组与L组和SB组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而TD3组的AMY、Cr、BUN水平以及胰腺、肾脏病理评分均较L组和SB组降低更显著,差异有统计学意义(P<0.05);L组Cr、BUN水平和胰腺、肾脏病理学评分与SB组比较均降低更显著,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测发现各组中GSK-3β 蛋白表达均处于较一致的水平,差异无统计学意义(P>0.05);而p-GSK-3βser9在SAP组表达低于SO组,差异有统计学意义(P<0.05);TD3、L、SB三组中的p-GSK-3βser9均较SAP组明显增强,其中以TD3组表达强,同时L组表达强于SB组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过对TDZD-8、LiCL和SB216763对大鼠SAP肾损伤模型的作用比较可知TDZD-8是针对该模型有效的GSK-3β 抑制剂.对于牛磺胆酸钠诱导的SAP并发肾损伤大鼠模型,静脉给予TDZD-81 mg/kg预处理对该模型是安全有效的佳剂量.
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TDZD-8对新生大鼠背根节神经元轴突再生影响的体外实验研究
目的:探讨葡萄糖原合成酶-3β(glycogen synthase kinase 3B,GSK-3β)的抑制剂TDZD-8对新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突生长和延长的影响.方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段背根节进行原代培养、提纯和鉴定.用WD法制成健康成年雌性SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型.造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液.将不同浓度TDZD-8与成年大鼠脊髓提取液和新生大鼠DRG神经元分组培养:A组,DRG神经元+磷酸缓冲液(phosphate-bufered saline,PBS);B组,DRG神经元+正常脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术脊髓提取液:D组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液;E组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液+不同浓度TDZD-8.培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(Tubulin 8Ⅲ)荧光表达强度.结果:A组、B组和C组之间平均神经轴突长度及轴突远端Tubulin βⅢ表达强度比较,无统计学意义,D组明显减小,与A、B和C组分别比较,有统计学意义(P<0.01).0.5～3μM TDZD-8处理组平均轴突长度及Tubulin βⅢ荧光表达强度均明显高于A、B、C组,与D组比较,更为显著,差异均具有统计学意义(P<0.01).5～25μM TDZD-8处理组平均轴突长度与A、B、C组分别比较,明显缩短且有统计学意义(P<0.01),与D组比较无统计学差异(P>0.05);轴突远端Tuburn βⅢ表达比A、B、C、D组及0.5～3μM TDZD-8处理组明显增强,有统计学意义(P<0.01).结论:完全瘫痪脊髓提取液明显抑制DRG神经元轴突生长,轴突回缩.低浓度TDZD-8能促进轴突生长.形成多个轴突或轴突分支,而高浓度TDZD-8明显抑制轴突生长,导致轴突回缩.
关键词： 脊髓损伤 背根节 轴突再生 TDZD-8 葡萄糖原合成酶-3β抑制剂 -
TDZD-8对大鼠一氧化碳中毒迟发性脑病防治作用的实验研究
目的 研究葡萄糖原合酶-3β (glycogen synthase kidnase 3β,GSK-3β)抑制剂4-benzyl-2-methyl-1,2,4-thiadiazolidine-3,5-dione(TDZD-8)对一氧化碳(carbon monoxide,CO)中毒大鼠迟发性脑病(delayed neuropsychologieal sequelae,DNS)发生率、神经细胞形态学以及Tau蛋白过度磷酸化的影响. 方法 大鼠经Morris水迷宫训练1周后随机数字表法随机选取10只作为空白对照组(Con组).余大鼠采用腹腔注射CO气体建立急性CO中毒模型(染毒),将存活大鼠采用随机数字表法分为CO中毒模型组(Mod组)、TDZD-8低剂量组(TL组)、TDZD-8中剂量组(TM组)、TDZD-8高剂量组(TH组),每组10只.各组大鼠均接受6d高压氧治疗.染毒后15d应用Morris水迷宫筛选DNS大鼠.于染毒后21 d灌注固定取脑组织,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测脑组织病理学变化,免疫组化检测脑组织Tau蛋白磷酸化. 结果 Mod组大鼠逃避潜伏期(39.7±20.5)s较Con组(11.0±3.5)s显著延长(P＜0.05),DNS发生率高达70％,脑组织病理损害明显,皮质及海马P-tau (Ser199)阳性细胞较Con组明显增多(P＜0.05).TDZD-8各干预组较Mod组逃避潜伏期缩短,DNS发生率下降,脑组织病理损害减轻,皮质及海马P-tau(Ser199)阳性细胞减少,但仅TM组与Mod组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).DNS大鼠较非DNS大鼠皮质及海马P-tau (Ser199)阳性细胞明显增多. 结论 Tau蛋白过度磷酸化可能参与了CO中毒大鼠DNS的病理过程.TDZD-8对大鼠CO中毒DNS脑损伤具有保护作用.
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TDZD-8对小鼠急性胰腺炎的治疗作用
目的:探讨TDZD-8(4-苄基-2-甲基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮)对小鼠急性胰腺炎(AP)的治疗作用.方法:54只BALB/c小鼠随机均分为对照组、模型组和治疗组.模型组和治疗组采用腹腔注射雨蛙素[50.μg/(kg·h),共13次]诱导AP,对照组以同样的方式注射同体积的生理盐水,治疗组在末次注射雨蛙素30 min后,腹腔注射10 mg/kg TDZD-8.于末次注射雨蛙素后3,6,12 h,各组分别取动物6只,测定血淀粉酶、白细胞介素6(IL-6)水平,HE染色后观察胰腺组织病理学改变,免疫组化法分析胰腺核因子κB (NF-κB)的表达.结果:与对照组比较,模型组与治疗组血淀粉酶与IL-6水平,胰腺组织病理学评分与NF-κB表达水平明显升高,且均随时间延长而逐渐升高,但治疗组的上述指标在各时间点上均明显低于模型组,所有差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:TDZD-8对小鼠急性胰腺炎有保护作用,其保护机制可能与抑制NF-κB活性,从而减轻炎症反应有关.
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糖原合成酶激酶-3β抑制剂TDZD-8抑制大鼠C6胶质细胞瘤细胞体外增殖及诱导凋亡的作用和机制
目的：探讨糖原合酶激酶-3β（ GSK-3β）抑制剂TDZD-8（4-苄基-2-甲基-1，2，4-噻二唑烷-3，5-二酮）对大鼠C6胶质细胞瘤细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的机制。方法：采用MTT方法检测TDZD-8不同浓度（10、20、40和80μmol/L）处理大鼠C6胶质细胞瘤细胞6、12、24和48 h后对细胞增殖的影响；流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的作用，同时分析凋亡相关基因 Bax、Bcl-2和P53的表达变化。结果：TDZD-8浓度、时间依赖性的抑制大鼠 C6胶质细胞瘤细胞的增殖（P＜0.05）。流式细胞术显示TDZD-8浓度依赖诱导细胞凋亡，其中在20、40和80μmol/L组有统计学差异（ P＜0.05）。40和80μmol/L TDZD-8处理C6细胞后，G0/G1期细胞数量明显增多，分别升高到83％和90％（ P＜0.05）；而S期和G2/M期细胞数则显著降低（ P＜0.05）。同时，40和80μmol/L TDZD-8使Bax和P53表达显著增加，而使Bcl-2表达降低（ P均＜0.05）。结论：GSK-3β抑制剂TDZD-8可以浓度依赖性抑制C6细胞增殖同时诱导其凋亡，并引起细胞周期阻滞，这可能与其对Bax、P53和Bcl-2的调控相关。
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糖原合成酶激酶-3β抑制剂对肝热缺血再灌注损伤的保护
目的:研究糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)抑制剂TDZD-8对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用.方法:将大鼠随机分为4组:A组(假手术+空白对照)、B组(假手术+TDZD-8)、C组(I/R+空白对照)和 D组(I/R+TDZD-8,实验组).通过肝门阻断30 min建立大鼠缺血再灌注模型,分别于再灌注后2、12 h,每组各选取8只大鼠,测定血清ALT、AST含量,行肝组织形态学检测;TUNEL检测肝细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);采用实时定量PCR方法检测肝Bcl-2 mRNA转录水平.结果:预先给予TDZD-8组在缺血再灌注期各时相点肝组织结构受损相应较轻,血清ALT、AST含量及凋亡指数均较低(P＜0.05);Bcl-2 mRNA则显著上升.结论:GSK-3β抑制剂可显著减轻肝脏缺血再灌注损伤程度,上调肝脏Bcl-2 mRNA转录,抑制肝细胞凋亡.
