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T型钙通道及其作用药物研究进展
T型钙通道广泛分布于心血管,神经和内分泌等系统,目前已成为药物靶点研究的热点.近年来编码T型钙通道的基因已被确定,它的重要功能也得到认识.许多药物可以非特异性的阻断T型钙通道.文章从分子结构、分布、功能、调控及作用药物等方面对T型钙通道目前的研究作一综述.
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溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞动作电位的影响及其机制研究
目的:探讨溶血磷脂酰胆碱(LPC)对心肌细胞动作电位的影响及内在机制.方法:以胶原酶消化法获取1～3 d新生Wistar大鼠心室肌细胞(共5批,每批8只),以及特异性人类心脏T型钙通道α1亚基在HEK293细胞上稳定表达的细胞株(HEK293-Cav3.1和HEK293-Cav3.2),孵育传代培养进行全细胞膜片钳记录.结果:LPC(10 μmol/L)或佛波酯(PMA,1μmol/L))显著增快了新生大鼠心室肌细胞自发跳动.LPC显著增大了新生大鼠心室肌T型Ca2+通道电流(ICa,T),且这种增大作用能被特异的心肌T型钙离子通道α1亚基Cav3.2阻断剂Ni2+显著抑制.Ni2+显著抑制了心室肌细胞自发动作电位的频率,特别是对LPC作用下的自律性提高,但是Ni2+没有完全抑制PMA的促进作用.结论:LPC主要通过调控Cav3.2亚基而增大ICa,T,促进心肌自律性增高,从而致心律失常发生.
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钩藤碱抑制骶上脊髓损伤大鼠膀胱T型钙通道的机制
目的 探讨钩藤碱对骶上脊髓损伤(SCI)大鼠的膀胱功能障碍治疗作用与膀胱逼尿肌T型钙通道受体亚型(α1G)表达改变的关系.方法 将60只SD大鼠随机分为钩藤碱组、对照组、假手术组,每组20只,造模后分别腹腔注射钩藤碱5 ml/(kg·d)、等体积生理盐水、不给予药物干预.用尿动力仪评估膀胱功能;膀胱组织苏木素-伊红(HE)染色;用免疫组织化学法检测膀胱酪氨酸激酶受体(C-kit)、α1G的表达.结果 钩藤碱组膀胱大容量较对照组增加(64.00±0.42)％、漏尿点压及收缩频率分别下降(16.00±0.31)％和(13.00±0.26)％ (P ＜0.01).HE染色显示钩藤碱组逼尿肌紊乱及水肿程度较对照组低.免疫组织化学检测显示钩藤碱组大鼠C-kit、α1G受体表达量较对照组明显下降.结论 钩藤碱可抑制膀胱Cajal间质细胞(ICCs)表面α1G的表达,从而降低骶上脊髓损伤后大鼠膀胱逼尿肌兴奋性.
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心肌细胞膜T型钙通道的研究进展
心肌细胞膜表面存在L和T型钙通道,T型钙通道在心脏起搏及调控细胞生长和繁殖方面的作用日益受到人们的重视.T型钙通道拮抗剂在心血管疾病治疗中具有重要作用,研制新型特异性T通道拮抗剂是心血管疾病治疗中的一个重要方向.
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甲状腺素对大鼠心肌T型钙通道蛋白和mRNA的影响
目的:观察甲状腺素对大鼠心肌T型钙通道Cav3. 1、Cav3. 2和Cav3. 3表达的影响,探讨T型钙通道表达变化与甲亢性心脏病引起的心律失常之间的关系.方法:选取健康SD大鼠20只,随机分为正常对照组和甲亢性心脏病组(n=10),腹腔注射L-甲状腺素(0.5 mg/kg)连续35 d 建立大鼠甲亢性心脏病模型.检测各组大鼠血清T3和T4的含量,测定各组大鼠心脏指数和心肌细胞横径,并行心电图检查;免疫组化和Western blot检测各组大鼠心肌T型钙通道蛋白的表达;RT-PCR检测心肌T型钙通道mRNA的表达.结果:造模35 d后与正常对照组比较,甲亢性心脏病组大鼠血清T3和T4含量明显升高,心脏指数和心肌细胞横径明显增加( P<0.05),并发生心律失常;免疫组化、Western blot和RT-PCR结果显示,甲亢性心脏病组大鼠心肌Cav3. 1表达较正常对照组明显增加(P<0.05),Cav3.2表达明显减少(P<0.01),Cav3.3的表达无变化.结论:甲状腺素可促进心肌Cav3.1 mRNA和蛋白的表达,抑制Cav3.2 mRNA和蛋白的表达,而对Cav3.3的表达则没有影响. Cav3.1和Cav3.2的表达变化可能与甲亢性心脏病心律失常的发生有关.
关键词： 甲状腺素 甲状腺功能亢进性心脏病 T型钙通道 心律失常 -
大鼠脊髓背角胶状质神经元的去极化反跳及调控机制
目的 研究大鼠脊髓背角胶状质(SG)神经元的去极化反跳及调控机制,以期对去极化反跳相关疾病的临床治疗提供参考.方法 选取3～5周龄SD大鼠,制作离体脊髓纵切片,应用全细胞膜片钳技术记录SG神经元的电生理学特点及接受超极化刺激后的反应,并观察超极化激活环核苷酸门控阳离子(HCN)通道阻断剂和T型钙(Cav3)通道阻断剂对去极化反跳的作用.结果 共记录了63个SG神经元的电活动,其中23个无去极化反跳,19个为去极化反跳无放电,21个为去极化反跳伴放电.无去极化反跳组SG神经元的动作电位阈值(-28.7±1.6 mY)明显高于去极化反跳伴放电组(-36.0±2.0 mV)(P＜0.05).HCN通道阻断剂氯化铯和ZD7288可显著延长去极化反跳伴放电的潜伏期,分别从45.9±11.6 ms增加到121.6±51.3ms(P＜0.05)和从36.2±10.3 ms增加到73.6±13.6ms(P＜0.05);ZD7288也能显著延长去极化反跳不伴放电的潜伏期,从71.9±35.1 ms增加到267.0±68.8 ms (P＜0.05),而T型钙通道阻断剂氯化镍和米贝地尔可显著降低去极化反跳伴放电的振幅,分别从19.9±46.3 mV降到9.5±4.5 mV(P＜0.05)和从26.1±9.4 mV降到15.5±5.0mV(P＜0.05),米贝地尔同样能显著降低去极化反跳不伴放电的振幅,从14.3±3.0 mV降低至7.9±2.0 mY(P＜0.05).结论 近2/3的SG神经元有去极化反跳,其潜伏期和振幅分别受HCN通道和T型钙通道调控.
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T型钙通道α1亚基在早产小鼠子宫平滑肌组织中的表达及意义?
目的：探讨早产小鼠子宫平滑肌组织中T型钙通道α1亚基蛋白及mRNA的表达及临床意义。方法利用脂多糖建立小鼠感染性早产模型,通过Real-time PCR、免疫组织化学及Western blot方法检测早产小鼠及同孕龄非早产小鼠子宫平滑肌组织中T型钙通道α1亚基mRNA及蛋白的表达。结果在小鼠子宫平滑肌组织中,Real-time PCR结果显示T型钙通道α1亚基表达的主要亚型为Cav3．1及Cav3．2,Cav3．3不表达。无论在mRNA水平还是蛋白水平,Cav3．1及Cav3．2在早产小鼠的表达明显高于非早产小鼠。结论 T型钙通道的表达变化可能参与了小鼠感染性早产的发生,拮抗T型钙通道有望用于防治早产。
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米贝地尔对罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究
目的:观察T型钙通道拮抗剂米贝地尔对罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡的影响,探讨罗哌卡因诱发神经细胞毒性是否与T型钙通道相关.方法:将SH-SY5Y细胞随机分为4组:SH-SY5Y细胞正常培养组(A组); SH-SY5Y细胞5 ?滋mol/L米贝地尔培养组(B组); SH-SY5Y细胞3 mmol/L罗哌卡因培养组(C组);SH-SY5Y细胞5 ?滋mol/L米贝地尔+3 mmol/L罗哌卡因培养组(D组).各组细胞分别在有或无3 mmol/L罗哌卡因处理开始时(T0)、处理后1 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4),MTT法检测细胞活力、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率.结果:与A组相比,C组、D组在T1、T2、T3、T4时点细胞活力明显降低(P ＜ 0.05);但C组降低幅度更明显,C组与D组比较,两组在T1、T2、T3、T4时点差异有统计学意义(P ＜ 0.05).C组随时间的递增其细胞凋亡率逐渐增加,在T4时凋亡率达到高;D组在T1、T2、T3、T4时点的细胞凋亡率明显比C组降低,两组差异有统计学意义(P ＜ 0.05).结论:罗哌卡因对SH-SY5Y细胞有毒性作用,米贝地尔可减轻罗哌卡因诱发的神经细胞损伤,提示罗哌卡因诱发神经毒性可能与T型钙通道有关.
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二氢吡啶类钙通道阻滞药的研究进展
目的:为二氢吡啶类钙通道阻滞药(DHP-CCBs)的研究提供参考.方法:以“Dihydropyridines”“Calcium channel blockers”“Calcium antagonists”“二氢吡啶”“钙通道阻滞药”等组合作为关键词,查阅2004-2013年PubMed、ScienceDirect、中国知网全文数据库等中关于DHP-CCBs的文献,就DHP-CCBs的分子机制、各种新型制剂及新的药理作用等进行汇总分析.结果:新型DHP-CCBs不断涌现并各具特点:L/N型DHP-CCBs除具有抗高血压作用之外,还可减少患者“白大衣”效应、蛋白尿等现象的发生;N型DHP-CCBs还可用于镇痛,且无阿片类药的不良反应;L/T型DHP-CCBs在降压的同时,还具有肾脏保护作用;具有超短效特点的氯维地平可用于高血压急症的治疗.此外,DHP-CCBs在抗动脉粥样硬化作用以及对纤溶活性、交感活性和CYP3A4酶活性的影响等方面的研究也取得了一定进展.结论:DHP-CCBs在抗高血压方面的优势正日益突出,其应用前景将更加广阔.
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脑外伤后 T型钙通道对神经干细胞增殖的诱导作用
目的：探讨脑外伤后T型钙通道对神经干细胞的诱导作用及其相关机制。方法构建成年大鼠脑损伤模型，分为手术组和手术＋米贝地尔组（米贝地尔组），并另设正常对照组、假手术组。分离侧脑室壁的脑室下层（subven‐tricular zone ，SVZ）细胞，用神经干细胞悬浮培养法进行培养并鉴定其干细胞性质；在神经干细胞培养基中加入不同剂量的米贝地尔，通过计数神经干细胞球、噻唑蓝（MTT）法分析米贝地尔对神经干细胞增殖抑制作用，计算米贝地尔对神经干细胞的半抑制浓度（IC50），Western blot法检测脑组织中Cav3．2以及神经干细胞中Cav3．2、Cyclin A 和caspase‐3的蛋白表达。结果体内实验表明，手术组中神经干细胞的增殖能力显著高于正常对照组和假手术组，应用米贝地尔腹腔注射抑制脑组织中T型钙通道后，神经干细胞的增殖明显降低。体外细胞实验表明，米贝地尔能够明显抑制神经干细胞球的形成，M T T法显示米贝地尔浓度大于5μmol／L时，可显著抑制细胞增殖，5、10、20μmol／L组的吸光度（A值）与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0．05）。IC50值为8．93μmol／L。Western blot检测结果显示，米贝地尔组的Cav3．2蛋白和Cyclin A蛋白的表达显著降低，caspase‐3蛋白的表达显著升高。结论脑外伤后可激活脑组织中T型钙通道，上调神经干细胞的增殖能力。
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溶血磷脂酰胆碱对T型钙离子通道的心肌细胞内信号调控机制
目的 探讨溶血磷脂酰胆碱(LPC)对T型钙离子通道的心肌细胞内信号调控机制.方法 以胶原酶消化法分离新生Wistar大鼠单一心室肌细胞,进行膜片钳试验,记录动作电位或钙离子通道电流(对照组),灌流含有LPC(10 μmol/L)或佛波酯(PMA,1μmol/L)的细胞外液10 min后,再次记录动作电位或钙离子通道电流(治疗组);用人类心脏T型钙离子通道α1亚基在HEK293细胞上稳定表达的细胞株(HEK293-Cav3.1和HEK293-Cav3.2),进行传代孵育培养24h,然后行全细胞膜片钳记录.结果 LPC或PMA显著提高了大鼠心室肌细胞自律性[对照组:(43±8)次/min;LPC组:(65±7)次/min;PMA组:(76±9)次/min],LPC作用下大动作电位上升速度(Vmax)和大舒张期电位(MDP)处理前后均无明显改变[(3.2±0.8)v/s比(3.1±0.7) v/s,P＞0.05);(-56.8±1.4)mV比(53.6±1.9) mV,P＞0.05].LPC处理后显著增大了大鼠T型钙离子通道电流[(4.6±0.7)pA/pF比(5.9±1.1) pA/pF,P＜0.05)],且这种作用能被T型钙通道α1亚基Cav3.2的阻断剂Ni2+显著抑制.Ni2+抑制了心室肌细胞的动作电位频率,主要抑制了LPC的心率加速作用,部分抑制了PMA的加速心率作用.结论 LPC主要调控Cav3.2亚基上调T型钙离子通道电流,通过钙离子依存的PKC激活方式,致心脏在病理生理条件下发生心律失常.
