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脑胶质细胞瘤VEGF、COX-2基因蛋白表达及临床意义
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶 -2(COX-2)基因蛋白表达在脑胶质瘤发生、生长和转移过程中,以及由低恶性度肿瘤向高恶性度肿瘤的转化中的作用. 方法:选用54例Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤手术后存档蜡块标本为实验标本,选用6例正常脑组织为对照.应用流式细胞术(FCM)分别定量检测Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤组织中VEGF、COX-2基因蛋白表达量.结果:Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤VEGF蛋白表达阳性率分别为23.1%、46.2%、100%和 100%.COX-2蛋白在星形细胞瘤中的表达量(FI值)增加,并随肿瘤恶性度的升高而增加. COX-2蛋白表达量FI值与病理组织学分级有明显相关性(P<0.01).COX - 2蛋白表达阳性率分别为78.6%、85.7%、100%和100%.COX-2蛋白表达量(FI值)与VEGF表达量(FI值)相关分析显示二者呈显著正相关(r=0.54178,P<0.001).[ HT5"H 结论:在星形细胞瘤形成以及肿瘤由低恶性度向高恶性度演化过程中, VEGF的过度表达具有重要作用;VEGF表达的水平是预测临床预后的重要标志.
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VEGF165正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节
目的构建VEGF165(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将VEGF165 cDNA从pGEM-hVEGF165克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒pCDNA3中,构建VEGF165正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和Sanger双脱氧终止DNA测序法证明VEGF165正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将VEGF165正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用RNA斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测VEGF mRNA和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及DNA测序表明VFGF165正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P＜0.05vs对照组,31.6%),转染反义表达载体后VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P＜0.05vs对照组).结论成功地构建了VEGF165正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.
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血管内皮生长因子-C与恶性肿瘤的淋巴管生成及淋巴结转移关系研究进展
血管内皮生长因子-C(vaScular endothelial growth factor-C,VEGF-C)是特异的血管、淋巴管内皮细胞调节因子,其结构与VEGF具有同源性,主要通过受体VEGFR-2及VEGFR-3发挥作用.近年来的研究发现,VEGF-C通过其受体VEGFR-3介导肿瘤的淋巴管生成,与淋巴管浸润及淋巴结转移有关.
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人血管内皮生长因子165基因转染对C17.2神经干细胞体外增殖分化的影响
目的:构建含有人血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒载体,并观察其对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响.方法:将血管内皮生长因子165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV血管内皮生长因子165,转染体外培养的C17.2神经干细胞.以单纯携带绿色荧光蛋白腺病毒转染为对照1组.通过酶联免疫吸附测定检测其在C17.2神经干细胞中不同时间段的表达.C17.2神经干细胞培养24 h后,将pAdCMV GFP和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞(pAdCMV绿色荧光蛋白和pAdCMV血管内皮生长因子165转染组),24,48,72 h后每孔加入四氮唑盐10μL,检测pAdCMV转染对C17.2神经干细胞增殖的影响.将未进行pAdCMV绿色荧光蛋白,pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞设为对照2组.收集C17.2神经干细胞(C17.2神经干细胞组)和已经转染pAdCMVVEGF165的C17.2神经干细胞(pAdCMV血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞组),对两组细胞进行培养,将上述细胞爬片进行多聚甲醛固定,行巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶免疫组化法检测.结果:①重组腺病毒AdCMV血管内皮生长因子165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/L.酶联免疫吸附检测转染pAd血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞上清VEGF浓度显示转染后第3天为(710±82)ng/L,明显高于转染前(118±20)ng/L,第5天和第7天血管内皮生长因子165达分泌高峰,分别为(1110±126),(1135±138)ng/L,此后渐下降,于第13天(355±35)ng/L仍显著高于对照1组(¨0±22)ng/L和转染前(t=5.87,P＜0.01).②C17.2神经干细胞培养24,48,72 h后对照2组干细胞增殖率分别为(0.1367 ±0.018 6)%,(0.330 0±0.013 4)%,(0.660 3±0.020 7)%,pAdCMV绿色荧光蛋白转染组C17.2神经干细胞24,48,72 h后干细胞的增殖率分别为(0.139 9±0.018 3)%,(0.373 0±0.013 6)%,(0.671 3±0.233)%;pAdCMV血管内皮生长因子165转染组C17.2神经干细胞24,48,72 h后干细胞的增殖率分别为(0.146 9±0.0171)%,(0.363 1 ±0.013 6)%,(0.635 3±0.024 7)%.两个实验组神经干细胞增殖率与对照组1组比较,P＞0.05.pAdCMV血管内皮生长因子165转染组C17.2神经干细胞增殖率与pAdCMV绿色荧光蛋白转染组比较,P＞0.05).③C17.2神经干细胞组和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞组的巢蛋白阳性细胞率分别为(15.72±1.003)%,(17.63±1.082)%,神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率分别为(17.63±1.082)%,(21.49±1.022)%,两组比较无明显差异(P＞0.05).结论:成功构建pAdCMV血管内皮生长因子165重组腺病毒,获得了稳定表达血管内皮生长因子165的神经干细胞克隆,体外pAdCMV血管内皮生长因子165未对C17.2神经干细胞增殖和分化产生影响.
关键词： 干细胞 内皮生长因子/遗传学 转染 神经元 -
胰腺癌p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达及新生血管密度计数的意义
目的:研究胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及新生血管计数的意义.方法:采用免疫组织化学法及形态半定量方法对33例胰腺癌和6例正常胰腺组织进行新生血管密度记数和p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达检测.结果:P16蛋白表达:高、中分化胰腺癌高于低分化(P＜0.05),生存期长者表达高于生存期短者(P＜0.05);Bcl-2表达:高、中分化者高于低分化者;Bax表达:正常胰腺组织高于胰腺瘤组织,高、中分化者高于低分化者,生存期≥12个月者高于＜12个月者;VEGF表达:有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者;MVD记数:正常胰腺组织低于胰腺瘤组织,有淋巴转移者高于无淋巴结转移者;MVD与VEGF表达呈正相关(r=0.79,P＜0.05);p16基因表达与VEGF表达和MVD呈负相关(r=-0.69,P＜0.05;r=-0.87,P＜0.05),Bcl-2表达与其他基因表达结果无相关关系.Bax表达与p16表达呈正相关(r=0.54,P＜0.05),与VEGF表达和MVD呈负相关(r=-0.66,P＜0.05).结论:综合检测胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及微血管密度对判断胰腺癌恶性程度及估计肿瘤的预后有较大帮助.
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复制缺陷型腺病毒载体介导的VEGF基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究
目的探讨局部应用以复制缺陷型腺病毒为载体的血管内皮生长因子(Ad-VEGF165cDNA)基因治疗对大鼠随意缺血皮瓣生存的影响.方法选用30只SD大鼠,体重350～400 g,随机分成三组,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端真皮下分别注射Ad-VEGF165cDNA(10只目的基因组)、Ad-GFP(10只绿色荧光蛋白基因对照组)、PBS(10只磷酸盐缓冲液空白对照组).48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积,并采集组织行免疫组化、组织学检查等.结果皮瓣成活率: Ad-VEGF165cDNA组为(74.382±1.338)%,Ad-GFP组为(52.246±1.663)%, PBS组为(52.871±2.890)%,Ad-VEGF165cDNA组与其他两组间差异有显著性(P<0.01),免疫组化显示基因转染组毛细血管周围VEGF沉积,其微血管密度明显高于对照组.结论局部皮下注射Ad-VEGF165cDNA,可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.
关键词： 内皮生长因子/遗传学 腺病毒科 基因表达 外科皮瓣 -
WT1、VEGF基因在急性白血病患者外周血中的表达及其意义
[目的]探讨急性白血病(AL)患者化疗前后外周血中WT1基因及血管内皮生长因子(VEGF)基因表达水平的变化及其意义.[方法]收集33例初诊的AL患者(观察组),另外收集同期10例体检正常者(对照组),两组采用反转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测外周血WT1及VEGF基因表达并比较.[结果]观察组化疗前后WT1及VEGF基因的表达量显著高于对照组,其差异统计学意义(P＜0.01);AL患者化疗后两种基因表达水平均下降,与化疗前相比差异均有统计学意义(P＜0.05);观察组长期完全缓解(CR≥6个月)患者较短期缓解(CR＜6个月)患者的WT1和VEGF基因表达量降低,其差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]AL患者外周血WT1及VEGF基因水平的表达与AL的发生、发展密切相关;定期检测外周血两种基因的表达,有助于预后评估.
