首页 > 文献资料
-
碱性成纤维细胞生长因子对人椎间盘细胞外基质合成及软骨调节素表达的影响
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人椎间盘细胞基质合成能力以及血管生长抑制因子软骨调节素-1(ChM-1)表达的影响,为椎间盘退变的生物学治疗提供可供参考的生长因子.方法 取4 例因腰椎间盘退变性疾病而于本院行腰椎间盘切除手术患者的椎间盘组织,分别进行髓核和纤维环细胞培养及表型鉴定.取传代细胞继续培养1 周后,向培养基中加入不同浓度的bFGF(0,0.1 ng/ml,1 ng/ml 和10 ng/ml),72 h 后收集细胞.采用Real-time RT-PCR 检测各组细胞中Aggrecan 和Ⅱ型胶原mRNA表达情况;同时利用Real-time RT-PCR和Western blot 方法检测bFGF 对ChM-1 mRNA和蛋白表达的影响.结果 bFGF 可明显抑制人椎间盘细胞外基质成分Aggrecan 和Ⅱ型胶原mRNA的表达(P<0.05).Real-time RT-PCR和Western blot 方法均提示bFGF 可抑制ChM-1 的表达水平(P<0.05),并具有剂量依赖性.结论 bFGF 在发挥分解代谢功能的同时还具有潜在的促进血管生长作用.
关键词： 椎间盘 碱性成纤维细胞生长因子 软骨调节素 退变 人 -
ChM-Ⅰ同源蛋白-Tenomodulin的表达与作用
软骨调节素-Ⅰ(chondromodulin-Ⅰ,ChM-Ⅰ)是近年来新发现的一种软骨源性生长因子,也是一种血管生成抑制剂.研究已证实,ChM-Ⅰ在软骨的无血管区高度表达,调节软骨的生长、分化及退变;ChM-Ⅰ在其他软骨样组织,如视网膜、软骨终板等也特异性表达,在维持组织的正常生理功能中发挥重要的作用.近来有研究者报道了一种与ChM-Ⅰ同源的新的蛋白质Tenomodulin(TeM),也称为ChM-IL或tendin[1].TeM在肌腱、韧带等缺乏血管的组织中高度表达,有关TeM结构、表达及作用的研究正逐渐兴起.
-
关节软骨细胞生物学特征的分子调节及其发生机制研究进展
关节软骨是略带弹性的坚韧组织，在机体内起支持和保护作用。关节软骨由软骨细胞、纤维和基质构成。很多关节疾病都是由于软骨损伤所造成，如半月板损伤、退行性关节炎、骨质增生、腰椎间盘突出等。软骨细胞分化过程的不同时期中软骨细胞的新陈代谢会发生相应变化，而软骨的分化过程受不同分子调节，目前已证实一些细胞因子如转化生长因子-β（transforming growth factor-β1, TGF-β）、骨形态发生蛋白（bone morpho-genetic protein, BMP）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）、胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors, IGF）、软骨调节素-Ⅰ（chondromodulin-Ⅰ, CHM-Ⅰ）等，及部分激素如生长激素（growth hormone, GH）、甲状腺激素（thyroid hormone, TH）、甲状旁腺激素（parathyroid hormone, PTH）、降钙素（calcitonin, CT）和雌激素（es-trogen, E）对软骨细胞的生长具有一定促进作用。本文就关节软骨细胞生物学特性的分子调节及其机制研究进展做一综述。
-
软骨调节素在成人退变椎间盘中的表达
目的 利用分子生物学及免疫组化方法研究软骨调节素(ChM-Ⅰ)在成人退变椎间盘细胞及椎间盘组织中的表达情况.方法 2009年3月至4月取3例因腰椎间盘退变性疾病而需行后路椎间融合患者的椎间盘组织分别进行髓核及纤维环细胞培养.取部分原代细胞利用RT-PCR和Western blot研究ChM-Ⅰ mRNA和蛋白在成人退变椎间盘细胞中的表达情况.利用real-time PCR和Western blot研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对髓核细胞和纤维环细胞ChM-Ⅰ mRNA和蛋白表达的影响.收集2008年10月至2009年10月因腰椎间盘退变性疾病而行手术切除的椎间盘组织标本26例,根据MRI表现退变程度为Ⅲ～V级,作为退变组.收集同期因脊柱肿瘤行手术治疗时切除的椎间盘标本6例,退变程度Ⅰ级,作为对照组.利用免疫组化方法研究ChM-Ⅰ在不同退变程度椎间盘组织中的表达情况.结果 RT-PCR、Western blot显示ChM-Ⅰ在椎间盘髓核细胞及纤维环细胞中均有表达.bFGF可抑制ChM-Ⅰ在髓核及纤维环细胞中的表达,且呈剂量依赖性(P＜0.05).ChM-Ⅰ在对照组椎间盘组织中表达量很低,阳性细胞率为0.12±0.03,而在椎间盘发生退变后其表达量明显升高,退变组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 髓核细胞及纤维环细胞可表达ChM-Ⅰ,bFGF可明显抑制ChM-Ⅰ mRNA及蛋白的表达.椎间盘发生退变后ChM-Ⅰ表达明显升高,提示其可能在椎间盘退变的病理过程中发挥一定的作用.
-
重组血管抑制剂CHM-Ⅰ对骨肉瘤的治疗作用
目的:观察重组人软骨调节素(chondromodulin,CHM)蛋白对骨肿瘤的治疗作用.方法:利用RT-PCR技术从人软骨组织中扩增出CHM-Ⅰ基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET28a,在大肠杆菌中诱导表达和纯化重组人软骨调节素蛋白,将重组蛋白与人脐静脉上皮细胞或MG-63骨肉瘤细胞共培养,观察其对内皮细胞形成管样结构和MG-63骨肉瘤细胞生长的影响;将重组蛋白局部注射裸鼠皮下肿瘤,观察其对肿瘤形成的影响.结果:获得纯化的重组人软骨调节素蛋白,该蛋白在体外可以抑制血管内皮细胞管样结构的形成而对肿瘤细胞的生长无影响;重组蛋白瘤内注射可以抑制肿瘤在裸鼠体内的生长.结论:重组人软骨调节素蛋白通过抑制血管形成而抑制肿瘤生长,具有良好的临床应用价值.
-
软骨调节素-Ⅰ的表达、定位与作用
软骨调节素(chondromodulin,ChM)是一族新的软骨源性生长因子,也是一种血管内皮细胞生长抑制剂.软骨调节素分为ChM-Ⅰ、ChM-Ⅱ、ChM-Ⅲ三种,其中ChM-Ⅰ是家族中效应强的一种软骨特异性生长因子.ChM-Ⅰ的结构、调控研究已较深入,ChM-Ⅰ表达的下降是软骨骨化和退变的重要原因,但有关ChM-Ⅰ在软骨生长过程中的作用尚存在部分争议.ChM-Ⅰ在软骨终板和椎间盘退变中的作用研究仍较少,目前尚缺乏ChM-Ⅰ作用的受体、受体结构及理化性质以及生长因子介导的细胞内信号传递过程的研究.
-
人软骨调节素基因的克隆与纯化
目的 克隆人软骨调节素I(CHM-I)cDNA,并在原核表达系统中表达和纯化.方法 利用RT-PCR技术从人软骨组织中扩增出CHM-I基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达;对在N 末端融合了6 ×His 纯化标签的表达产物进行Western blot分析和用Ni2 +2NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白进行SDS-PAGE 纯度分析.结果 获得了人软骨调节素cDNA,并成功构建了高效原核表达质粒pET(CHM-I),能有效表达CHM-I蛋白,且CHM-I蛋白的纯度高于90%.结论 原核表达系统可有效克隆较高纯度的CHM-I基因.
