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血啉甲醚体外光敏反应机制研究
目的探讨血啉甲醚(HMME)及血卟啉衍生物(HpD)体外光敏化反应的机制.方法采用HMME及HpD光敏引起还原型辅酶I(NADH)氧化为中介的鲁米诺(luminol)化学发光法(CL),探讨HMME及HpD光敏反应特点.选择性应用单态氧(1O2)及活性氧物质(ROS)的专一清除剂,研究1O2及ROS在HMME及HpD光敏反应中的作用.结果 1O2专一清除剂几乎完全抑制了HMME和HpD的化学发光,ROS清除剂对化学发光没有明显影响.HMME化学发光值高可达509 595 mV,反应持续时间48 s,1O2的总产量12 230 280.HpD的化学发光值高49 000 mV,反应时间235 s,1O2的总产量5 757 500.结论 HMME及HpD的光敏化产物主要是1O2.HMME光敏化产生1O2的光量子产率高于HpD,1O2生成速度比HpD快,HMME自敏光氧化速度也比HpD快.在鲜红斑痣的治疗中,当血供正常时,HMME光敏损伤作用可能更强,组织选择性可能更好.
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光敏剂漂白特性在鲜红斑痣光动力治疗中的作用
目的监测光动力治疗过程中鲜红斑痣组织内光敏剂含量的动态变化,探讨光敏剂漂白特性在光动力疗法微血管选择机制中的作用.方法鲜红斑痣病人34例,男性15例,女性19例,静脉注射血啉甲醚和血卟啉衍生物5 mg/kg后给予铜蒸气激光照射.使用三倍频Nd∶YAG激光和光学多通道分析仪(OMA)在治疗前和治疗中的多个时间点对治疗区皮肤组织进行荧光光谱检测,绘制成时间-荧光强度曲线.结果治疗区皮肤组织中光敏剂荧光强度在激光照射开始后迅速下降,血啉甲醚荧光强度的下降速率和下降幅度均显著大于血卟啉衍生物.结论治疗区皮肤组织中光敏剂的漂白速度明显大于光敏剂的补充扩散速度,光敏剂漂白可能是光动力疗法微血管选择效应的主要机制.
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术中光动力学疗法拓展Ⅲ期乳腺癌根治范围的研究
目的 探讨术中光动力学疗法拓展Ⅲ期乳腺癌根治范围的作用及其意义.方法 采用术中光动力学疗法治疗Ⅲ期乳腺癌(T4任何NM0)14例,其中皮肤浸润伴橘皮样外观9例,炎性乳腺癌2例;N1 10例,N2 4例.应用波长630nm半导体激光治疗机,柱状光纤,血卟啉(HpD)光敏剂.行根治性切除术,缝合皮肤之前进行照射.术前给予CEF方案化疗,术后辅助CEF和(或)TAC方案化疗、放疗及内分泌治疗.结果 随访3～12个月,胸壁和腋窝局部未见癌残留及复发,肝、肺、胸椎以及对侧乳腺均未见转移.结论 对部分Ⅲ期乳腺癌患者在化疗-手术-放疗-化疗的系统综合治疗的基础上,再辅以术中光动力学疗法,能更有效地清除肿瘤残留,防止复发和转移.
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眼内肿瘤光动力疗法的研究概况
综述眼内黑色素细胞瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜血管瘤、视网膜毛细血管瘤、脉络膜骨瘤光动力疗法(PDT)的临床及实验研究进展.PDT具有对肿瘤细胞的高选择性,是治疗小的眼内肿瘤及作为辅助疗法治疗较大肿瘤有潜力的方法.
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光动力治疗骨与软组织肉瘤的疗效及其机制
目的 探讨血卟啉单甲醚介导光动力疗法(hematoporphyrin monomethyl ether induced photodynamic therapy,HMME-PDT)的抗肉瘤效应及其机制.方法 流式细胞仪检测骨肉瘤细胞和成肌细胞的胞内HMME摄取,MTT法检测骨与软组织肉瘤细胞存活率,流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率,Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡,不可逆caspase通路抑制剂及坏死抑制剂检测PDT介导的细胞死亡形式,蛋白免疫印迹和免疫组化检测肿瘤细胞中caspase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白相对表达量,测定瘤体体积及瘤重评估PDT的抗肿瘤效应,HE染色检测肿瘤组织形态学改变.结果 光敏剂HMME选择性的聚集于骨肉瘤细胞中,而正常细胞摄取较少,且骨肉瘤细胞的摄取呈孵育时间及浓度依赖性.HMME-PDT能显著杀伤骨与软组织肉瘤细胞.HMME-PDT可明显诱导贴壁及悬浮培养骨肉瘤细胞发生凋亡.Hoechst 33342染色可见典型的凋亡改变.凋亡是HMME-PDT介导的细胞死亡的主要形式,且与caspase依赖的凋亡通路密切相关.HMME-PDT可明显上调caspase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白表达量.HMME-PDT组肿瘤体积及瘤重均较空白组明显减小,且肿瘤区域出现广泛坏死.结论 HMME-PDT能有效地抑制肉瘤生长,其抗肉瘤效应与caspase依赖的凋亡通路密切相关.
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光动力学疗法治疗兔脑种植VX2肿瘤的实验研究
目的 探讨应用光敏药物血卟啉衍生物及光照射方法(光动力学疗法)治疗兔脑种植VX2肿瘤的效果及安全性.方法健康成年新西兰大白兔75只,完全随机化分为正常对照组、假手术组、荷瘤组和光动力学治疗组,分别观察各实验组动物牛存期、肿瘤体积、颅内压、脑组织含水量及组织病理学改变.结果 种植VX2肿瘤后,荷瘤组动物中位生存期为24.50 d,光动力学治疗组为47.50 d,两组生存率比较差异有统计学意义(X2=12.158,P=0.000).经光照射后,光动力学治疗组动物肿瘤体积停止增大.且明显小于同一时限荷瘤组(均P=0.000);光学显微镜下观察可见肿瘤细胞坏死、血管破坏.光照射治疗后,各实验组动物颅内压和脑组织含水量呈短暂性升高,持续1～5 d逐渐降至正常值范围.结论 单次光照射治疗可明显延长倚瘤动物的生存期,其作用机制可能是通过直接杀伤肿瘤细胞和破坏肿瘤血管而发挥抑瘤作用.治疗过程中引起的短暂性脑水肿和颅内压升高仍处于较为安全的范围.
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血卟啉衍生物光动力效应对体外培养人鼻咽癌细胞株的杀伤作用
目的:通过探讨血卟啉衍生物光动力学效应对人鼻咽癌细胞株CNE2的生物作用,为光动力治疗放、化疗效果较差的鼻咽癌提供理论依据.方法:实验于2005-10/2006-06在南方医科大学南方医院肿瘤生物治疗中心实验室完成.对体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE2分为光处理和无光处理各8个实验组及各分别设对照组和空白对照组,实验组分别加入0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/L血卟啉衍生物100 μL,每组设7个复孔;孵育4 h,对照组除不加光敏剂外其他与实验组相同,空白对照组只加培养基不加细胞和光敏剂.光处理实验组给予波长为630 nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20 mW/cm2,照射能量密度分别为20,10,5,2 J/cm2,继续孵育24 h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率.细胞存活率(%)=(实验组A值-空白对照组A值)/(对照组A值-空白对照组A值)×100%.每次实验重复3次,取平均值.结果:①血卟啉衍生物与CNE2细胞共同孵育后,采用630 nm的半导体激光照射可对其产生杀伤作用,杀伤作用大小与血卟啉衍生物的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01),但血卟啉衍生物浓度达2.5 mg/L以上时杀伤细胞作用无显著增加.激光能量为20 J/cm2,血卟啉衍生物的浓度为2.5 mg/L时,其杀伤CNE2细胞的作用明显.②在加入血卟啉衍生物而无激发光的情况下,血卟啉衍生物对鼻咽癌细胞生存不产生明显影响(P＞0.05).结论:血卟啉衍生物介导的光动力在体外可以对CNE2细胞产生杀伤效应,在一定范围内杀伤作用大小与血卟啉衍生物的浓度和激光剂量成正相关.
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激光定时照射后口腔及颈部肿瘤血流动力学及影像动态分析
目的:观察激光动力学治疗晚期口腔颌面部恶性肿瘤的效果.方法:选择2005-02/04在北京朝阳医院u腔科住院,年龄58～81岁,并做过根治性手术治疗及放射和化学冶疗的肿瘤患者8例(舌癌3例,颊癌3例,食管癌1例,乳腺癌颈部转移1例)进行激光动力学治疗.8例患者经光敏剂-血卟啉衍生物注射后,选用相应激光输出功率进行定时照射后进行部分瘤体血流动力学及影像动态学分析.结果:经激光动力学方法治疗后肿瘤明显缩小,瘤体内血流量降低,患者治疗后除伴有轻度照射区水肿外均无明显不适,水肿2周左右逐渐消退.结论:激光动力学方法应用于头颈部恶性肿瘤有良好的治疗功效,特别适用于临床年老,体弱等不适应用手术治疗的患者.
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光动力疗法对增生性瘢痕成纤维细胞中Smad3蛋白磷酸化的影响
目的 探讨增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)经过光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)诱导,Smad3蛋白在光动力疗法(PDT)中的磷酸化效应.方法 将原代培养的HSF分为对照组、PDT组、单纯光敏剂(PS)组和单纯(Laser)激光照射组,经Smad3-FITC染色后在荧光显微镜上观察各组细胞内Smad3的荧光强度；收集各组细胞经Western印迹法检测Smad3和磷酸化Smad3蛋白的含量.结果 在荧光显微镜下观察到各组总体荧光强度相近,但与对照组核内荧光聚集较明显相比,PDT组HSF核内荧光微弱；HSF中磷酸化Smad3蛋白经PDT治疗后含量降低,与对照组相比,二者差异有统计学意义(0.92±0.15比0.20±0.02,P＜0.05),PS组和Laser组中磷酸化Smad3蛋白表达,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDT能够降低Smad3蛋白磷酸化水平,从而抑制HSF增殖.
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血管内皮细胞和角质形成细胞对血卟啉单甲醚吸收特性的比较
目的 探讨血管内皮细胞(ECV304)和角质形成细胞(HaCaT)对光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)的吸收特性.方法 取对数生长期的ECV304和HaCaT细胞分别与50、100、150、200、250 mg/L HMME孵育16 h,或与150 mg/L HMME孵育15 min、30 min、1h、3h、8h、12h、24 h.激光扫描共聚焦显微镜检测孵育浓度及孵育时间对两种细胞吸收HMME的影响.结果 与上述5种浓度HMME孵育后,ECV304细胞的平均荧光强度分别为74.00、125.57、135.24、141.99、132.09,HaCaT细胞的平均荧光强度分别为93.88、102.45、112.59、108.23、104.70.与150 mg/LHMME孵育上述时间后,ECV304细胞的平均荧光强度分别为95.07、103.97、105.96、108.99、112.93、115.36、122.91,HaCaT细胞的平均荧光强度分别为104.25、106.60、108.72、113.75、117.66、114.90、118.14.结论 ECV304和HaCaT细胞对HMME的吸收在一定浓度范围和时间范围内均呈浓度和时间依赖性.
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半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在血卟啉单甲醚光动力学疗法中对瘢痕成纤维细胞的作用
目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase3)在增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)经光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)诱导的凋亡效应中的作用.方法 将原代培养的HSF分为对照组、HMME-光动力疗法(PDT)组和caspase3抑制剂(Z-DEVD-FMK)组,经caspase3-异硫氰酸荧光素(FTTC)-碘化丙啶(PI)染色后在荧光显微镜下观察各组细胞内caspase3的荧光强度.收集各组细胞,在活性caspase3-FITC单染后,经流式细胞术检测活性caspase3阳性细胞百分率；在PI单染后,经流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 对照组和caspase3抑制剂组HSF胞质中caspase 3-FTTC荧光微弱,PDT组荧光显著增强；对照组活性caspase3阳性细胞百分率低,HMME-PDT组(30.86％±1.21％)上升,caspase3抑制剂组(2.46％±0.18％)降低,后两组间比较,t=21.76,P＜0.05.PI染色分析表明,对照组凋亡率(2.45％±0.22％)低,PDT组(30.54％±3.78％)显著升高,两组比较,t=35.90,P＜0.05；caspase3抑制剂组凋亡率( 10.46％±2.15％)低于PDT组,但显著高于对照组(t=27.97,P＜ 0.05).结论 HMME-PDT诱导HSF发生的凋亡效应与caspase3的激活密切相关,但该凋亡效应并不依赖于caspase3.
关键词： 瘢痕疙瘩 血卟啉光照疗法 成纤维细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
光动力疗法与脉冲染料激光治疗鲜红斑痣的临床比较
目的：探讨光动力疗法（PDT）和脉冲染料激光（PDL）治疗鲜红斑痣的疗效差异，并比较两种疗法不良反应发生情况。方法将45例鲜红斑痣患者的自身皮损随机分成PDT治疗区和PDL治疗区。PDT区治疗区在避强光条件下静脉输注5 mg/kg血卟啉注射液，10 min后开始532 nm连续波激光照射，照射20 min后结束，照射功率密度80~100 mW/cm2，光斑直径7 cm；PDL治疗区采用595 nm脉冲染料激光照射，光斑7 mm，脉冲宽度10 ms，能量密度10~12 J/cm2。两种治疗之间至少间隔2个月。单次治疗后第4天、8周时随访，记录不良反应，并根据治疗前后临床照片对皮损消退情况进行分析。结果45例患者PDT治疗区基愈10例（22.22%），显效22例（48.89%），有效9例（20.00%），无效4例（8.89%）；PDL治疗区基愈6例（13.33%），显效16例（35.56%），有效18例（40.00%），无效5例（11.11%），PDT单次治疗的疗效明显优于PDL（Z=2.48，P<0.05）。PDT和PDL治疗组不良反应发生率分别为24.44%和15.56%，差异无统计学意义（Z=1.26，P>0.05），主要为治疗后色素沉着，3～6个月内自行消退。结论 PDT、PDL疗法治疗鲜红斑痣有效、安全，PDT单次治疗的疗效明显优于PDL单次治疗。
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极低出生体质量儿综合管理30例分析
目的 探讨极低出生体质量儿(VLBWI)的临床救治方法.方法 分析30例VLBWI的临床表现,并采取综合治疗措施:恒温箱保暖复温;加强呼吸及营养管理;控制血糖,维持电解质酸碱平衡;预防感染;注入血浆、白蛋白、丙种球蛋白支持治疗;对有高胆红素血症患儿给予蓝光治疗等.结果 存活出院22例,其中好转7例,平均住院32.5 d.结论 VLBWI治疗中,应着重加强保暖;严密监护呼吸,合理的鼻饲喂养及部分静脉营养;积极治疗各种并发症,严格执行消毒隔离制度.
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血卟啉衍生物介导的光动力疗法对人肺腺癌细胞杀伤效应的实验研究
目的 研究血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative, HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)对在体和离体人肺腺癌细胞A549的杀伤作用.方法 以MTT法检测HpD-PDT对A549细胞增殖抑制的量效关系,应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的影响.进一步构建A549细胞裸鼠移植瘤动物模型,通过绘制肿瘤生长曲线观察HpD-PDT对肺癌生长的抑制作用,并应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 HpD-PDT作用后,A549细胞增殖受抑,凋亡增加,显著高于对照组(P<0.05),且其抑制效率依赖于HpD浓度及激光剂量;裸鼠移植瘤动物模型肿瘤生长受抑、凋亡增加,也与对照组存在显著性差异(P<0.01).结论 HpD-PDT可有效杀伤肺腺癌细胞,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关.
