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荧光偏振技术同步检测肺炎支原体肺炎衣原体方法的研究
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae,CP)是呼吸道感染的常见病因,及早准确地检测,对预防控制相关疾病非常重要[1].本研究采用荧光偏振检测与模板指导的末端延伸反应检测技术相结合(TDI -FP)的方法,建立了在同一反应体系中同步检测肺炎支原体、肺炎衣原体感染的方法.
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荧光技术在高通量药物筛选中的应用
目的 高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一.荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述.方法 查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应用情况进行归纳总结,包括荧光强度分析法、荧光偏振检测法.荧光共振能量转移检测法、均相时间分辨荧光检测法、荧光关联光谱、荧光成像分析、荧光报告系统.结果 与结论现在已经建成多种高通量药物筛选模型,利用荧光检测技术进行高通量药物筛选具有广阔的应用前景.
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宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究
目的:建立一种基于荧光偏振技术的宫颈癌组织标本中EGFR启动子甲基化检测的新方法.方法:设计通用引物,在封闭管中同时扩增EGFR启动子甲基化与非甲基化等位基因片段,再同时用序列特异的FAM或TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交反应的荧光偏振值,确定EGFR启动子甲基化状态.应用荧光偏振法检测63例宫颈癌组织样本,并与直接测序法进行对比验证.结果:本方法检测EGFR启动子甲基化结果与直接测序法结果无统计学差异,且低检测浓度为50拷贝/μl,低检测含量可达10％,敏感度高.结论:本方法检测EGFR启动子甲基化灵敏度与准确度较高,为临床宫颈癌个体化治疗相关检测提供了新技术.
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复发尖锐湿疣患者感染人乳头瘤病毒基因型的荧光偏振检测
目的检测复发尖锐湿疣患者的人乳头瘤病毒(HPV)基因型,以探讨尖锐湿疣复发的机理,并指导治疗.方法以蛋白酶K消化法提取81例复发尖锐湿疣组织临床样本DNA,以各型HPV DNA通用引物行PCR扩增,将荧光偏振检测技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用HPV 6B,11,16,18各型特异探针杂交延伸反应对扩增产物进行HPV分型,并分别以含HPV 6B,11,16,18 L1质粒的阳性及不含待测靶基因的同源质粒的阴性标准品为参照.结果81例尖锐湿疣组织块中HPV检出率100%,其中两型混合感染29例,占36.6%,三型混合感染7例,占8.6%.结论本组81例复发尖锐湿疣患者的HPV的多重感染率高达45%,可能与该病的反复复发有一定相关性.
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TDI-FP法检测肿瘤患者ERCC1 Asn118Asn基因多态性
目的 建立一种可靠、敏感、全面的ERCC1 Asn118Asn基因多态性检测新方法,用于预测肿瘤患者对铂类的耐药性.方法 以ERCC1基因第4个外显子Asn18Asn的一对引物行PCR扩增227例临床样本DNA,将荧光偏振检测技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用探针杂交延伸反应对临床样本扩增产物进行ERCC1 Asn118Asn基因多态性检测,并以DNA序列测定验证检测结果.结果 227例临床样本DNA中,119例(52.4%)ERCCI Asn118Asn基因为C/C纯合子(AAC)基因型,88例(38.8%)为C/T杂合子基因型,20例(8.8%)为T/T纯合子(AAT)基因型.但DNA序列测定法检出杂合子基因型仅33例.结论 本研究初步建立了特异性较好、操作简便、无需标记探针的临床标本ERCCl Asn118Ash基因多态性检测新方法,有望用于肿瘤患者铂类耐药性的检测.
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肺癌中EGFR外显子突变丰度的荧光偏振检测
目的：建立一种基于荧光偏振技术快速、特异的检测体系，并将该体系用于检测肺癌标本中EGFR基因19、21外显子的突变丰度，以便更加全面、准确地预测靶向药物疗效以及指导临床靶向药物选择。方法：应用Primer Premier 5.0软件在EGFR基因19、21号外显子突变区域上下游处设计19、21外显子各自的通用PCR引物，并设计覆盖各自突变区域的两对荧光标记探针（突变型和野生型）。以包含野生型（19、21）和突变型（19、21）的质粒分别为4种阳性标准品，空载体为阴性标准品，分别作为模板进行PCR扩增反应，将扩增结果应用荧光偏振仪进行检测，以建立突变丰度测量体系。后，对51例肺腺癌标本进行检测，并计算出各自的突变丰度。结果：荧光偏振检测EGFR基因19、21外显子突变结果与直接测序法结果无统计学差异，且低检测浓度为40拷贝/μl，低检测含量可达10%。本法可提供更全面的瘤内基因变异丰度分析，有利于指导临床用药。结论：荧光偏振检测EGFR基因19、21外显子突变结果不仅灵敏度与特异性高，还能提供全面的瘤内异质性分析指标，可为临床肺癌个体化治疗效果提供预测依据。
