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下调PTEN基因对偏头痛大鼠三叉神经节NMDAR1和一氧化氮的影响
目的:利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因( phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达,探讨PTEN基因是否参与偏头痛的病理过程及其对三叉神经节内N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚基(N- methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1,简写NR1)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响.方法:SD大鼠分成4组:假手术组(Sham组,n=12)；硝酸甘油模型组(NTG组,n=12)；PTEN基因下调组(AdR-siPTEN组,n=12)；Ad-RFP非特异siRNA处理空载体对照组(Ad-RFP组,n=12).将重组腺病毒立体定向注射入大鼠三叉神经节内,一周后通过皮下注射NTG建立偏头痛大鼠模型,分别于NTG注射前及注射后15分钟、30分钟、1、2、4小时观察大鼠痛闽变化,同时检测各组大鼠三叉神经节NR1和NO的差异.结果:AdR-siPTEN腺病毒可下调三叉神经节PTEN基因的表达.与Ad-RFP组相比,AdR-siPTEN组的偏头痛大鼠痛阈明显增高,并且三叉神经节内NR1表达及NO合成明显减少.结论:PTEN基因参与调节偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可减轻NTG诱导的偏头痛大鼠模型对机械性刺激的反应,其机制可能是下调PTEN引起NR1表达量减低,继而引起NO含量降低所致.
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PTEN基因沉默骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死
背景：骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死是近年来的研究热点，但是心肌梗死区域的缺血缺氧微环境和早期炎症反应不利于移植细胞的存活，影响治疗效果。
目的：探讨PTEN基因沉默骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死的效果。
方法：①SD 大鼠骨髓间充质干细胞随机分为3组，空白对照组不进行任何处理，阴性对照组用Lipofectamin2000转染无意义的 NCsiRNA，RNAi 组用 Lipofectamin2000转染 PTEN 基因特异的siRNA。采用MTT法描绘细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期；②取30只SD大鼠建立心肌梗死模型，随机分为3组，每组10只，分别为空白对照组、阴性对照组、RNAi组。建模6 h后，使用微量注射器和立体定位仪在左心室前壁梗死区中心注射相应的骨髓间充质干细胞，治疗后4周进行超声心功能检测，采用荧光显微镜观察细胞的存活和增殖情况。
结果与结论：①RNAi组骨髓间充质干细胞在培养各时间点的吸光度值均显著大于空白对照组和阴性对照组；②RNAi组S+G2期细胞占总数的比例显著大于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)；③RNAi组大鼠心肌组织中骨髓间充质细胞数量显著多于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)；④治疗4周，RNAi组的左心室射血分数、左心室短轴缩短率显著小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)；⑤体外实验表明PTEN基因沉默能有效地促进骨髓间充质干细胞的增殖，抑制细胞凋亡；⑥体内实验表明PTEN基因沉默的骨髓间充质干细胞在心肌梗死区域更易存活和扩增，心功能改善明显。 -
Ad-PTEN对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的抑制作用
目的 研究重组腺病毒第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对小细胞肺癌的抑癌增效和化疗增敏效应及其分子机制.方法 采用重组腺病毒载体PTEN(简称Ad-PTEN)感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定.将Ad-PTEN感染NCI-H446小细胞肺癌细胞.分为5组:PBS组、空载体Ad组、Ad-PTEN组、顺铂(DDP)组和Ad-PTEN+ DDP组,Western blot鉴定PTEN基因表达,MTT法和流式细胞仪(FCM)检测Ad-PTEN对NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的增效作用,用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53、bax、caspase-3、bcl-2、和survivin的转录.结果 Ad-PTEN可在QBI-293A细胞中增殖.Ad-PTEN感染NCI-H446细胞后,Western blot检测到了PTEN基因的表达.Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN+ DDP组体外能明显抑制人NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长和诱导凋亡,且Ad-PTEN+ DDP组效应较Ad-PTEN组、DDP组更为显著(均P＜0.05).Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN+ DDP组的NCI-H446细胞中的p53、bax及caspase-3基因表达均上调,而Bcl-2和Survivin基因表达均下调,这些凋亡相关基因的上调或下调的表达趋势以Ad-PTEN+ DDP组显著(均P＜0.05).结论 Ad-PTEN体外可抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞生长,Ad-PTEN对DDP的细胞毒作用具有增敏效应,其机制可能与上调p53、bax及caspase-3基因表达和下调bcl-2和survivin基因表达有关.
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非小细胞肺癌组织p-mTOR、p70s6k、PTEN蛋白的表达变化及其意义
目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中磷酸化的哺乳动物雷帕霉素蛋白(p-mTOR)、核糖体40 S小亚基S6蛋白激酶(p70s6k)及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义.方法 选取NSCLC组织标本82例份为肺癌组,肺癌同侧远端肺泡组织标本46例份为肺泡组,正常支气管黏膜标本50例份为支气管组.采用SP免疫组织化学法检测各组p-mTOR、p70s6k及PTEN.分析PTEN、p70s6k及p-mTOR表达与NSCLC临床病理参数的关系.结果 肺癌组p-mTOR、p70s6k阳性表达率均高于肺泡组及支气管组(P均＜0.05).肺癌组PTEN阳性表达率均低于肺泡组及支气管组(P均＜0.05).p-mTOR表达与NSCLC肿瘤分化程度、临床分期有关(P均＜0.05),PTEN表达与NSCLC肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(P均＜0.05).NSCLC组织PTEN与p-mTOR、p70s6k阳性表达呈负相关(r=-0.38,-0.478;P均＜0.01);p-mTOR、p70s6k阳性表达呈正相关(r=0.311,P＜0.01).结论 NSCLC存在p-mTOR、p70s6k高表达及PTEN低表达,p-mTOR、p70s6k可能协同促进NSCLC的发生发展,PTEN可能在NSCLC的发生发展中起抑制作用.
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PTEN在神经系统损伤、心血管疾病发生发展中的作用研究进展
第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)是一种具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因,可通过多种作用机制参与调控细胞的迁移、生长代谢、细胞周期等.PTEN与神经系统损伤密切相关,PTEN的下调可调控细胞的增殖和周期发生变化,在中枢神经系统损伤的修复过程中对神经的形成和再生起关键作用.PTEN可通过负性调控心血管系统多种信号通路和蛋白,参与各种原因所致心肌肥厚的病理过程;此外,PTEN在动脉粥样硬化等大血管疾病和缺血再灌注损伤的靶向治疗中也发挥着重要作用.
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对涎腺腺样囊性癌中PTEN基因表达的影响
目的:研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)对涎腺腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞中抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的影响及可能的机制.方法:利用RT-PCR检测ACC细胞经甲基转移酶抑制剂5-Aza-dc作用后,PTEN基因mRNA的表达水平；Western blot检测5-Aza-dc干预对PTEN蛋白表达的影响.结果:在一定时间内,经5-Aza-dc作用后,ACC细胞中PTEN基因mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,且差异有统计学意义(P＜0.05),PTEN mRNA表达水平改变与PTEN蛋白的表达基本一致.结论:ACC细胞系中PTEN的低表达可能与PTEN基因启动子区甲基化状态有关.
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下调PTEN基因对全脑缺血大鼠学习记忆能力和CREB表达的影响
目的:探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element- binding protein,CREB)的表达调控作用.方法:采用海马局部注射pshRNApten基因质粒,建立SD大鼠全脑缺血再灌注模型,利用体感诱发电位(Somatosensory evoked potential,SEP)和穿梭箱分别检查大鼠功能和行为学变化,RT-PCR和免疫组化检测海马神经元CREB mRNA和蛋白的表达.结果:穿梭箱实验发现pshRNApten各治疗组主动回避反应(Active avoiding reaction,AAR)习得率较pshGFP组明显提高;SEP检查显示,pshRNApten组较pshGFP组波幅明显上升,峰潜伏时缩短;pshRNApten组海马神经元CREB基因的mRNA和蛋白表达量较对照组明显上升;以上结果差异均具有统计学意义(P＜0.05)5结论:下调PTEN基因能增强全脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力,其机制可能与下调PTEN引起CREB表达量增加有关.
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血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响
目的 以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞(CFC),观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达.方法 以AngⅡ(1×10-7mmol/L)刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达.结果 MTT测定的结果:32 h后 AngⅡ刺激组的吸光值(A)显著高于该时间点对照组(P＜0.05),与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降(P＜0.05),TGF-β1基因显著上调(P＜0.05).结论 在AngⅡ的刺激下,CFC 的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖.
