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直接沉降法同时检测外周血粒细胞与单核细胞及淋巴细胞凋亡
外周血有核细胞主要是白细胞,在人体免疫功能中发挥巨大作用,很多疾病的发病和治疗机制的研究均需要检测这些细胞的凋亡[1-4].然而,由于外周血红细胞的数目远远超过白细胞,因此,分离出各种白细胞成为检测外周血白细胞凋亡的首要步骤.目前常用的为各种密度梯度离心法[1-3,5],需要配以相应的分离液,且步骤繁多,操作过程中也易损伤细胞.本研究尝试建立一种简便、细胞损伤小,且可以同时检测外周血各种白细胞凋亡的方法.
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外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达与血栓性疾病的相关性研究
目的 探讨血栓性疾病与组织型纤溶酶原激活物(t-PA)mRNA表达的关系.方法 用逆转录-PCR(RT-PCR)法检测外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达,发色底物法测定血浆t-PA的活性.结果 血栓形成组及血栓前状态组外周血有核细胞中t-PAmRNA的表达均明显增强,同正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01),两组人群血浆中t-PA的活性也都明显降低,同正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01).外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达与血栓前状态密切相关.结论 外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达与血栓形成及血栓前状态密切相关,有可能作为血栓前状态的早期辅助监测指标.
关键词： 外周血有核细胞 血栓形成 血栓前状态 组织型纤溶酶原激活物 逆转录聚合酶链反应 -
低剂量T-2毒素与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单独及联合染毒对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的观察
目的 观察低剂量T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的特点及其程度,探索亚临床剂量下的毒性作用.方法 3周龄雌性Balb/c小鼠80只,体质量(14.0±1.5)g.将小鼠按体质量随机分为对照组、T-2毒素组、DON组、T-2+DON联合组,每组20只.经腹腔注射感染毒素,染毒剂量:T-2毒素5 μg·kg-1·d-1,DON 20 μg·kg-1·d-1;对照组给予等量生理盐水.染毒至16周和21周,分别取小鼠尾血,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)观察小鼠末梢血有核细胞拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量变化.结果 ①T-2毒素组,尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:(27.71±15.85)%、(13.67±5.56)μm、4.26±3.83;21周:(28.38±15.57)%、(13.83±5.47)μm、4.37±3.82]均增加,与对照组[16周:(11.87±4.61)%、(10.59±6.70)μm、1.34±0.98;21周:(11.31±3.94)%、(10.83±7.05)μm、1.29±1.01]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);②DON组拖尾率、尾DNA含量、尾动量[16周:5.62%、(28.13±13.31)%、3.39±2.35;21周:7.71%、(29.17±15.12)%、5.70±4.17]均增加,其中仅拖尾率与对照组(16周:4.34%;21周:4.38%)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);③T-2+DON联合组拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:6.21%、(30.14±15.48)%、(16.93±6.58)μm、5.54±4.22;21周:8.17%、(30.85±15.76)%、(17.21±6.45)μm、5.70±4.17]均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);与T-2毒素或DON组比较,尾DNA含量和尾长均增加(P均<0.05).结论 低剂量T-2毒素和DON均可对小鼠未梢血有核细胞DNA产生明确损伤;T-2和DON联合染毒较单独染毒的损伤作用更明显.
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非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p水平及其临床意义
目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平是否可作为分子标志物.方法:收集昆明医科大学第三附属医院2011年6月至2012年6月非小细胞肺癌首诊患者60例,其中无远处转移患者30例,有远处转移患者30例.另外收集健康志愿者30例作为对照组.qPCR技术检测人支气管上皮细胞BEAS-2B、云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05以及人外周血有核细胞的表达水平.分析外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平与非小细胞肺癌患者血清标志物水平、TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理参数的相关性.结果:miR-205-5p在BEAS-2B细胞中表达水平低(0.820 8±0.255 3),而在YTMLC-90(17.507 2±1.906 3)和XWLC-05(5.725 2±1.012 0)细胞中表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);miR-205-p在健康人外周血中的表达水平显著低于无转移的以及转移的非小细胞肺癌患者(1.073 0 vs3.658 8、19.6324,均P＜0.01).外周血有核细胞miR-205-5p的阳性表达率与非小细胞肺癌患者性别、年龄、淋巴结转移、病理类型和血清肿瘤标志物水平(CEA、CA125、CA242)无关(P＞0.05),而与患者远处转移、TNM分期、血清肿瘤标志物CA153水平明显相关(P＜0.01).结论:miR-205-5p表达水平异常升高可能作为非小细胞肺癌患者转移相关的分子标志物.
关键词： miR-205-5p 外周血有核细胞 非小细胞肺癌 转移 液体活检 -
肿瘤患者外周血有核细胞对化疗药物的敏感性
目的 研究恶性肿瘤患者外周血细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选化疗方案、实行肿瘤个体化疗提供依据.方法 应用MTT法体外测定160例癌患者外周血(淋巴细胞及粒细胞)标本对临床常用化疗药物的敏感性.结果 ①5种癌患者外周血淋巴细胞和粒细胞对同一化疗药物敏感率呈正相关性,且均有统计学意义(P＜0.05).②胃癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌患者的外周血淋巴细胞及粒细胞对试验化疗药物敏感性差异有统计学意义(P＜0.05),而肝癌、淋巴瘤(NHL)检测结果差异未有统计学意义(P＞0.05).③HCPT在非小细胞肺癌和TAX、Vm-26在卵巢癌患者的外周血药敏试验中,粒细胞较淋巴细胞对化疗药物抑制率高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤患者外周血细胞体外药敏试验对临床肿瘤化疗用药有一定预见性,有助于临床医师筛选有效化疗药物,制定合理化疗方案,为个体化疗用药提供了重要的参考依据.
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非小细胞肺癌患者外周血细胞化疗药物敏感性及其临床意义的研究
目的:通过非小细胞肺癌外周血淋巴细胞和粒细胞体外培养,对其常用的化疗药物进行敏感性检测,以筛选出佳的化疗方案.方法:应用MTT吸光度法测定32例非小细胞肺癌患者外周血标本对临床常用的4种化疗药物及其组成的2个联合化疗方案的敏感性或耐药性,比较其差异.结果: 非小细胞肺癌化疗敏感性个体差异较大,联合化疗药物的敏感性明显优于单药.各药物对淋巴细胞和粒细胞的平均抑制率由高到低的顺序一致,各用药方案间比较均存在差异,部分有显著性差异(P<0.01).结论:外周血有核细胞体外药敏试验或耐药试验对临床肿瘤化疗用药有一定的预见性和指导性,对非小细胞肺癌患者进行化疗时,应尽量个体化用药并选择联合用药方案.
