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胃癌中医证型与胃癌转移相关基因E-cadherin的关系研究
目的:从基因蛋白表达上探索胃癌患者中医证的本质.方法:将收集到的术前胃癌患者病例资料按中医辨证分型标准确定其证型归属;用免疫组化EnVision二步法检测术后胃癌肿瘤标本中E-cadherin基因蛋白表达情况.结果:E-cadherin在100例胃癌患者中的阳性表达率为90%,证型间表达差异存在显著性(P<0.01);进一步两两比较示,痰湿凝结型、气血双亏型与脾胃虚寒型之间无明显差异,表达较高;瘀毒内阻型与肝胃不和型无明显差异,表达较低.结论:瘀毒内阻型与肝胃不和型胃癌患者的E-cadherin表达偏低,此两种证型肿瘤转移形成的途径可能与E-cadherin,即与肿瘤细胞间同质性黏附力降低相关.
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胃癌组织中RASSF2A基因启动子甲基化检测及其临床意义
目的:探讨胃癌中RASSF2A基因启动子甲基化特征.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测34例胃癌患者癌组织和癌旁组织RASSF2A基因启动子甲基化情况.结果:胃癌组织RASSF2A基因甲基化发生率为24%,明显高于癌旁组织.差异有统计学意义(p＜0.05).RASSF2A基因甲基化与分化程度,转移等无明显相关.结论:RASSF2A基因甲基化是胃癌发生的频发分子事件,可能在胃癌发生起重要作用.
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谷胱甘肽转硫酶M1基因多态性与胃癌遗传易感性的关系探讨
目的:研究GSTM1基因多态性与胃癌遗传易感性的关系.方法:采用病例-对照研究的方法,以PCR-多聚酶链反应技术,测定GSTM1基因多态性,比较GSTM1基因型在病例组及对照组中的分布情况.结果:胃癌组GSTM1基因缺失率为61.9%(26/42),显著高于对照组42.8%(18/42),差异有显著性(x2=4.12,P=0.041,OR=1.81,95% CI=0.98～3.13).结论:GSTM1基因缺失可能会增加胃癌发生的危险,但本研究因样本量小,尚有待于进一步加以验证.
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抑癌基因PTEN的表达与胃癌生物学行为及预后的关系
目的:评价胃癌组织中抑癌基因PTEN的表达与胃癌生物学行为及预后的关系.方法:对1997～1998年60例胃癌患者的手术标本,以PTEN单抗行免疫组织化学染色(SABC法).结合临床资料进行分析.结果:胃癌组织中PTEN的阳性表达率为46.7%,PTEN的阳性表达与性别、年龄无关;与肿瘤大小、Borrmann分型、淋巴结转移、肿瘤分期呈负相关;与患者的术后生存时间呈正相关.结论:PTEN 的表达与胃癌的生物学行为及患者的预后有密切关系.
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抑癌基因P16P21和PRB与胃癌发生
0 引言胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一,其发生发展涉及多种癌基因激活和抑癌基因失活的过程. 抑癌基因p16,p21和pRB在许多原发性肿瘤组织中都有缺失或产生高频率的突变. 为探讨抑制基因p16,p21和pRB在胃癌组织中表达水平及与胃癌发生的关系,本文采用免疫组织化学及原位分子杂交方法对80例胃癌组织石蜡切片进行了检测.
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胃癌组织p16及p18基因变异
p16基因又名多肿瘤抑制基因(MTS1),1994年首先由Kamb et al[1]克隆成功.此基因包含3个外显子及2个内含子,位于人9号染色体短臂2区1带(9p21),编码P16蛋白,在人类多种肿瘤中存在纯合性缺失及突变等变异[2-6],但胃癌中的改变情况国内外报道较少.p18基因是一个新近发现的与p15,p16基因同属一个基因家庭的抑癌基因,在结构和功能上与p15,p16基因具有高度同源性,但在多种人类癌肿中其变异少见[7-9,它在胃癌中的改变情况目前国内外尚未见报道.本研究通过PCR及银染PCR-SSCP技术检测胃癌组织p16基因外显子E1α,E1β,E2及p18基因外显子E1的纯合性缺失及突变情况.
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胃癌中Autotaxin基因、CD44v6分子、DNA含量的相关性研究
Autotaxin (ATX)是一种肿瘤细胞自分泌运动因子,与肿瘤浸润转移关系密切[1].CD44v6是粘附分子家族成员之一,也与肿瘤浸润转移复发有关[2-7].细胞核DNA含量是反映细胞增殖状态的一个良好指标,而细胞无限增殖与肿瘤的发生、发展及预后密切相关[8-10].胃癌在我国常见[11-19],我们拟检测胃癌组织中ATX,CD44v6的表达特征及细胞核DNA含量分析,对三者之间进行相关性分析,探讨以ATX,CD44v6,DNA含量分析联合来判断胃癌浸润、转移能力的可能性和方法.
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VEGF165正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节
目的构建VEGF165(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将VEGF165 cDNA从pGEM-hVEGF165克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒pCDNA3中,构建VEGF165正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和Sanger双脱氧终止DNA测序法证明VEGF165正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将VEGF165正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用RNA斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测VEGF mRNA和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及DNA测序表明VFGF165正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P＜0.05vs对照组,31.6%),转染反义表达载体后VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P＜0.05vs对照组).结论成功地构建了VEGF165正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.
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mRNA差异显示法筛选和克隆胃癌相关基因
目的:筛选和克隆胃印戒细胞癌与正常胃黏膜细胞差异表达基因片段.方法采用mRNA差异显示法(mRNA differentia display PCR,DD-PCR),对比胃印戒细胞癌组织与正常胃黏膜组织mRNA的表达差异克隆胃印戒细胞癌差异片段,经过RNA的斑点杂交、测序以及序列分析和同源性比较.结果:胃印戒细胞癌与正常胃黏膜中存在明显的基因表达差异,发现与胃癌相关的差异表达条带1 6条,其中7条为缺失表达条带,9条为过度表达条带.对其中4条差异表达条带进行克隆、测序,经序列分析及同源性比较和RNA 的斑点杂交,表明确认其中1条为GenBank/BLAST中尚未收录的片段.结论:胃印戒细胞癌的mRNA差异显示证明,该ES 序列可能在胃癌的发生发展中具有一定作用.
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胃癌患者白细胞介素-1B 基因多态性及序列测定的初步研究
目的:检查国人胃癌中IL-1B基因启动子区域-31 C/T多态性,初步分析其基因型与胃癌的相关性.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对收集的50例胃癌癌旁正常组织和50例正常健康人外周血标本,提取DNA进行PCR扩增,然后用Alu I限制性内切酶对PCR产物进行消化,经琼脂糖凝胶电泳对IL-1B基因多态性进行分析,并对C/C和T/T进行序列测定.结果:IL-1B基因-31C等位基因频率在正常人和胃癌患者中分别为75%和53%,-31T等位基因频率则分别为25%和47%.正常人和胃癌患者中3种基因型频率分别为-31C/-31C:56%(28/50)和30%(15/50);-31C/-31T:38%(19/50)和46%(23/50);-31T/-31T:6%(3/50)和24%(12/50).携带-31T等位基因增加罹患胃癌的危险性,-31C/-31T杂合子和-31T/-31T纯合子分别增加2.3和7.5倍.并经DNA序列测定证实在IL-1B基因启动子区域有一TATA框多态,即-31碱基发生C→T转换.结论:IL-1B基因启动子区域-31C/T多态性与国人胃癌易患性相关.
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胃癌微卫星不稳定性与淋巴结转移的关系
目的:探讨胃癌微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)与淋巴结转移的关系.方法:采用聚合酶链反应法(PCR),分别选用定位于第 3 及第 17 号染色体上的微卫星标记位点,对50例原发性胃癌及自身正常组织标本进行检测.结果:50 例胃癌中 MSI 发生率为 44%(22/50),微卫星DNA改变与癌的浸润深度无关,P=0.656 5;但有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者,P=0.004 9.结论:微卫星 DNA 的改变不同程度地反映胃癌的细胞生物学恶性行为,对胃癌临床分期及预后可能有参考意义.
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胃腺癌差异表达基因的cDNA微阵列研究
目的:应用cDNA基因芯片研究筛选人胃腺癌相关差异表达基因,探讨胃癌发生、发展的分子机制.方法:运用含18000个基因克隆的cDNA膜基因芯片,对6对胃腺癌及正常胃组织标本分别进行杂交检测并对比分析.结果:6对人胃腺癌与相对应的胃正常组织相比较,筛选出在3～6对标本中有2倍以上改变的基因克隆共有103条(1条在所有标本中均差异明显),其中胃癌组织表达上调基因56条,胃癌组织表达下调基因47条.结论:人胃腺癌癌变是一个多基因参与的过程,基因芯片技术是一种快速有效的筛选人胃腺癌差异表达基因的方法.
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肿瘤抑制基因 p16 在贲门癌变过程中的表达
目的:探讨肿瘤抑制基因 p16 的表达在贲门癌发生发展中的作用.方法:对来自贲门癌高发区的 135 例贲门各级病变组织采用免疫组织化学方法进行测定.结果:贲门上皮各级病变组织均出现不同程度的 p16 蛋白免疫阳性反应.且随着贲门上皮病变的加重,p16 蛋白免疫阳性率呈下降趋势,异形增生上皮和腺癌与贲门炎症上皮比较差异有显著意义.高、中分化腺癌的表达率(50.0%)显著高于低分化腺癌(22.2%),P<0.05.结论:p16 基因的失活与贲门癌发生有关,并与贲门癌的组织分化程度有关.
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端粒酶和p53及PCNA蛋白过度表达与胃癌临床病理特征的关系
目的:观察端粒酶活性、p53蛋白和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在胃癌组织中的表达及其与胃癌分化、浸润和转移的关系.方法:端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)法检测58例胃癌和35例癌旁正常组织中端粒酶活性;采用免疫组化SABC法检测40例胃癌和35例癌旁正常组织中p53和PCNA的表达,并对端粒酶活性与临床病理特征以及p53和PCNA的表达的关系进行分析.结果:胃癌组织端粒酶活性、p53和PCNA阳性率分别为89%(49/55)、77.5%(31/40)和80%(32/40);癌旁正常组织端粒酶活性、p53和PCNA阳性率分别为11.4%(4/35)、8.5%(3/35)和14.2%(5/35),胃癌组织与正常组织相比差异有统计学意义,P=0.025 6;胃癌不同分期及分化程度之间端粒酶活性的差异无统计学意义,P值分别为0.174 1和0.085 2,而且端粒酶活性与p53、PCNA表达之间无相关性,P=0.085 9.结论:端粒酶活化、p53和PCNA表达均参与胃癌的发生和发展;端粒酶、p53和PCNA在胃癌分化、浸润中各自起着独立的作用;端粒酶、p53和PCNA同时高表达的患者具有较高的淋巴结转移率.
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胃管状腺癌组织中Fos和Jun蛋白表达及临床意义
目的:检测Fos和Jun在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌的发生、发展及生物学行为的关系.方法:应用免疫组织化学SABC法检测54例胃癌及癌旁组织中Fos和Jun基因蛋白的表达.数据采用SPSS统计软件包及χ2检验分析.结果:c-Fos和c-Jun在胃癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为68.5%、27.8%和63.0%、24.1%;c-Fos和c-Jun的表达在胃癌不同组织学分级间差异有统计学意义(χ2分别为8.101和6.742;P分别为0.018和0.032),在淋巴结转移和TNM分期间差异无统计学意义(χ2分别为1.534、1.342和0.055、0.499;P分别为0.219、0.266和0.832、0.492);胃癌及癌旁组织中c-Fos与c-Jun之间的表达呈正相关.结论:c-Fos和c-Jun基因蛋白表达变化发生在肿瘤细胞形态变化之前,可作为胃癌早期诊断的分子病理学指标.
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原发性胃癌p16INK4a基因缺失和突变的研究
目的:探讨p16INK4a基因缺失和突变在胃癌发病机制中所起的作用.方法:采用多重PCR、PCR-SSCP和DNA测序对62例胃癌、癌旁组织及10例正常胃黏膜标本中p16INK4a基因纯合性缺失和突变进行检测.结果:62例胃癌中发现p16INK4a基因第一外显子和第三外显子各有2例纯合性缺失,缺失率6.5%(4/62),PCR-SSCP和DNA测序发现1例p16INK4a基因第一内含子区碱基插入,突变率1.6%(1/62),癌旁和正常胃黏膜均未发现缺失和突变.结论:在原发性胃癌中,p16INK4a基因纯合性缺失率很低、突变罕见.
关键词： 胃肿瘤/遗传学 p16INK4A基因 纯合性缺失 突变 -
胃癌组织RASAL1基因启动子甲基化及临床意义研究
目的:研究胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化状态并分析其与临床病理资料的关系,初步探讨RAS-AL1基因启动子甲基化在胃癌发生发展中的意义.方法:取40例胃癌患者手术标本,使用甲基化特异性PCR(MSP)技术分别检测胃癌组织及相应癌旁组织中RASAL1基因启动子的甲基化状态,并分析其与胃癌临床病理特征的关系.结果:胃癌组织和癌旁组织中RASAL1基因启动子甲基化率分别为70％(28/40)和30％(12/40),胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化发生率明显高于癌旁组织,P＜0.01.胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化率与性别(P=0.622)、年龄(P=0.168)无明显相关;但与分化程度(P=0.006)、肿瘤大小(P=0.043)、侵袭深度(P=0.015)和淋巴结转移相关(P=0.010);在肿瘤体积大、分化程度差、侵袭深度较深和有淋巴结转移的胃癌组织中,RASAL1基因启动子甲基化率明显增高.结论:胃癌组织中RASAL1基因启动子区域甲基化发生率高,且与分化程度及进展阶段相关,提示RASAL1基因启动子的异常甲基化可能参与了胃癌的发生发展过程.
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胃癌微卫星不稳定性的临床研究
目的:检测微卫星不稳定性在胃癌中的发生情况,探讨其与临床病理参数的关系.方法:选取D2S123和D3S1298两个微卫星位点,采用PCR-银染法,对36例胃癌标本进行检测;胃癌微卫星不稳定性与临床病理参数的关系采用χ2检验或费歇尔精确检验.结果:两个位点共检出MSI阳性11例,发生率为30.6%(11/36);与胃癌微卫星不稳定性有关的临床病理因素为肿瘤的组织学类型(P=0.048)及有无淋巴结转移(P=0.034).结论:微卫星不稳定性在胃癌的发生及发展中可能起重要作用,是正常细胞癌变的可能途径之一;中-高分化腺癌或有淋巴结转移的胃癌患者微卫星不稳定的发生率高.
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胃癌组织中Survivin外显子1甲基化状态的分析
目的:研究胃癌组织Survivin外显子1去甲基化与Survivin mRNA表达以及临床病理参数之间的关系.方法:25例胃癌及与其配对的正常胃组织DNA经甲基化敏感性限制性内切酶HpaⅡ和MspⅠ处理后用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR对Survivin外显子1进行检测,Survivin mRNA的表达水平采用实时荧光定量PCR的方法进行检测.结果:Survivin外显子1去甲基化率在胃癌组织和癌旁组织分别为96.0%(24/25)和20.0%(5/25),χ2=29.639,P＜0.001.在25例胃癌组织中有22例(88.0%)发生Survivin mRNA过表达,并且表达与去甲基化呈正相关,rs=0.552 8,P=0.004 16.没有发现去甲基化与年龄、性别、肿瘤大小、病理分级、临床分期和转移与否等病理参数之间存在统计学上的相关性,P＞0.05.结论:Survivin外显子1去甲基化增强Survivin mRNA的表达,可能是胃癌发生和发展过程中的早期事件.
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应用低密度芯片初步筛选胃癌淋巴转移相关基因的研究
目的:运用低密度cDNA芯片技术初步筛选影响胃癌淋巴结转移的分子标志.方法:运用自制低密度cDNA芯片检测15例胃癌患者原发癌灶和淋巴结转移癌中多个基因mRNA表达,并用RT-PCR方法进行验证,分析其与胃癌侵袭和淋巴结转移的相关性.结果:hTERT在淋巴结转移癌中表达明显高于胃原发癌灶(P=0.001).原发癌灶中MMP 7和Heparanase表达在小结节孤立型淋巴结病例中明显高于大结节融合型者(P值分别为0.022和0.002),而CDH1表达明显降低(P=0.002);淋巴结转移癌灶中CDH1表达在小结节孤立型淋巴结病例中亦明显降低(P=0.046).按淋巴结转移个数分成轻重两组(≤6个为轻度转移,≥7个为重度转移),原发癌灶中MMP-7和hTERT表达在重组明显高于轻组(P值分别为0.001和0.005);淋巴结转移癌灶中MMP-7、S100A4和hTERT基因表达在重组明显增高(P值分别为0.000 05、0.007和0.016),而nm23H1和CDH1表达明显降低(P值分别为0.013和0.001).胃原发癌中MMP-7、Heparanase、S100A4过表达和(或)nm23H1、CDH1、KAI-1表达降低或缺失者,胃癌多侵透浆膜,且浆膜受侵面积较大.结论:hTERT、MMP-7、S100A4、Heparanase、CDH1和nm23H1基因表达与胃癌淋巴结转移关系密切,可望成为胃癌淋巴结转移诊断和治疗的分子靶点.
