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骨形态蛋白-7在早期糖尿病肾病大鼠中的表达
目的 探讨骨形态蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因在糖尿病肾病大鼠中的表达,进一步阐明BMP-7基因与糖尿病肾病的关系.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组,糖尿病肾病4周组、糖尿病肾病8周组,糖尿病肾病12周组.应用链脲佐菌素建立l型糖尿病肾病动物模型.正常对照组注射相当剂量的柠檬酸缓冲液作为对照.各组大鼠分别于实验4周、8周和16周末称体质量,金属代谢笼收集尿液并记录24h尿量,测定24h尿蛋白量.随后处死大鼠,心脏穿刺取血,分离血清.应用日立7600型全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、血糖水平;应用酶联免疫吸附法测定血、尿BMP-7的水平;采用实时荧光定量PCR和免疫组化检测BMP-7 mRNA和蛋白在肾脏中的表达. 结果 糖尿病肾病4周组、8周组,12周组和正常对照4组间在体质量(F=18.040,P＜0.001)、肾重/体质量指数(F=70.20,P＜0.01)和24h尿量(F=249.6,P＜0.001)的差异均具有统计学意义.4组间在血糖(F=41.240,P＜0.001)、24h尿蛋白(F=18.980,P＜0.01)、血肌酐(F=12.690,P＜0.01)和血尿素氮(F=14.570,P＜0.001)的差异具有统计学意义.4组间在血BMP-7(F=1234.380,P＜0.001)、尿BMP-7 (F=34.510,P＜0.001)、肾脏BMP-7表达面积(F=70.24,P＜0.01)上的差异均具有统计学意义.与正常对照组相比,糖尿病肾病12周组的血BMP-7(q值=75.185,P＜0.01)、尿BMP-7(q值=13.389,P＜0.01)浓度显著下降,在肾脏中其BMP-7 mRNA(q=8.402,P＜0.01)和蛋白质的表达量(q=17.902,P＜0.01)也显著下降. 结论 BMP-7基因在实验性1型糖尿病肾病大鼠模型早期表达下调.BMP-7可能参与了糖尿病肾病的发生发展,并可能成为早期诊断糖尿病肾病肾功能损伤的分子标记.
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肾疏宁抑制腹膜透析腹膜纤维化大鼠基质及新生血管的实验研究
目的:观察中药肾疏宁对腹膜纤维化大鼠腹膜功能、腹膜组织基质积聚、新生血管、结缔组织生长因子(CTGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)及骨形态蛋白-7(BMP-7)表达的影响.方法:腹膜透析液+阿霉素注射法诱发SD大鼠腹膜透析腹膜纤维化模型,依体重随机分为4组,1.5%腹膜透析液模型组、4.25%腹膜透析液模型组、1.5%腹膜透析液+肾疏宁干预组及4.25%腹膜透析液+肾疏宁干预组,每组各15只,另设空白对照组(对照组,15只).1.5%腹膜透析液+肾疏宁干预组及4.25%腹膜透析液+肾疏宁干预组予肾疏宁(按43.93 g·kg-1·d-1)灌胃,对照组和模型组予等量生理盐水灌胃.检测腹透液葡萄糖浓度,计算超滤量(UF)及葡萄糖转运量(MGT).观察腹膜病理形态学改变,分析腹膜厚度、腹膜血管计数、腹膜纤维连接蛋白(FN)及CTGF、VEGF、HGF、BMP-7表达.结果:治疗第6周末,1.5%腹膜透析液+肾疏宁干预组及4.25%腹膜透析液+肾疏宁干预组腹膜透析腹膜纤维化大鼠超滤量(-3.26±14.17) ml及(-2.04±10.74) ml、葡萄糖转运量(18.12±0.81) mmol/kg及(16.14±1.20) mmol/kg、腹膜厚度(74.68±15.33) μm及(211.75±58.23) μm、腹膜血管计数(8.21±2.66)个/mm2及(13.70±4.71)个/mm2、FN(152.47±36.94)%及(231.49±53.49)%、CTGF(708.67±127.22)%及(791.20±126.37) %、VEGF(0.42±0.08)%及(0.50±0.09)%、HGF(245.71±24.38)%及(222.05±23.43)%、BMP-7(351.27±31.99)%及(284.43±26.82)%,与同浓度透析液组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:肾疏宁可能通过调控CTGF、VEGF、HGF、BMP-7表达,阻抑基质过度积聚及新生血管生成,进而延缓腹膜透析大鼠腹膜纤维化进展.
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腺病毒介导人骨形态蛋白-7基因抑制去势大鼠骨质疏松的实验研究
[目的]探讨腺病毒介导骨形态蛋白-7基因转染对去势大鼠骨质疏松的抑制作用.[方法]用外科去势的方法造成大鼠骨质疏松动物模型,用腺病毒介导的骨形态蛋白-7基因通过椎体髓腔注射的方法转移至大鼠椎体内,骨干重测量来检测全身骨丢失的情况;骨组织形态学观察椎体骨小梁骨质疏松的情况;骨形态定量方法评价椎体骨小梁的动静态指标的变化情况.[结果]术后1个月的骨干重的测量显示注入AdBMP-7组的动物骨量明显大于其余各组;骨形态学检测结果显示注入AdBMP-7的椎体骨小梁结构较完整,而其余各组的骨小梁变细、断裂.5周后用骨形态定量进行检测显示AdBMP-7基因注入的椎体的各项动静态指标都明显优于其余各组椎体.[结论]腺病毒介导BMP-7基因植入去势大鼠椎体髓腔可以分泌BMP-7,并可以在早期阻止去势大鼠的骨质疏松.
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腺病毒介导人骨形态蛋白-7基因感染大鼠髓腔细胞的实验研究
目的:观察已构建好的腺病毒介导的骨形态蛋白-7基因感染大鼠髓腔内细胞的情况,为腺病毒介导BMP-7的进一步基因治疗提供可靠的实验基础.材料和方法:从人骨肉瘤细胞株U-20S中获得hBMP-7的cDNA片段,插入穿梭质粒后在大肠杆菌内与腺病毒实现同源重组,阳性克隆转染293细胞,扩增纯化得到大量病毒后注入大鼠椎体髓腔中,用冲洗髓腔的方法和流式细胞仪分析来观察注射椎体和上位椎体髓腔内细胞感染腺病毒BMP-7的情况,并观察病毒感染的时限.结果:经体外检测能高效表达活性BMF-7的构建好的AdBMP-7注入椎体髓腔后,髓腔冲洗液的荧光显微镜观察,术后12d和24d都有感染了带有荧光蛋白标记的髓腔内细胞,而且在注射椎体的上位椎体中也出现了感染病毒的细胞.结论:腺病毒介导的BMP-7基因能够在体内感染髓腔细胞并分泌活性的BMP-7,可以成为基因治疗的有效手段.
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葡萄子原花青素对糖尿病肾病大鼠非酶糖基化终产物和骨形态蛋白7表达的影响
目的 研究葡萄子原花青素(GSPE)对糖尿病大鼠非酶糖基化终产物(AGEs)、肾组织结缔组织生长因子(CT-GF)及骨形态蛋白7(BMP-7)表达的影响.方珐将45只链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为糖尿病组(DM组,n=15只)、GSPE小剂量[250mg/(ks·d)]治疗组(T1组,n=15只)和大剂量[500 mg/(kg·d)]治疗组(T2组,n=15只),另以15只正常大鼠作为对照组(C组),15只正常大鼠给予GSPE 250 mg/(ks·d)作为正常治疗组(CT组).于24周末检测各组大鼠血糖、血清AGEs、血压、24 h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)、肾重/体重水平.以光镜PAS染色及电镜观察肾脏病理改变.用RT-PCR、Western blot方法及免疫组化方法检测肾组织中CTGF、BMP-7mRNA及蛋白表达水平的改变.结果 与C组相比,DM组血清AGEs、血压、24 h尿蛋白定量、内生肌酐清除率(Ccr)、肾重,体重均显著升高(P<0.01),肾病理改变加重,肾组织CTGF mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),而BMP-7mRNA及蛋白降低(P<0.05).与DM组相比,T1组和T2组血清AGEs、血压、24h尿蛋白定量、Cer和肾重/体重显著降低(P<0.05或P<0.01),病理改变减轻,BMP-7mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),而CTGFmRNA及蛋白显著降低(P<0.01).T1组与T2组之间相比,Ccr、肾重/体重水平、CTGF mRNA及蛋白差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 GSPE可以减轻糖尿病大鼠蛋白尿、改善肾脏病理,对其肾脏有明显保护作用,其机制与降低血清AGEs、抑制肾组织CTGF过高表达、上调BMP-7表达有关.
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雷米普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织BMP-7表达的影响
目的 观察雷米普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction UUO)大鼠肾脏间质损伤及骨形态蛋白-7(bone morphogenetic protein-7 BMP-7)表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(SHAM组),1周模型组(UUO-1组),2周模型组(UUO2组),1周干预组(AcEI-1组),2周干预组(ACEI-2组).各组大鼠于术后相应时间(除UUO-1组为术后1周,其余各组均为术后2周)取梗阻侧肾组织行Masson染色,按小管间质损害的特征进行半定量评分,用RT-PCR方法检测肾组织BMP-7mRNA水平.结果 ①SHAM组肾间质损伤指数较低,BMP-7高表达于肾组织.UUO1组与SHAM组比较,肾间质损伤指数增加,BMP-7表达下降,UUO-2组与UUO-1组比较,肾间质损伤指数增加,BMP-7表达下降;②ACEI-2组较UUO-2组肾间质损伤指数下降,BMP-7表达增加;③UUO-1组已有少量间质纤维化,在此基础上ACEI-1组比UUO-2组肾间质损伤指数下降,BMP-7表达增加.结论 ①在肾间质纤维化模型中,随着肾间质纤维化的进展,肾间质损伤指数逐渐增加,BMP-7表达逐渐下降;②雷米普利可部分维持肾间质纤维化过程中BMP-7的表达,从而延缓肾间质纤维化进展,对已发生纤维化的肾组织仍然有此作用.
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骨形态蛋白-7对糖尿病大鼠nephrin表达和分布的影响
目的 观察骨形态蛋白-7(BMP-7)对糖尿病(DM)大鼠nephrin表达和分布的影响.方法 20只链脲左菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为糖尿病组(DM)和BMP-7治疗组(BMP-7)各10只,另以10只大鼠作对照组(NC).BMP-7组每周2次腹腔注射人重组BMP-7 30 μg/kg.DM组和NC组给予等量的生理盐水注射.于8、16、24周检测不同时间点24h尿蛋白、尿肌酐和血糖.24周处死动物.PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT.PCR、免疫荧光检测nephrin的表达和分布,免疫组化技术检测TGF-β1和WT1的表达.结果 与NC组比,DM组24 h尿蛋白、肾质量/体质量指数、TGF-β1的表达均显著高于NC组(F值分别为174.3、38.9、117.7,P均小于<0.01)差异均具有统计学意义.而内生肌酐清除率(Cer)、足细胞数目、nephrin的表达显著低于NC组(F值分别为13.4、79.04、65.5,P均<0.01),而且nephrin由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团块状改变.BMP-7组24 h尿蛋白、肾质量/体质量、TGF-β1的表达较DM组显著降低,Cer、足细胞数目和nephrin mRNA的表达显著增加,且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布,肾脏病理改变减轻.结论 外源性的运用BMP-7可以有效地抑制糖尿病引起的nephrin表达的下凋,维持nephrin在足细胞上的正常分布;BMP-7对糖尿病大鼠肾脏保护作用町能与拮抗了TGF-β1的活化有关.
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1,25(OH)2D3对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病大鼠足细胞损伤的保护作用
目的 观察1,25(OH)2 D3 对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用并探讨可能的作用机制.方法 72只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、PNA组(PAN)和1,25(OH)2D3治疗组(T).一次性尾静脉注射PAN 100 mg/kg体重建立PAN肾病动物模型.于3、7、14、21d分批处死动物,分别检测不同时间点24 h尿蛋白和肾功能,PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT-PCR、免疫组化、western-blot分别检测nephrin,BMP-7,p-Smau1/5/8的表达.结果 (1)PAN大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、血肌酐均高于同期的NC组,且足细胞足突增宽融合;T组各时间段24 h尿蛋白和肾功能较PAN组显著降低(P＜0.05),肾脏病理改变减轻.(2)与NC组比PAN大鼠nephrin表达减少并由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团快状改变.T组大鼠nephrin的表达显著增强且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布.(3)PAN组BMP-7 mRNA和蛋白的表达以及p-Smaa1/5/8的表达均低于NC组;T组BMP-7 mRNA和蛋白的表达以及p-smad1/5/8的表达显著升高.结论 1,25(OH)2 D3能有效的抑制嘌呤霉素氨基核苷酸诱导的足细胞损伤,减少蛋白尿;1,25(OH)2D3对足细胞损伤的保护作用可能与调控BMP-7信号的活化有关.
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慢性肾脏病患者血清BMP-7与钙磷代谢的关系
目的 探讨慢性肾脏病(CKD)患者血清骨形态蛋白-7(BMP-7)与钙磷代谢之间的关系.方法 回顾性分析90例不同分期阶段的CKD患者和20例健康正常人的血清BMP-7、血钙、血磷、钙磷乘积及全段甲状旁腺激素(iPTH)的水平及临床资料.结果 BMP-7在CKD3、4、5期患者明显低于正常对照组及CKD1、2期患者,iPTH在CKD3、4、5期患者明显高于正常对照组及CKD1、2期患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).CKD4期和5期患者血钙、血磷紊乱明显增加,钙磷乘积明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05),CKD1和CKD2期相比较差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析显示,BMP-7与钙呈显著正相关性(P＜0.01);BMP-7与磷、钙磷乘积、iPTH呈显著负相关性(P＜0.01).结论 CKD3期以后血清BMP-7表达减少,且BMP-7与磷、钙磷乘积、iPTH存在显著负相关性,检测CKD患者血清BMP-7水平可能有助于CKD矿物质和骨异常(MBD)的早期诊断及治疗效果的观察.
