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人脐静脉内皮细胞原代培养失败分析
目的:总结人脐静脉内皮细胞原代培养失败经验,帮助同行提高操作成功率.方法:不断改进实验技术,促进实验成熟.结果:历经28次实验失败,获得人脐静脉内皮细胞原代培养成功.结论:人脐静脉内皮细胞原代培养只要细心摸索实验条件,掌握该技术并不难.
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肽类生长因子及苏拉明对体外培养人脐静脉内皮细胞生长的影响
目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和苏拉明(suramin)对体外培养人脐静脉内皮细胞生长(HUVEC)的影响,旨在探讨他们在肿瘤血管生成和抗肿瘤血管生成中的作用.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞EV-304,一组用不同浓度的bFGF(0.01、0.1、1.0、10、100 ng/mL)进行培养,另一组在用不同浓度的苏拉明(0.01、0.1、1.0、10、100 μmol/L)培养6 h后加入浓度为10 ng/mL的bFGF再进行培养.结果:bFGF 可明显刺激内皮细胞的生长,而 Suramin 可阻止 bFGF 对内皮细胞的生长刺激.结论:苏拉明对体外培养内皮细胞的生长抑制作用可能是通过中和肽类生长因子如bFGF及引起内皮细胞凋亡来实现的.
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人arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的抑制
目的:观察人arresten因子对人脐静脉内皮细胞HUVEC与LOVO细胞黏附的影响,探讨与之相关的黏附分子表达的变化.方法:半定量RT-PCR检测arresten对人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA的影响,Western-blot检测VCAM-1蛋白表达的变化.孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的影响.结果:RT PCR及Western-blot结果表明VCAM-1在HUVEC细胞中高表达,但经过arresten因子处理的HUVEC细胞,其VCAM-1在mRNA水平及蛋白水平的表达均显著下降(P＜0.05).孟加拉玫瑰红活细胞染色法显示arresten能抑制HUVEC细胞与LOVO细胞的黏附.结论:arresten因子通过降低内皮细胞VCAM-1的表达抑制内皮细胞与肿瘤细胞的黏附,这可能是其抑制肿瘤转移的一种途径.
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叶酸对同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用
目的:通过培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响,并观察叶酸的干预是否能够削弱Hcy对HUVEC的细胞毒作用.方法:将培养的HUVEC细胞分成8组,将其与不同浓度的Hcy(100,200,500,1000,2000 μmol/L)和叶酸(100 μmol/L)共同培养20 h,分别利用MTT、苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察HUVEC细胞的生长及凋亡情况.结果:HUVEC与不同浓度的Hcy培养20 h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过500μmol/L的Hcy对HUVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加,由于对照组的56.3%上升至60.0%(Hcy 100 μmol/L),63.1%(Hcy 200 μmol/L),64.4%(Hcy 1 000 μmol/L),73.9%(Hcy 2 000 μmol/L);100 μmol/L的叶酸能够在一定程度上抑制Hcy诱导凋亡的作用.结论:高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长并促进其凋亡,而叶酸则具有保护性.
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普罗布考对氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人内皮细胞TOLL样受体4表达及单核内皮细胞黏附功能的影响
目的:探讨普罗布考对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞TLR4表达及其黏附功能的影响,为进一步研究普罗布考抗动脉粥样硬化的机制,发现抗动脉粥样硬化形成的新靶点提供理论依据.方法:应用RT-PCR,Western Blot技术检测了普罗布考对ox-LDL诱导的细胞TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响,同时用孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察不同浓度普罗布考对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)对单核细胞黏附的影响,并利用相关性检验分析两者间的相关性.结果:ox-LDL能明显上调HUVECs TLR4的表达,并呈一定的剂量依赖性(t=3.04～12.52,P<0.01).普罗布考呈浓度依赖方式抑制ox-LDL诱导HUVECs TLR4表达,同时也能明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs对单核细胞黏附(t=5.30,19.23,P<0.01).相关性分析显示两者间有明显的正相关性(r=0.996,P<0.01).结论:普罗布考除具有调脂作用外,尚可通过抑制ox-LDL诱导的内皮细胞TLR4受体的表达和抑制单核细胞与内皮细胞黏附聚集,发挥抗炎作用;TLR4可能成为防治动脉粥样硬化的新靶点.
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搏动信号对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成酶表达的影响
目的:观察搏动信号对人脐静脉内皮细胞中反映内皮细胞活性的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响.方法:实验于2004-06/2005-03在湘雅二医院心胸外科生物材料研究室和上海生物工程有限公司进行.将取自剖宫产产妇自愿捐献的无菌脐带的人脐静脉内皮细胞培养、传代,传4代后分为两组:①搏动培养组:先静放6～8 h待细胞贴壁后,用自行设计的细胞搏动培养装置,进行搏动培养.搏动参数:搏动频率150次/min,搏出量0.3 mL/次,搏动产生的压力30/9mm Hg(1mm Hg=0.133kPa).②静态培养组:不进行搏动,其余条件同搏动培养组.每组每个时间点5个样本.用反转录-聚合酶链反应方法,分别在第1,2,4,6,9,12,15,18天检测两组的人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达水平(相对吸光度值).结果:人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达:①培养第1,4天,静态培养组明显高于搏动培养组(1.0±0.55比1.10±0.35;1.17±0.23比1.42±0.44,P＜0.05).②培养第2天两组比较差异不显著(1.16±0.18比1.25±0.35,P＞0.05).③培养第6,9,12,15,18天,搏动培养组明显高于静态培养组(1.52±0.14比1.27±0.30;1.60±0.19比1.16±0.33;1.68±0.44比0.99±0.31;1.7±0.24比1.1±0.94;1.7±0.16比1.0±0.28,P＜0.05).结论:搏动信号能提高人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达.提示搏动信号在维持细胞发挥正常的生理功能方面起到重要的作用,能增强细胞的生物活性.
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辛伐他汀对人脐静脉内细胞CD40/CD40L表达的影响
目的:探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响.方法:实验于2004-03/06在中南大学湘雅二医院实验室完成.实验所用脐带于无菌条件下取自本院产房健康新生儿,产妇知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准.辛伐他汀原粉由杭州默沙东制药公司提供.原代培养人脐静脉内皮细胞,实验在第4代有70%细胞汇合的情况下进行.低密度脂蛋白快速分离后加入含10μmol/L硫酸铜的磷酸盐缓冲液氧化修饰24 h,在准备后15 d内用于实验.采用流式细胞技术检测CD40/CD40L在细胞上的表达,采用逆转录多聚酶链式反应检测NF-κB P65mRNA,同时行细胞免疫化学染色检测细胞NF-κB P65的表达.观察辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L分子和NF-κB P65mRNA的影响实验中,共分5组:①空白对照组,给予磷酸盐缓冲液.②氧化低密度脂蛋白刺激组,80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h.③低浓度辛伐他汀组,先予1 μmol/L辛伐他汀干预1 h,再予80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h.④高浓度辛伐他汀组,先予10 μmol/L辛伐他汀干预1 h,再予80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h.⑤单纯辛伐他汀组,10μmol/L辛伐他汀干预25 h.免疫化学检测人脐静脉内皮细胞NF-κB P65分子表达的实验中,共分3组:①空白对照组,给予磷酸盐缓冲液.②氧化低密度脂蛋白刺激组,80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h.③辛伐他汀组,10μmol/L辛伐他汀干预1 h,再予80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h.结果:①氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞后CD40/CD40L的表达情况:20～80 mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24 h后,CD40/CD40L的表达以浓度依赖和时间依赖的方式增加.②辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响:预先给予辛伐他汀(1μmol/L和10 μmol/L)干预1h明显降低氧化低密度脂蛋白所致的CD40/CD40L表达,与单纯氧化低密度脂蛋白刺激组比较,差异显著(P均＜0.05);10 μmol/L的高浓度辛伐他汀较1 μmol/L的低浓度辛伐他汀作用更明显(P＜0.05);而单纯给予10 μmol/L的辛伐他汀干预不影响人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达.③辛伐他汀对NF-κB P65 mRNA在人脐静脉内皮细胞表达的影响:人脐静脉内皮细胞中加入80 mg/L氧化低密度脂蛋白培养24 h后NF-κB mRNA的表达明显高于空白对照组(0.53±0.06,0.08±0.01,P＜0.01).而预先给予1 μmol/L辛伐他汀孵育1h显著降低氧化低密度脂蛋白刺激升高的NF-κB P65 mRNA,明显低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组(0.31±0.04,0.53±0.06,P＜0.01).高浓度组(10 μmol/L)作用更显著,显著低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组(0.14±0.04,0.53±0.06,P＜0.01),而单纯给予辛伐他汀(10 μmol/L)不影响人脐静脉内皮细胞NF-κB P65 mRNA的表达.结论:氧化低密度脂蛋白以浓度和时间依赖的方式刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L,而辛伐他汀以剂量依赖的方式减轻氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达,可能与其抑制人脐静脉内皮细胞的NF-κB P65的表达有关.提示辛伐他汀可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而到达抗动脉硬化的作用.
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丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验
目的:观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4 mRNA水平和细胞凋亡的变化,以及丹参红花提取物的干预作用.方法:实验于2005-11/2006-05在卫生部老年医学重点实验室完成.取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组.②无血清培养组:用无血清培养基培养24 h.③低密度脂蛋白处理组:以含有800mg/L低密度脂蛋白的培养基培养16 h.④丹参红花提取物预处理组:用丹参红花提取物(商品名丹红滴注液,由陕西步长集团提供浓缩液,国药准字号Z 20026866/Z 20026867)预处理24 h后加入800 mg/L低密度脂蛋白继续培养16 h或在无血清培养基中培养24 h.以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响;应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4 mRNA水平;用流式细胞仪分析细胞凋亡率;并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量.结果:①低密度脂蛋白处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍,1.2倍和4倍.②无血清培养组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1.4倍、1.6倍和3倍.③丹参红花提取物预处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0.4倍,0.5倍和0.2倍.④丹参红花提取物组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0.2倍、0.5倍和0.6倍.结论:丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4 mRNA表达水平,从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡,对内皮细胞起到很好的保护作用.
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低频电磁场对培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的影响
背景:目前认为经磁场作用的酶,大多有增强活性的倾向,而关于低频电磁场(1owfrequency electromagneticfield,LFEMF)对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性表达的影响研究不多见.目的:探讨不同磁场强度,不同作用时间的LFEMF对HUVEC的NOS活性表达的影响,以探讨LFEMF用于经皮冠脉腔内成形术(percutanuoustransluminal coronary angioplasty,PTCA)及支架植入术后冠脉再狭窄防治的意义.设计:随机对照的实验研究.地点、材料和干预:本研究在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成.体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV304按LFEMF的不同磁场强度,不同作用时间分为9个实验组和1个对照组进行干预.进行ABC免疫酶染色后图像分析法观察HUVEC的NOS表达.主要观察指标:非磁场干预与不同强度磁场干预的体外培养的人脐静脉内皮细胞NOS结果.结果:除60mT 20min组,60mT 30min组外,其余各实验组内皮细胞结构型NOS(Endothelium Constructive nitric oxide synthase,ecNOS)表达均较对照组增强,差异有显著性意义(P＜0.05).所有实验组与对照组诱生型NOS(Induced nitric oxide synthase,iNOS)均无表达.结论:LFEMF增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达,可能适用于再狭窄的防治.
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组织型纤溶酶原激活因子构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性
背景:组织型纤溶酶原激活因子被认为是血管系统内初期血栓清除的关键酶.目的:构建pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,观察外源性组织型纤溶酶原激活因子的表达情况.设计:随机对照实验.单位:中南大学湘雅二医院及中国医学遗传学国家重点实验室.材料:实验于2002-09/2003-06在中国医学遗传学国家重点实验室完成.脐静脉内皮细胞取自中南大学湘雅二医院健康产妇分娩后胎盘脐带,pcDNA3.1为SmithKline Beecham公司赠送.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子,并将pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子转入人脐静脉内皮细胞,用酶联免疫吸附法定量检测转基因后组织型纤溶酶原激活因子蛋白表达情况、发色底物法检测外源性组织型纤溶酶原激活因子活性.以转pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞为观察对象,未转pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞作为对照.主要观察指标:组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量及活性测定结果.结果:①组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量表达结果为568.6 ng/106细胞/24 h,未转pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为17.8 ng/106细胞/24 h.②组织型纤溶酶原激活因子活性为108.8 IU/106细胞/24 h,未转pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为5.6IU/106细胞/24 h.结论:pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子转染人脐静脉内皮细胞后,外源性组织型纤溶酶原激活因子基因获有效表达,为pcDNA3.1(+)组织型纤溶酶原激活因子转入人体细胞确立了有效依据.
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超顺磁性氧化铁对血管内皮细胞的生物学影响及其磁共振成像效应
目的:研究磁共振对比剂超顺磁性氧化铁(SPIO)对血管内皮细胞生物学影响及磁共振成像的可能性,为SPIO对血管内皮细胞靶向性成像提供依据.方法:采用经典共沉淀法,合成柠檬酸包被的SPIO.实验组为浓度分别为0.01、0.05、0.10、0.15 mg/ml的SPIO,共同孵育人脐静脉血管内皮细胞,对照组为细胞在不含SPIO的培养液中孵育.采用普鲁士蓝染色,评价血管内皮细胞对SPIO的摄取情况.采用Calcein-AM法检测细胞活性的变化.通过免疫荧光染色对血管内皮细胞的肌动蛋白、微管蛋白进行荧光染色,评价血管内皮细胞骨架的变化.采用免疫荧光染色的方法,对局部粘着斑蛋白激酶(FAK)进行荧光染色,评价细胞迁移、粘附能力的变化.通过透射电镜观察SPIO在细胞内的分布及细胞内细胞器的变化.采用原子吸收分光光度计检测细胞内SPIO的含量.通过Philips 3.0T 磁共振,对细胞琼脂凝胶细胞悬液进行磁共振扫描,了解磁共振扫描时信号的变化.结果:血管内皮细胞按浓度依赖式摄取SPIO.与对照组相比随SPIO孵育浓度的增加,SPIO对细胞的活性的毒性增加.与对照组相比细胞的肌动蛋白、微管蛋白纤维紊乱,FAK颗粒变粗,分布稀疏.SPIO主要位于胞质的溶酶体内,随孵育浓度的增加,溶酶体的数量增多,并出现大小不一空泡样结构.当SPIO浓度为0.15 mg/ml时,细胞内铁含量为(55.86±9.935)pg.磁共振扫描图像显示与SPIO共同孵育的细胞,信号出现明显的降低.结论:摄取SPIO的血管内皮细胞可以被MR检测到,但SPIO对血管内皮细胞的活性、骨架、粘附、迁移造成了一定影响,而这些影响与SPIO浓度有明显的依赖性.
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褪黑素通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞MLCK的表达
目的 探讨褪黑素(MLT)通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),分空白对照组、DMSO对照组、DMSO+oxLDL组、DM-SO+oxLDL+SB203580组、DMSO+oxLDL+MLT组、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580组.RT-PCR、Western blot、γ-32>P-ATP掺入法分别检测各组HUVEC MLCK转录、表达和活性及MLT对p38磷酸化的影响.结果 RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录;Western blot结果 表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性.结论 MLT可能通过p38/MAPK通路调控MLCK的转录、表达和活性.
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LPS对人脐静脉内皮细胞增殖和ESM-1表达的影响
目的探讨LPS对人脐静脉内皮细胞(ECV304)的生长和内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,ESM-1)表达的影响.方法在体外,用1 ml/L和5 ml/L的LPS在不同时间作用于ECV304,观察细胞形态的变化,用MTT法和免疫细胞化学方法对细胞增殖和ESM-1、ERK、p-ERK在细胞中的表达.结果 LPS作用于ECV304 24 h后,细胞形态发生变化,梭形明显,排列紊乱.短时间内(0.5、1 h)LPS对ECV304有增殖作用.LPS可快速促进ESM-1的表达,在0.5、1 h时表达量较高.LPS作用后,ERK的表达无明显变化,但在一段时间(0.5～4 h)内ERK的磷酸化明显增加.结论 LPS对ECV304中ESM-1的表达有促进作用.推测ESM-1可能作为一种细胞因子与LPS在炎症反应中发挥着作用.
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Exendin-4改善氧化应激减轻t-BHP诱导的HUVECs凋亡
目的 探讨Exendin-4对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 在原代培养的HUVECs中,采用t-BHP(100 μmol/L)干预4 h,加用或不加用Exendin-4(100 nmol/L)预处理细胞24 h,分为:对照组(A组)、t-BHP处理组(B组)、Exendin-4处理组(C组)及Exendin-4+t-BHP组(D组).应用MTT比色法检测细胞存活率,DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS的产生.结果 与A组比较,100 μmol/L t-BHP作用4 h,B组的HUVECs存活率下降40%(P<0.001);DAPI染色荧光显微镜观察证实,t-BHP可以诱导HUVECs凋亡;加用Exendin-4预处理细胞24 h,D组的HUVECs存活率较B组增高(P<0.01).DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率提示,与B组比较,Exendin-4预处理可使D组的细胞凋亡率减少44%(P<0.05),并减少ROS的产生(P<0.05).结论 t-BHP能够诱导HUVECs凋亡,Exendin-4可减少t-BHP诱导的HUVECs凋亡.
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ATP对LPS诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及其机制
[目的]观察不同浓度三磷酸腺苷(ATP)对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达相关炎症因子的影响,并探讨其可能机制.[方法]采用RT-PCR检测不同浓度ATP对LPS(1 mg/mL)诱导HUVECs表达炎症细胞因子如白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响,进一步采用RT-PCR检测靶浓度的ATP对HUVECs表达TLR受体及TLR4辅助分子CD14和MyD88的mRNA水平的影响.[结果]经1mg/mL的LPS干预处理后,IL-1β、MCP-1和ICAM-1在HUVECs中的mRNA表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P＜0.01);ATP在低浓度(1μmol/L、10μmol/L)时可显著下调LPS诱导的IL-1β、MCP-1和ICAM-1的mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P＜0.01).ATP在10 μmol/L浓度时显著下调TLR4、TLR3 mRNA表达水平,并可显著下调TLR4调节蛋白CD14和MyD88 mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P＜0.01).[结论]低浓度的ATP可能通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在HUVECs中的表达,有望为临床上动脉粥样硬化等炎症性疾病的治疗提供一条新的途径.
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血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的 观察血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 采用胰蛋白酶消化法原代培养HUVECs,取2～5代用于实验,培养的HUVECs随机分为:对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组,用吖啶橙(AO)/溴乙锭(BE)法观察细胞凋亡的形态学变化,用流式细胞术检测内皮细胞的凋亡率.结果 (1)AngⅡ(10-6 mol/L)可以诱导HUVECs凋亡率明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(25.60%±3.17% vs 2.32%±0.24%,P＜0.005);不同浓度的Ang-(1-7)(10-9～10-6 mol/L)呈剂量依赖性抑制AngⅡ所诱导的内皮细胞的凋亡,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(20.04%±2.21%,16.04%±1.32%,10.04%±2.05%,7.79%±1.50%,P＜0.05);力Ⅱ用Ang-(1-7)特异性受体拮抗剂A-779可阻断Ang-(1-7)的上述效应,与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较差异有统计学意义(23.37%±0.75%vs 20.04%±2.21%,16.04%±1.32%,10.04%±2.05%,7.79%±1.50%,P＜0.05).结论 AngⅡ可诱导内皮细胞凋亡增加,Ang-(1-7)呈浓度依赖性抑制AngⅡ的上述效应,并且是通过其特异性受体Mas发挥作用.
