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胃癌外周血DKK3基因启动子甲基化检测及其临床价值
目的 检测胃癌患者外周血DKK3基因启动子甲基化并研究其临床意义.方法 选择80例胃癌患者(GAC组)和40例正常健康人(CON组)为研究对象,检测两组研究对象外周血DKK3基因启动子甲基化并比较其差异.分析GAC组胃癌患者DKK3基因启动子甲基化与临床病理的关系.比较GAC组患者DKK3基因启动子甲基化与未甲基化患者预后的差异.结果 GAC组患者DKK3基因甲基化率显著高于CON组(P<0.05).GAC组胃癌病变分布全胃、低分化、肿瘤大径≥5 cm、淋巴结转移、远处转移和Ⅲ+Ⅳ患者DKK3基因启动子甲基化率显著高于病变分布局部、中高分化、肿瘤大径<5 cm、无淋巴结转移、无远处转移和Ⅰ+Ⅱ患者(均P<0.05).GAC组中DKK3基因启动子甲基化患者R0切除率、3年生存率及总生存时间均显著低于DKK3基因启动子未甲基化患者(P<0.05),并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 胃癌患者外周血DKK3基因启动子处于高甲基化状态,与病情严重程度及预后密切相关,外周血DKK3基因启动子甲基化检测可用于病情及预后的评估.
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miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的细胞增殖的调控
目的 研究miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的调控作用和机制.方法 RT-PCR实验检测miR-346在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达水平,随后检测其在结肠癌组织和对应的癌旁组织中的表达水平.MTT实验检测miR-346对结肠癌细胞增殖能力的影响.流式细胞周期检测miR-346对结肠癌细胞周期的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-346和DKK3之间的结合关系.利用siRNA和pcDNA-DKK3转染结肠癌细胞研究DKK3对结肠癌细胞功能的影响.结果 miR-346在结肠癌细胞中的表达水平显著上调.过表达miR-346后,结肠癌细胞的增殖能力变强,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增加.双荧光素酶报告基因实验显示miR-346能够和DKK3直接结合.转染siRNA抑制DKK3的表达后,结肠癌细胞增殖能力变强,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增加.过表达DKK3后,能够部分抵消miR-346对结肠癌细胞的促增殖作用.结论 miR-346通过靶向结合并抑制DKK3进而促进结肠癌细胞的增殖.
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DKK3在胃癌组织中的表达及其与预后的关系
目的 探讨胃癌组织中DKK3蛋白和mRNA的表达水平及其与患者预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测158例胃癌和癌旁组织中DKK3蛋白的表达水平,用免疫印迹和实时定量PCR检测76例胃癌和癌旁组织中DKK3蛋白和mRNA的表达水平.结果 158例胃癌组织中DKK3阳性表达率低于癌旁组织(40.5％比55.1％,x2=41.442,P=0.000).76例胃癌组织中DKK3蛋白和mRNA的表达水平均低于癌旁组织(1.096 ±1.110比3.476±1.119,=3.332,P=0.017;1.136±1.013比3.314±1.105,t=2.673,P=0.022).DKK3的表达水平与胃癌的肿瘤浸润深度(P =0.006)、TNM分期(P =0.005)及淋巴结转移(P =0.009)密切相关,与胃癌患者的总生存率呈正相关(47.4％比28.0％,P=0.011),并且是其独立预后因素(P =0.016).结论 DKK3在胃癌组织中表达水平降低,并与胃癌患者的预后密切相关.
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DKK3在胃癌组织中的甲基化表达及其临床意义
目的 探讨胃癌组织中DKK3基因的mRNA表达、其启动子区甲基化状况及其与胃癌发生发展的关系.方法 应用甲基化特异性PCR检测76例配对的胃癌和癌旁组织中DKK3基因启动子甲基化状态,再采用RT-PCR检测该基因的mRNA表达.结果 76例胃癌组织中DKK3mRNA表达率低于癌旁组织(43％比60％,x2=5.663,P=0.017).在癌旁组织中,有29例出现DKK3基因启动子甲基化,而在胃癌组织中有44例出现甲基化(38％比58％,x2=19.405,P=0.000).胃癌组织中DKK3基因启动子甲基化表达与胃癌患者的肿瘤浸润深度(P=0.014)、TNM分期(P=0.032)、病理类型(P=0.016)及淋巴结转移(P=0.007)密切相关.DKK3基因启动子甲基化与其mRNA表达具有负相关性(x2=64.286,P=0.000).结论 胃癌组织中DKK3基因启动子的异常甲基化是其失活的重要机制,在胃癌的进展中发挥了重要作用.
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DKK3功能的研究进展及临床意义
Dickkopf(DKK)3是一种分泌性糖蛋白,是属于DKK相关蛋白家族成员之一,主要调节经典Wnt/β联蛋白信号通路.DKK3具有调控组织发育、凋亡、增殖、代谢和免疫反应等多种重要生物学功能.DKK3在心脏疾病、肿瘤、免疫调节通路、神经发生及代谢性疾病方面均有大量研究,尤其在心脏疾病及肿瘤等方面.DKK3的相关生物学功能及其与人类疾病的相关性,使其可以作为相关人类疾病诊断以及治疗的一个重要分子标志物,但其在疾病的发生、发展以及预后的具体作用机制仍不清楚,以DKK3为靶点治疗临床疾病将成为研究热点.
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Dkk3系统性表达转基因小鼠的建立
目的 建立系统性表达Dkk3转基因模型小鼠,为研究Dkk3生理功能及对骨生长发育的作用提供工具动物.方法 通过ISH来观察Dkk3 于C57BL/6J小鼠全身组织中的表达.把Dkk3基因插入系统性表达CMV启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立C57BL/6J Dkk3转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型,RT-PCR检测Dkk3在骨髓中的表达,Western Blot检测Dkk3在肺脏、脑及肝脏中的表达,BrdU标记染色观察转基因小鼠骨生长情况.结果 在生理状态下, Dkk3基因广泛表达,在骨、心脏及脑等组织高表达.建立的2个转基因小鼠品系中,转入的Dkk3基因在骨髓、脑、肝脏及肺组织中均有明显表达.BrdU整合率实验显示转基因小鼠长骨骺区细胞增殖明显低于同龄对照小鼠.结论 建立了系统性表达Dkk3转基因小鼠,转入的Dkk3基因明显抑制小鼠长骨骨骺区细胞增殖,为Dkk3对骨生长发育的作用研究提供了有价值的工具动物.
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microRNA及Wnt信号通路在急性淋巴细胞白血病中的作用研究进展
microRNAs(miRNAs)是一种内源性的基因调控元件,参与细胞增殖、分化、凋亡等多种重要生物学过程.在许多实体瘤和血液系统恶性肿瘤中均存在miRNA异常表达,说明miRNA可能参与肿瘤的发生及发展.Wnt通路是一条经典的信号通路,其异常激活与多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤的发生发展密切相关.急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一种常见的成人血液系统恶性肿瘤,现已发现多种miRNA在ALL中异常表达,并与发病、治疗效果及预后有关.在ALL中可见Wnt信号通路的异常激活及通路抑制剂的异常失活,并且这些变化与ALL的预后密切相关.本文就miRNAs和Wnt信号通路在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中的作用相关研究进展作一综述,以提供靶向治疗ALL的新思路.
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DKK3在非酒精性脂肪性肝病的作用研究
目的 探讨Dickkopf-3(DKK3)在小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成中的意义.方法 采用高脂饮食喂养C57BL/6雄性小鼠来构建NAFLD模型,通过检测肝功能、糖代谢变化、肝脏组织中脂质含量及肝脏病理学变化评估NAFLD模型是否成功;并用Western印迹方法检测肝脏组织中DKK3蛋白变化情况.结果 高脂饮食组小鼠NAFLD相关指标均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05).高脂饮食组小鼠肝脏中DKK3蛋白表达量较对照组明显下降,定量分析比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 DKK3在NAFLD小鼠肝组织中表达明显下降,提示DKK3涉及NAFLD的发生发展过程,并可能发挥一定的作用.
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DKK3和vWF在结直肠癌组织中的表达及临床意义
背景与目的:有研究提示抑癌基因DKK3(dickkopf homolog 3 gene)在肿瘤中表达减少或缺失,而部分肿瘤内皮血管表达DKK3:vWF是一种由血管内皮细胞和巨核细胞合成和释放的大分子糖蛋白,其在肿瘤组织中有表达,目前两者对肿瘤的发生的机制还不清楚.本研究通过检测DKK3和vWF在结直肠癌中的表达,以探讨其临床意义、两者与微血密度(micro vascular density,MVD)的关系以及两者之间的相关性.方法:94例结直肠癌组织制作片,应用免疫组织化学SP法检测DKK3、vWF蛋白和MVD在结直肠痛中的表达.结果:DKK3在癌组织中的表达明显降低或缺失,与在正常肠黏膜组织中的表达相比,差异有统计学意义(P＜0.05):vWF在癌组织中的表达明显高于其在正常组织中的表达,差异同样有统计学意义(P＜0.05);DKK3与vWF的表达均与结直肠癌患者的性别、年龄、浸润深度和生长部位无关(P＞0.05),但均与组织分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05).DKK3和vWF在结直肠癌中的表达均与MVD无相关性(P＞0.05);DKK3和vWF的表达在结直肠癌中无相关性(r=0.1310,P=0.2090).结论:DKK3的低表达和vWF的高表达与结直肠癌的发生、发展、生物学行为和转移可能有关,可望成为一个用于结直肠癌诊断的新的生物学标志物.
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抑癌基因DKK3过表达抑制人皮肤黑素瘤细胞迁移和侵袭的机制探讨
目的 探讨DKK3在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及转染DKK3对人黑素瘤细胞A375迁移与侵袭的影响.方法 通过Western印迹法分析DKK3在人黑素瘤细胞系(HM、A375、WM451、SK-MEL-1、Hs-695T、MDA-MB-435s、WM35)及色素痣细胞中的表达,实时荧光定量PCR检测2014年8月至2017年6月在重庆市中医院皮肤科收集的58例恶性黑素瘤(包括原发性黑素瘤与转移性黑素瘤)和30例色素痣组织中DKK3 mRNA的相对表达水平.分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)和pcDNA3.1 (+)-Flag-DKK3质粒(转染组)至恶性黑素瘤A375细胞中,通过实时荧光定量PCR和Western印迹法验证DKK3的过表达,及DKK3过表达对黑素瘤细胞迁移和侵袭相关的分子表达水平的影响;通过细胞平板划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分析DKK3对A375细胞迁移及侵袭的影响.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,两独立样本间的比较采用t检验;多组数据的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 DKK3蛋白在人黑素瘤细胞系中表达缺失或低表达,在色素痣组织中高表达.原发性黑素瘤、转移性黑素瘤与色素痣中DKK3 mRNA表达水平(2-ΔΔCt)分别为(0.325±0.150)×10-3、(0.142±0.210)×10-3、(0.634±0.120)×10-3,差异有统计学意义(F=46.57,P＜0.05),转移性黑素瘤表达水平低于原发性黑素瘤和色素痣(LSD-t分别为2.48、3.12,均P＜0.05).A375细胞转染DKK3后,细胞划痕迁移率(22.11％±5.1 1％)低于对照组(54.36％±23.22％)(t=2.36,P＜0.001);迁移及侵袭实验中,转染组穿出小室细胞数(265±33、76±18)低于对照组(429±41、135±21),差异有统计学意义(t值分别为1.24、1.35,均P＜ 0.001).转染组A375细胞过表达DKK3后,上皮钙黏着蛋白和mRNA表达上升,神经钙黏着蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP7、MMP11蛋白和mRNA的表达下降.结论 DKK3在黑素瘤细胞系和组织中表达下调,DKK3过表达后A375细胞的迁移和侵袭受到明显抑制,DKK3可能是抑制皮肤恶性黑素瘤转移的靶点.
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抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨DKK3在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响.方法 通过反转录(RT)-PCR及实时定量PCR分析DKK3mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK-MEL-1、Hs-695T和MDA-MB-435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达.分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1(+)-Flag-DKK3质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组),RT-PCR验证DKK3的过表达;通过CCK8法和平板克隆实验分析DKK3对A375细胞增殖的影响,流式细胞仪分析DKK3对A375细胞凋亡的影响,Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达.结果 DKK3 mRNA在WM35细胞系表达下调,HM、A375、WM451、SK-MEL-1和Hs-695T细胞系表达缺失,MDA-MB-435s细胞高表达.与色素痣相比,DKK3mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低(P＜ 0.001).与对照组A375细胞相比(100％),实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制(23.22％±3.55％);同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制(均P＜ 0.05).流式细胞仪检测发现,与对照组A375细胞(G1期,25.38％±2.92％)相比,实验组A375细胞明显阻滞于G1期(48.68％±3.92％,P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜ 0.001).与对照组A375细胞相比,实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和活化的Caspase-3表达升高,细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低(均P＜0.001).结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展.
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Dkk3在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义
目的 探讨dkk3在肝细胞肝癌中的表达及临床意义.方法 40例肝癌及其癌旁组织,10例正常肝组织采用Real time PCR检测DKK3mNA水平表达情况和228例肝癌组织及癌旁组织石蜡切片采用免疫组织化学方法对DKK3蛋白水平表达情况进行检测;并对228例肝癌患者预后生存率进行分析.结果 DKK3mRNA水平中在肝癌组织中低表达,在正常组织中高表达(P＜0.05),DKK3蛋白水平在肝癌组织中低表达(P＜0.05),DKK3蛋白高表达肝癌患者预后生存时间长于低表达(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 DKK3在肝细胞肝癌组织中低表达,说明DKK3是一种抑癌基因,并且预后结果分析提示DKK3有可能在抑制肿瘤增长,分化,转移中发挥作用.
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5-氮杂胞苷对DKK3去甲基化及对SGC7901胃癌细胞增殖的影响
目的 研究5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子去甲基化对细胞增殖及凋亡的影响. 方法 采用5-氮杂胞苷处理SGC7901胃癌细胞,以未行5-氮杂胞苷处理的SGC7901胃癌细胞为对照,比较DKK3基因启动子甲基化改变及细胞增殖曲线、细胞增殖及凋亡的差异. 结果 SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子在5-氮杂胞苷作用前呈甲基化状态,作用后呈未甲基化状态,表明5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子具有去甲基化作用.5-氮杂胞苷作用后的SGC7901胃癌细胞Go/Gi期比例、PI和凋亡率均显著高于作用前SGC7901胃癌细胞(均P＜0.05),S期和G2/M期显著低于作用前SGC7901胃癌细胞(均P＜0.05). 结论 DKK3基因可能具有抑癌基因作用,5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子的去甲基化可促进细胞凋亡并抑制其增殖.
关键词： 5-氮杂胞苷 SGC7901胃癌细胞 DKK3 去甲基化 细胞增殖 -
甲基化寡核苷酸灭活DKK3基因对肝癌细胞增殖的影响
目的 研究甲基化寡核苷酸灭活Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf-related protein 3,DKK3)基因对HepG2肝癌细胞增殖的影响. 方法 采用甲基化特异性PCR法检测肝癌细胞DKK3基因启动子甲基化状态.将寡核苷酸(分别为MON组、UMON组、CON1组和CON2组)转染HepG2肝癌细胞,比较转染后DKK3基因启动子甲基化状态、细胞增殖和凋亡的差异. 结果 HepG2肝癌细胞DKK3基因启动子未检测到甲基化,Hep3B、SMMC-7721和HuH-7肝癌细胞DKK3基因启动子处于甲基化状态.MON可成功诱导其互补序列CG位点产生甲基化,而UMON、CON1和CON2寡核苷酸无法诱导甲基化.UMON组、CON1组和CON2组HepG2肝癌细胞在D0-D6吸光度、G0/G1期、S期、GJM期、增殖指数(prolif-eration index,PI)和凋亡率方面差异均无统计学意义(均P＞0.05);MON组HepG2肝癌细胞G0/G1期比例和凋亡率均显著低于UMON组、CON1组和CON2组(均P＜0.05),而D1-D6吸光度、S期、G2/M期和PI均显著高于UMON组、CON1组和CON2组. 结论 甲基化寡核苷酸可成功诱导DKK3基因甲基化,导致HepG2肝癌细胞细胞增殖增加而凋亡下降.
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非小细胞肺癌血清DKK3基因启动子甲基化的临床意义
目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)血清DKK3基因启动子甲基化的临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测NSCLC患者及健康人血清DKK3基因启动子甲基化,比较两者间的差异并分析其与临床病理因素的关系.结果 NSCLC患者血清DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健康人(P＜0.05).NSCLC患者血清DKK3基因启动子甲基化在肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期中的差异具有统计学意义(P＜0.05),肿瘤大、淋巴结分期晚、有远处转移及TNM分期晚DKK3甲基化率显著高于肿瘤小、淋巴结分期早、无远处转移及TNM分期早患者(P＜0.05).结论 NSCLC患者血清DKK3基因启动子甲基化与临床病理因素密切相关,可作为NSCLC的病情及预后评估的标志物.
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甲状腺乳头状癌中DKK3基因表达及其启动子区甲基化的研究
目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中DKK3基因mRNA表达、其启动子区甲基化状态及其与PTC的发生、发展的相关性.方法 运用甲基化特异性PCR(MSP)检测49例PTC及其相对应癌旁组织(NCE)中DKK3基因启动子甲基化状态,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测该基因的mRNA表达.结果 在NCE中,无一例出现DKK3基因启动子甲基化,而在PTC中38.8％出现甲基化；NCE和PTC中,DKK3基因mRNA表达的阳性率分别为100％和44.9％,2组差异均有统计学意义(P ＜0.01)；PTC中DKK3基因启动子甲基化及mRNA表达与患者的病理学分级、TNM分期、淋巴结转移有相关性(P＜0.05).DKK3基因启动子甲基化与其mRNA表达有明显的相关性(P＜0.01).结论 DKK3基因启动子甲基化是基因失活的重要机制之一,在PTC的发生、发展中起重要作用.
