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淋巴系统恶性肿瘤患者血清游离DNA含量与重排基因检测及其临床意义
目的 探讨血清游离DNA含量及其克隆性重排基因检测在淋巴系统恶性肿瘤诊断中的价值.方法 常规方法提取与定量分析72例淋巴系统恶性肿瘤患者血清DNA;用聚合酶链反应分别对不同患者血清单个核细胞(PBMC)DNA的特异性免疫球蛋白重链CDRⅢ区、T淋巴细胞受体γV9区序列进行扩增、检测和对照分析.结果 急性淋巴细胞白血病(ALL,含B-ALL组和T-ALL组)、B-淋巴瘤组、T-淋巴瘤组患者血清游离DNA含量[分别为(418±172)μg/ml、(426±192)μg/ml、(388±170)μg/ml、(400±110)μg/ml]均高于正常对照组[(77±47)μg/ml,P＜0.05].其中46例ALL患者血清及PBMC重排基因阳性率分别为76.1%和82.6%;26例淋巴瘤患者血清及PBMC重排基因阳性率分别为73.1%和65.4%;且两种方法检测结果有较好的一致性(P＞0.05).结论 淋巴系统恶性肿瘤患者血清游离DNA含量明显增高,且易检测出特征性重排基因,血清游离DNA和重排基因对淋巴系统肿瘤诊断有重要价值.
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血清DNA定量在上皮性卵巢癌诊断中的应用研究
目的:通过定量检测上皮性卵巢癌患者血清DNA水平,探索可用于上皮性卵巢癌诊断的新方法.方法:用微量基因组DNA抽提试剂盒提取31例上皮性卵巢癌、10例交界性上皮性卵巢肿瘤及13例卵巢良性病变患者血清DNA,用SYBRGreen Ⅰ荧光染色法测定其含量.结果:上皮性卵巢癌患者血清DNA含量(57.48±76.21 ng/ml)高于交界性上皮性卵巢肿瘤(24.90±20.66 ng/ml)和卵巢良性病变患者(20.13±10.98 ng/ml),差异有统计学意义(t=-2.378,P<0.05).而交界性上皮性卵巢肿瘤和卵巢良性病变患者血清DNA水平则无明显差异(t=-0.544,P>0.05).结论:上皮性卵巢癌患者血清DNA定量检测有可能成为辅助上皮性卵巢癌诊断的新方法.
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Real-time PCR法用于日本血吸虫感染宿主血清DNA的定量检测及其感染度的评价
目的 以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度.方法 以real-time PCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA.结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测到44.7拷贝的重组质粒DNA.在感染家兔后的3 d到7周血清中均能检测到血吸虫DNA,不同感染度早期检测的时间节点及其检测阈值分别为,家兔感染30条尾蚴(EPG=14)需在感染后2周才能检测到目的 DNA,其含量为119.03拷贝,感染50条尾蚴(EPG=24)、感染100条尾蚴(EPG=48)则在感染后1周可检测到目的 DNA,其含量分别为54.36拷贝和72.24拷贝,在家兔感染200条尾蚴(EPG=97)、感染500条尾蚴(EPG=232)早在感染后3 d即可检测到目的 DNA,其含量分别为60.34拷贝和142.47拷贝.日本血吸虫感染宿主血清DNA水平与感染度呈正相关,即血清DNA浓度随感染度的增大而上升.结论 本研究所建立的real-time PCR法可定量检测血清DNA动态变化并对日本血吸虫病诊断及感染度的评价具有潜在的应用价值,为日本血吸虫病诊断与疗效考核提供了新方法.
关键词： 日本血吸虫 TaqMan 实时定量 PCR 血清DNA 感染度 检测阈值 -
血清DNA检测与肿瘤诊断
肿瘤患者循环血中存在着游离DNA,其含量明显高于正常人,而且具有肿瘤DNA的特征性改变如癌基因激活、抑癌基因失活等,检测血清DNA为诊断肿瘤提供了良好的靶点,具有重要的临床意义.
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启东肝癌高发区肝癌患者血清中p53突变研究
目的研究启东地区肝癌患者血清中p53基因突变,并确定其对肝癌诊断的意义.方法收集25例肝癌,20例肝硬化,30例健康对照者的血标本,提取DNA,应用限制性酶切及直接序列分析方法测定p53基因第七外显子突变.结果显示p53基因第七外显子的249密码子产生突变,ARG变为SER,肝癌,肝硬化,健康者中发生率分别为44%(11/25),20%(4/20),7%(2/30) (P＜0.01).结论启东地区肝癌患者血清中p53突变与肝癌发生密切相关,其可作为新的肝癌早期诊断标志.
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肿瘤患者血清DNA甲基化的研究进展
血清DNA是循环核酸的一种,DNA甲基化与肿瘤的发生发展有密切关系;甲基化特异性PCR(MSP)是血清DNA甲基化检测的灵敏方法,血清DNA甲基化在肿瘤的早期诊断、分期、治疗及预后监测等方面有重要意义,是目前肿瘤分子生物学研究热点之一,具有极大的应用价值.
