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T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞睾酮生成的毒性作用
目的 探讨T-2毒素对原代培养的小鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)睾酮生成的毒性作用.方法 建立昆明种系小鼠睾丸Leydig细胞原代培养模型.T-2毒素染毒剂量组分为O(control)、10 ng/ml hCG、10 ng/ml hCG+10~(-9)mol/L T-2 toxin、10 ng/ml hCG+10~(-8)mol/L T-2 toxin、10 ng/ml hCG+10~(-7)mol/L T-2 toxin,培养24 h后检测睾酮含量.结果 随着T-2毒素染毒剂量的升高,Leydig细胞睾酮合成量逐渐下降.与对照组相比,各剂量组睾酮水平均显著降低(P<0.05).结论 T-2毒索可以直接影响原代培养的小鼠Leydig细胞睾酮合成功能.
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T-2毒素对小鼠胚胎干细胞的氧化损伤作用
目的 应用小鼠胚胎干细胞(mESC)作为模型探讨T-2毒素对mESC的作用靶点与作用机制.方法 选用0.5 ng/ml T-2毒素处理分化过程中的mESC 24、72和120 h,流式细胞术检测mESC的活性氧簇(ROS)的生成,比色法检测mESC的抗氧化防御酶活性,包括超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活力变化,以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量.结果 0.5 ng/ml T-2毒素作用72与120 h,mESC中ROS大量蓄积,抗氧化防御酶(SOD、GPZ)活力下降,MDA增加,其效应呈现时间依赖关系.自由基清除剂(Trolox,200 μmol/L)预处理可以降低T-2毒素对mESC抗氧化防御酶活力的抑制作用,减轻T-2毒素引起的mESC中ROS的蓄积以及MDA的增加.结论 低剂量T-2毒素染毒引起mESC的氧化损伤是其发育毒性的重要机制之一.
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T-2毒素对小鼠睾丸雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响
目的 探讨T-2毒素对雄性小鼠睾丸雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素表达的影响。方法 每天腹腔注射T-2毒素，浓度依次分别为0、5、10和15 mg/kg(bw)，连续7 d，然后用半定量RT-PCR法检测ABP和抑制素的mRNA表达水平变化情况。结果 T-2毒索染毒后，小鼠睾丸内ABP的mRNA表达水平统计学上没有显著变化，而抑制素的mRNA表达水平呈剂量依赖性显著降低，尤其高剂量的T-2毒素染毒后抑制索的mRNA表达水平出现缺失现象。结论 T-2毒素对雄性小鼠睾丸支持细胞有明显的毒性作用。
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T-2毒素对低硒大鼠脑组织脂质过氧化的影响
目的 探讨T-2毒素对大鼠脑组织脂质过氧化作用及其与低硒因素的协同作用.方法 选用新生断乳SD大鼠,随机分为基础组和低硒组.低硒动物模型建立成功后,将基础组随机分为基础组、低T-2组、高T-2组,低硒模型组随机分为低硒组、低硒+低T-2组、低硒+高T-2组,每天以0.1 mg/kg BW为低T-2剂量和0.2 mg/kg BW为高T-2剂量灌胃染毒1个月.染毒月末将大鼠断头处死,取全脑.作病理切片,观察大鼠神经细胞变化;测定脑组织中GSH-Px活性和MDA含量.结果 低硒各组大鼠脑组织中GSH-Px活性均显著低于基础组(P＜0.05);各组大鼠脑组织中MDA含量均显著高于基础组(P＜0.05).结论 T-2毒素能够抑制GSH-Px活性,引起MDA明显增多,并与低硒因素有协同作用.
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镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响
目的 研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用.方法 体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用；吉姆萨染色观察细胞凋亡形态；流式细胞术(FCM)检测凋亡率；FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况.结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.形态学观察显示旱幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征.FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加.FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降.结论 T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡.
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T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇全抗原的合成及鉴定
目的 分别合成T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的全抗原.方法 采用琥珀酸酐法对分子结构进行修饰,产生易反应的官能团,并与载体蛋白偶联,从而具备免疫条件,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及偶联蛋白的分子量,用商品化的T-2和DON免疫试剂盒与偶联物进行棋盘滴定验证.结果 T-2和DON的全抗原及BSA的分子量分别为67641.6、66680.4、66297.7,偶联物与免疫试剂盒中T-2和DON的抗体均呈阳性反应.结论 合成的T-2、DON全抗原为相应抗体的制备和免疫学方法的建立奠定了基础.
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常见镰刀菌素与细胞凋亡的研究进展
某些常见镰刀菌素如伏马菌素B1、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、镰刀菌烯酮-X可以诱导多种细胞发生凋亡,如肝细胞、肾细胞、胃肠细胞、免疫细胞和传代细胞.这些镰刀菌素诱导细胞凋亡的机制较为复杂,可能与神经鞘氨醇、某些基因如P21、蛋白激酶、CAMP信号系统、细胞内Ca2+水平等许多因素有关.
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减肥茶中多种真菌毒素的在线免疫亲和净化液相色谱-串联质谱测定研究
目的 建立在线免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱快速测定减肥茶中的多种真菌毒素的方法.方法采用PBS/甲醇溶液提取样品中的真菌毒素,再利用可重复使用多功能免疫亲和柱在线净化样品,净化液在线进行液相色谱-串联质谱的测定.结果方法可同时测定减肥茶中伏马毒素、T-2毒素、HT-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮等10种真菌毒素,其小检出浓度(LOQ)为1～5 μg/kg;三水平添加回收率(n=6)为65.3％～102.4％;相对标准偏差(RSD)为4.5％ ～ 13.2％.结论本方法在线免疫亲和净化技术与质谱定性定量同时完成,方法简便、快速,检测限满足了国内外减肥茶中真菌毒素限量要求,可用于减肥茶中真菌毒素的快速检测.
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抗T-2毒素单抗独特型抗体的制备及应用研究
目的 研制T-2毒素标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验(ELISA). 方法 在研制了抗T-2毒素单抗的基础上,将抗体用无花果蛋白酶进行酶切,制备抗T-2毒素单抗F(ab')2片段,并以F(ab')2片段作为免疫原免疫日本大耳白兔,研制出抗T-2毒素单抗独特型抗体. 结果 所研制的抗独特型抗体经过鉴定,是Ab2β型,与T-2毒素存在内影像关系. 结论 该抗体可以替代T-2毒素标准品应用于ELISA检测.
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青海省兴海县大骨节病病户主食中T-2毒素的检测
为了解大骨节病重病区唐乃亥乡上鹿圈村、下鹿圈村病户主食中T-2毒素的污染状况,在两村分别选择病户19名,每户收集小麦及面粉样品各1份,用ELISA法检测样品中T-2毒素的含量.上鹿圈村面粉、小麦中T-2毒素阳性率均为89.5%(17/19),平均含量分别为70.7μg/kg(8～201μg/kg)、237.1μg/kg(5～543μg/kg);下鹿圈村面粉、小麦中T-2毒素阳性率均为68.4%(13/19),平均含量分别为13.0μg/kg(9～197μg/kg)、40.0μg/kg(19～333μg/kg).其中2个采样点T-2毒素的阳性率和含量差异均存在显著性,2种样品T-2毒素的含量差异也存在显著性(P＜0.05).小麦中T-2毒素的污染情况比面粉严重,上鹿圈村主食中T-2毒素的污染情况比下鹿圈村严重,具体原因有待进一步研究.
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镰刀菌毒素DON对心肌细胞膜电位的影响及硒的保护效应
目的观察镰刀菌毒素单端孢霉烯族化合物脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对培养心肌细胞动作电位的影响及亚硒酸钠的保护效应.方法取新生1～2 d龄Wistar大鼠,分离心肌细胞,培养基为80%DMEM与20%小牛血清,于37℃,在含5%CO2与95%空气的培养箱内进行培养,于培养后第4天,引导心肌细胞动作电位为加入毒素前对照,然后向培养基中分别加入50 、100和200 mg/L DON,以观察不同剂量DON 对心肌细胞动作电位的影响.在培养基中加入含0.5 mg/L硒的亚硒酸钠,继续培养16 h后,观察硒对DON致心肌细胞膜电位改变的保护作用.结果 DON使心肌细胞去极化过程发生改变,动作电位(APA)、大除极速度(Vmax)、超射(OS)及阈电位(TP)均减小,部分参数指标存在较明显的剂量效应关系.OS在DON为50 mg/L 时出现增高现象.复极化过程的变化,复极动作电位时程(APD)明显延长; 大舒张电位(MDP)减小; 动作电位发放频率(APF)受到明显的抑制,且存在明显的剂量依存关系.在培养基中加入含0.5 mg/L硒的亚硒酸钠,继续培养16 h后,200 mg/L DON对其心肌细胞动作电位的抑制作用明显减弱,但部分参数(APA、Vmax、OS、TP、APD90及APF)没有完全保持在正常对照组水平,亚硒酸钠不能完全对抗DON 引起的心肌细胞动作电位的改变.结论 DON能抑制大鼠培养心肌细胞的跨膜电位,初步表明亚硒酸钠可减轻DON对心肌动作电位的影响,呈现明显的保护作用.
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镰刀菌毒素急性中毒与急型克山病死亡病因比较
目的:为急型克山病患者的暴死病因提供一个科学假设. 方法:将文献中报道急型克山病患者发病过程的主要症状与体征,与动物镰刀菌毒素急性中毒实验结果进行比较,了解两者的异同点.结果:动物镰刀菌毒素(T -2毒素为代表)急性中毒的主要表现有:小肠粘膜上皮隐窝细胞分裂相减少或消失,小肠粘膜上皮细胞计数下降,部分绒毛缺上皮细胞覆盖而裸露,小肠内含水量增加,血容量减少, 红细胞压积增加,血压下降,实验动物当天即可死亡,而输液抗休克治疗有效.猴中毒实验中亦可见有明显呕吐、稀便、血压下降、周围血管塌陷等表现.结论:急型克山病患者与镰刀菌毒素急性中毒者临床表现相似点很多.作者提出一个假设,即:急型克山病患者暴死原因很可能是摄入霉变粮食中污染的镰刀菌毒素,导致小肠粘膜表皮损伤,从而不断引发了呕吐及大量血浆通过小肠内壁渗漏丢失,继发低血容性内休克,重症患者可暴死 .急型克山病患者暴死的靶器官可能是小肠而不是心脏.
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固相萃取-气相色谱-串联质谱法检测粮食作物中的T-2与HT-2毒素
目的 建立粮食作物中T-2与HT-2毒素的高灵敏度气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法.方法 染毒的粮食样品以柱淋洗方式用甲醇提取后,采用C18固相萃取柱净化富集,再经七氟丁酰咪唑衍生化后,在气相色谱-串联质谱仪上采用选择反应监测(SRM)模式进行检测.结果 在染毒大米、小米、糯米和玉米样品中,T-2与HT-2毒素在0.5~100 μg/kg范围内均呈现良好的线性关系.在优分析条件下,两种毒素的低检出限均在0.05~0.5 μg/kg.在2、30 、60 μg/kg 3个加标浓度下,T-2与HT-2毒素的方法回收率均在47.2% ~110.8%.结论 该方法操作简便,灵敏度高,适用于各类粮食样品中T-2与HT-2毒素的检测.
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抗T-2毒素单克隆抗体的制备及特性
目的:建立敏感、特异和快速的针对T-2毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法:利用B细胞杂交瘤技术,建立抗T-2毒素的单克隆杂交瘤细胞株.结果:用T-2-羊免疫球蛋白(T-2-GIgG)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了2个稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A7和6E4.将上述2株杂交瘤细胞分别注入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗T-2毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到2A7和6E4单克隆抗体.两株单克隆抗体的Ig亚类为IgG1, 腹水中抗体的滴度分别为6.4×106和1.1×107,参考工作浓度分别为1.0×106和3.2×106.纯化后2A7抗体的IgG含量为16.4 g/L,亲和常数为8×10-8mol/L.2A7抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体,初步建立了针对T-2毒素的ELISA检测方法.
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T-2毒素的分析检测方法及代谢研究进展
T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表,在单端孢霉烯族毒素中毒性强,是主要的食品污染源之一,对人类的健康造成严重威胁.本文从T-2毒素的毒理学意义出发,重点评述了近年来T-2毒素在分析方法、体内外代谢等方面的研究进展.
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HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物
目的：应用HPLC-MS技术，建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm ×50 mm，1.8μm）分离，以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，以玉米赤霉酮为内标，在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3'-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol ·L-1，定量限分别为5、25 nmol ·L-1，回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高，已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。
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T-2毒素对小鼠胚胎干细胞线粒体功能的抑制作用
目的：观察T-2毒素对小鼠胚胎干细胞（mESC）线粒体功能的毒性作用，探讨其胚胎毒性的可能作用靶点与作用机制。方法处于分化过程中的 mESC加入T-20．5μg·L-1分别作用24，72及120 h，同时设Trolox 200μmol·L-1预处理后30 min再加入T-2毒素0．5μg·L-1染毒72 h组。透射电子显微镜观察线粒体内结构；罗丹明123荧光探针法流式细胞术检测 mESC内线粒体膜电位，氧电极法检测线粒体呼吸速率，计算呼吸控制比，荧光素-荧光素酶发光法测定AT P合成酶活性。结果透射电镜观察可见，T-20．5μg·L-1作用72与120 h组 mESC内线粒体数量明显减少，结构变形，线粒体中少见或缺少完整的嵴，与正常对照组相比，mESC内线粒体呼吸控制比分别下降49．5％和55．1％（P＜0．05），ATP合成酶活性分别下降84．9％和89．3％（P＜0．05），mESC线粒体膜电位下降23．2％和35．2％（P＜0．05）。Trolox预处理可以改善T-2毒素对上述线粒体功能指标的抑制作用。结论 T-2毒素可降低mESC的线粒体功能，进而抑制 mESC的分化能力，可能是其胚胎发育毒性的作用机制之一。
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基于高效液相色谱-串级质谱法研究肝微粒体中T-2毒素代谢的种属差异性
目的 比较T-2毒素在不同种属动物肝微粒体中代谢的差异性.方法 将T-2毒素与小鼠、大鼠、比格犬、猴和人肝微粒体37℃孵育不同时间,孵育液经蛋白沉淀后采用高效液相色谱-质谱法检测,比较T-2毒素在不同种属动物中代谢动力学参数及代谢产物生成量的差异.结果 T-2毒素在人肝微粒体中半衰期(t1/2)<1 mim,在小鼠和猴肝微粒体中为2~4 min,在比格犬肝微粒体中为13 min,在大鼠肝微粒体中为39 min.5种动物对T-2毒素的肝清除能力可分为3组,即人、比格犬和大鼠为1组;猴和小鼠各为1组.其中小鼠组对T-2毒素的肝清除率是人、比格犬和大鼠组的3~4倍.不同种属的肝微粒体对T-2毒素的亲和力存在显著差异,其中T-2毒素在小鼠肝微粒体中的亲和力高,其余依次为人、比格犬、大鼠和猴.酶的转化速率以在猴肝微粒体中大,大鼠和比格犬中略小,而人和小鼠肝微粒体中酶转化速率仅为猴肝微粒体中转化速率的1/106.T-2毒素在猴肝微粒体中主要代谢产物为3′-OH-T-2和新茄病镰刀菌烯醇,在人和大鼠肝微粒体中为T-2三醇和HT-2毒素,在比格犬肝微粒体中以HT-2毒素和3′-OH-T-2毒素为主,在小鼠中则以T-2三醇和3′-OH-T-2毒素为主.T-2毒素在小鼠、大鼠、比格犬和人肝微粒体中主要以水解代谢转化为主,而在猴肝微粒体中则以羟基化代谢为主.结论 T-2毒素的代谢参数、代谢产物及其生成量、代谢途径均存在种属差异性.
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Ⅱ型胶原羧基端端肽和脱氧吡啶啉在实验性大鼠关节软骨损伤中的生物标志作用
目的 观察实验性大鼠关节软骨损伤时血清中Ⅱ型胶原降解产物Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)和脱氧吡啶啉(DPD)水平,探讨其在软骨损伤中的分子生物标志物作用.方法 利用大鼠,进行亚慢性毒性试验,通过透明软骨的组织病理和超微结构改变来确定软骨的损伤程度,用ELISA夹心法检测大鼠不同阶段血清CTX-Ⅱ和DPD含量.结果 T-2毒素可致大鼠关节软骨细胞变性、坏死,出现大面积无细胞区,胶原染色可见明显的"胶原显现",扫描电镜显示,关节面起伏不平,表面粗糙,胶原纤维断裂、剥脱,关节表面布满裂片状凸起,呈典型的关节"干燥"现象;ELISA检测结果表明,T-2毒素组大鼠血清CTX-Ⅱ水平在3个月时较对照组明显增加.差异具有统计学意义.至6个月时,CTX-Ⅱ含量虽较对照组高,但差异无统计学意义;DPD检测结果正好相反.3个月时两组无差异,6个月时T-2毒素组较对照组明显升高,差异有统计学意义.结论 血清OTX-Ⅱ和DPD可作为关节软骨损伤的生物标志,但两指标反映的病理阶段不同,OTX-Ⅱ在关节软骨损伤早期反应敏感,可作为早期生物标志物,而DPD在软骨损伤后期更敏感,可作为病情进展的生物标志物.
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T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响
目的 探讨T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响.方法 对分离出的4～5周龄BABL/c小鼠睾丸间质细胞进行体外培养,分别暴露于含10 ng/ml hCG(对照)和10-9、10-8、10-7 mol/LT-2毒素+10 ng/ml hCG的培养液中24h.采用RT-PCR方法检测相关功能基因(3β-HSD-Ⅰ,P450scc和StAR)mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,10ng/ml hCG+10-8 mol/L T-2毒素和10 ng/ml hCG+10-7 mol/L T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1 mRNA的表达水平及10ng/ml hCG+各剂量T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞P450scc/HPRT、StA R/HPRT mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着T-2毒素染毒剂量的升高,10 ng/ml hCG诱导小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA的表达水平呈下降趋势.结论 T-2毒素可通过抑制小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA表达而对雄性小鼠产生生殖毒性.
