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乳腺导管内癌与浸润性导管癌激素受体表达比较
2003年3月~2007年6月,我院对38例导管内癌患者进行了雌激素受体(ER)及人表皮生长因子-2(CerbB-2)检测,并与同期收治的浸润性导管癌患者进行比较.现报告如下.
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人表皮生长因子真核表达载体的鉴定
目的:鉴定人表皮生长因子的真核表达载体.方法:重组体进行限制性酶切及PCR可见目的片段.结果:pCDDA3.1-hEGF真核表达载体已成功构建.结论:已成功构建hEGF真核表达载体,为进一步研究hEGF的功能奠定了基础.
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含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达
目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF).方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×His标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化E.coli M15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF].MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF.结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%.复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性.结论:以E.coli M15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段.
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人表皮生长因子真核表达载体的构建
目的:构建人表皮生长因子的真核表达载体.方法:采用RT-PCR扩增人表皮生长因子(hEGF)cDNA基因序列并克隆入PGEM-T 载体,再用限制性内切酶切取目的基因,插入pcDNA 3.1真核表达载体.结果:重组体经转化E.coli JM109感受态大肠杆菌后可大量扩增,提取重组体进行限制性酶切及PCR可见目的片段.结论:已成功构建hEGF真核表达载体,为进一步研究hEGF的功能奠定了基础.
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人表皮生长因子真核细胞缓释型滴眼剂的基因治疗研究
目的:构建人表皮生长因子的真核表达载体,探讨用人表皮生长凶子对角膜损伤治疗的可行性.方法:采用基因重组技术将人表皮生长因子基因插入pcDNA.3.1真核表达穿梭质粒,用脂质体包裹制成人表皮生长因子基因缓释型滴眼剂,滴眼治疗家兔角膜碱烧伤.结果;将hEGF-pcDNA3.1重组体进行限制性酶切及PCR扩增可见目的片段;基因治疗组在模型治疗后第7 d,角膜荧光着色变浅,溃疡面变小;第18~21 d溃疡面消失;在基因治疗后第1至28 d,从角膜组织中均可检测出hEGF mRNA,基因治疗组蛋白质表达水平明显升高,第7d达高峰,为224.286 ng/g角膜湿重,持续可表达3周以上;基因治疗眼角膜免疫组织化学染色可在角膜细胞内见hEGF蛋白质表达,第7d达高峰,细胞转染率高达95%以上,并可持续表达3周以上.结论:用poDNA.3.1真核表达穿梭质粒作为载体,携带人表皮生长因子基因,用脂质体包裹后制成缓释型滴眼液,以滴眼的方式给药转染角膜,可达到极高的转染率,具有良好的应用前景.
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重组人表皮生长因子融合蛋白发酵条件优化
目的:优化GST-hEGF融合蛋白工程菌pGEX-EGF/BL21STAR(DE3)pLysS30L发酵罐培养及表达条件.方法:上罐发酵采用M9-YT-Glu发酵培养基,IPTG诱导;通过还原SDS-PAGE法测定目标蛋白表达量、落计数法测定质粒丢失率,以确定表达温度、时间以及IPTG添加量等参数.结果与讨论:hEGF重组菌诱导温度为30℃、加入终浓度0.2M IPTG诱导,维持诱导时间4hr,目的蛋白表达量占菌体蛋白总量的30%左右,为后续rEGF融合蛋白纯化奠定了基础.
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内毒素及h-EGF检测与重型病毒性肝炎预后的临床研究
目的:为探讨重症肝炎预后的影响因素,本文检测了49例重肝患者血清内毒素和人表皮生长因子(h-EGF)含量变化.方法:分别采用偶氮显色鲎试验方法及ABC-ELISA方法测定血清内毒素和h-EGF值.结果:(1)死亡组患者血清内毒素水平治疗前高于存活组,且与对照组比较P<0.05,而h-EGF却相反.(2)随着病情进展,死亡组内毒素水平升高,而h-EGF水平有所降低,存活组则与之相反.(3)血清内毒素水平越高,病死率越高;而h-EGF水平越高,病死率越低.结论:内毒素及h-EGF分别能反映肝细胞坏死及再生情况,其动态检测能较好预测重肝发展趋势,可用作评判重肝预后的指标.
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非小细胞肺癌中人表皮生长因子的表达及其临床意义
本研究旨在探讨erbB-2/HER-2在肺癌组织中的表达情况与临床病理的关系.一、材料与方法1.材料:研究材料取自武汉协和医院胸外科1999年至2004年的105例非小细胞肺癌患者,入选患者诊断明确,术前均未做过放疗、化疗并,病理类型均由术后病检证实,术后随访至2006年3月,其中肺鳞癌54例,腺癌39例,腺鳞癌5例,大细胞癌7例.
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重组人表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子治疗鼻中隔黏膜糜烂
鼻出血是耳鼻咽喉科常见病,鼻中隔黏膜糜烂又是鼻出血的重要原因之一,其中尤以Little区病变较多.我科使用重组人表皮生长因子(rhEGF)及重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)治疗鼻中隔黏膜糜烂出血患者214例,现报告如下.
关键词: 鼻出血 人表皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 -
脂质体包埋人表皮生长因子激活上皮细胞活性的研究
目的:制备脂质体包裹的人表皮生长因子(hEGF),并观察其对上皮细胞增殖与迁移的影响.方法:通过逆向蒸发法制备hEGF脂质体,体外培养人表皮细胞,细胞划痕后以不同浓度的hEGF脂质体处理12 h,观察细胞迁移距离;以4μg·ml-1 hEGF脂质体处理上皮细胞24 h后,MTT法观察细胞增殖.结果:hEGF脂质体较hEGF溶液稳定性更好,且对表皮细胞迁移和增殖有更强的促进作用.结论:hEGF脂质体更稳定高效,在表皮修复方面有更好的应用前景.
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表皮生长因子受体与胃癌的研究进展
胃癌的发生与发展机制十分复杂,涉及多种细胞病理改变。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及其参与的信号转导通路在胃癌的发生发展中起着重要的作用。近年来,发现多数肿瘤对放化疗存在的耐药性,因此在肿瘤的基因水平寻找诊断指标以及靶向治疗,已经成为近年来研究热点之一。本文综述表皮生长因子与胃癌的研究进展。
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重组人表皮生长因子对口腔扁平苔藓的临床疗效
目的 观察人表皮生长因子喷剂对口腔扁平苔藓的临床疗效.方法 将28例严重的糜烂患者随机分成两组,治疗组喷涂人表皮生长因子喷剂于病损区,对照组涂擦溃疡糊剂.结果 治疗组愈合时间6.07天,对照组8.2天.p<0.05.治疗组疗程明显小于对照组,但两组疗效无差异.
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食管癌放射抗拒与P-gp、HER-2及microRNA-296表达的相关性
目的:探讨P-糖蛋白(P-gp)、人表皮生长因子受体2(HER-2)及microRNA-296的表达与食管癌放射抗拒的相关性.方法:将人食管癌细胞Eca109分为对照组和处理组,处理组通过X射线反复照射(累计放射剂量60 Gy),采用MTT法检测2组细胞的增殖抑制率.免疫细胞化学法测定P-gp和HER-2的表达.Northern blotting法测定microRNA-296的表达.结果:处理组细胞较对照组显示出明显的放射抗性,增殖抑制率明显低于对照组细胞.免疫细胞化学测定P-gp和HER-2在处理组中较对照组表达显著增加.2组细胞中microRNA-296表达无显著差异.结论:P-gp、HER-2可能与食管癌放射抗拒有关;暂不能说明microRNA-296与食管癌细胞Eca109放射抗拒具有相关性.
关键词: 食管肿瘤 放射抗拒 microRNA-296 受体 人表皮生长因子 -
人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达
目的:在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF), 并探索提高外源基因在pE T-3c:BL(DE3)表达系统的表达水平的途径.方法:根据大肠杆菌对密码的偏爱性, 合成编码53个氨基酸的hEGF基因,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达.计算机分析两者mRNA的翻译起始区(translation initiation region,TIR)的结构.结果 :融合蛋白表达产量为27%,非融合蛋白的表达用SDS-PAGE检测不到,两者均具有促细胞增殖的活性. 融合蛋白mRNA的TIR的ΔG值较非融合蛋白的高.结论:在pET-3c:BL21(D E3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高且不影响其活性.此外,mRNA 的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素.
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表皮生长因子治疗萎缩性鼻炎的效果观察
表皮生长因子(EGF)是一种促进上皮细胞生长的活性肽,Cohen首次以小鼠颌下腺分离出表皮生长因子(hEGF),随后他从人的体液中分离出人表皮生长因子(hEGF)[1].表皮生长因子能与靶细胞中的生长因子受体结合而产生生物效应,具有刺激细胞增殖,分化的作用,局部应用可促进创面组织愈合,表皮生长因子是已达到可用临床研究的细胞因子之一.近我们将表皮生长因子应用于临床上对比较难治的萎缩性鼻炎进行治疗,取得比较满意的效果;现将观察结果报告如下.
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rhEGF原位凝胶的生物学效应研究初探
目的 探讨rhEGF原位凝胶及对大鼠烧伤创面愈合的生物学功能.方法 通过对大鼠烧伤模型来对比rhEGF原位凝胶及复方凝胶的创口愈合效果,动态观察烧伤后使用原位凝胶及复方凝胶在不同时间点的创口愈合时间、羟脯氨酸(OHP)含量和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值变化及病理组织学等指标的变化.结果 动物实验表明使用rhEGF原位凝胶对大鼠烧伤创口修复作用类同于复方凝胶,而明显优于生理盐水对照组.结论 鉴于原位凝胶在使用和生产上的便利性,可望在剂型上替代传统的rhEGF复方凝胶.
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血管内皮因子、人表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子纳米缓释剂对血管内皮细胞影响的比较
目的:制备血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人表皮生长因子(EGF)可降解缓释微球,考察其生物活性的保存情况,以及它们对血管内皮细胞的作用.方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备VEGF、bFGF、EGF的明胶缓释微球,将它们加入血管内皮细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定细胞增殖情况.结果:VEGF、bFGF、EGF的缓释微球平均粒径(11.32±3.64)μm;培养1天后各组细胞计数、吸光度(A)值差异均无显著性;5天后,VEGF20ng缓释微球组细胞计数、吸光度(A)值明显高于其它组;7天后,VEGF20ng缓释微球组值仍高于其它组,但差异无显著性.结论:VEGF、bFGF、EGF的缓释微球制备工艺简便,成球性好;能较长时间地持续释放活性VEGF,bFGF、EGF,可促进血管内皮细胞的增殖,其中VEGF效果显著.
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人表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子纳米缓释剂对成纤维细胞的影响
目的:制备碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人表皮生长因子(EGF)可降解缓释微球,考察其生物活性的保存情况,以及它们对成纤维细胞的作用.方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF、EGF的明胶缓释微球,将它们加入成纤维细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT 法)测定细胞增殖情况.结果:复合bFGF、EGF的缓释微球平均粒径(11.32±3.64)μm;培养1天后各组细胞计数、吸光度(A)值差异均无显著性;5天后,两种生长因子缓释微球组细胞计数、吸光度(A)值明显高于对照组;7天后,两种生长因子缓释微球组值仍高于其它组,但差异无显著性.结论:复合bFGF、EGF的缓释微球制备工艺简便,成球性好;能较长时间地持续释放活性bFGF、EGF,可促进成纤维细胞的增殖.