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P2X受体对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩运动的影响
目的:探讨P2X受体激动剂α,β-methylene ATP(α,β-MeATP)对豚鼠胃窦环行肌运动的影响及其离子通道机制.方法:采用EWG/B豚鼠,制备去黏膜胃窦环行肌条(10×1.5 mm),并将其固定于恒温灌流槽内(37℃),用碳酸氢钠缓冲液连续灌流并通氧(950 mL/L O2,50 mL/L CO2).利用SMUP-E生物信号处理系统记录胃窦平滑肌自发性收缩活动,Ⅱ型胶原酶消化法分离豚鼠胃窦环行肌单细胞,传统全细胞膜片钳技术记录急性分离的胃窦平滑肌细胞膜电位和离子电流,包括钙激活钾电流、延迟整流型钾电流及电压依赖性钙电流.结果:嘌呤能P2X受体激动剂α,β-MeATP明显抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,并有明显的量效倚赖关系;5,10,20,40,100 μmol/Lα,β-MeATP作用下,环行肌收缩幅度分别由对照组的100%下降到90%±2%,81%±4%,68%±4%,59%±7%和29%±4%(P＜0.05).用神经阻断剂Tetrodotoxin(TTX)预处理后,α,β-MeATP对胃窦环行肌自发性收缩的抑制作用仍不受影响;在传统全细胞膜片钳电流钳模式下,500 μmol/L α,β-MeATP不影响细胞膜电位,也对两种外向钾电流,即延迟整流型钾电流和钙激活钾电流没有影响;不同浓度的α,β-MeATP对电压依赖性钙电流没有影响.结论:P2X受体激动剂抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,其作用机制不依赖内在神经,也不依赖细胞膜离子通道以及膜电位改变.
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ATP局部注射对皮肤交感神经反应的影响
目的：探讨三磷酸腺苷（ ATP）对皮肤交感神经的影响。方法运动员90人，随机分为对照组、无菌水组和ATP组，以组别于小腿皮下注射无菌水1 mL或ATP 1 mL（0．1 mg），于力竭运动前后注射后3～5 min开始测试皮肤交感反应（SSR），测试记录点距离小腿注射点10 cm，测试指标：起始潜伏期、末梢潜伏期和波幅，并观察ATP皮肤交感神经兴奋的范围。结果力竭运动后对照组和无菌水组的SSR波幅与力竭运动前比较，均有明显下降（P＜0．05）。力竭运动前及力竭运动后ATP组SSR波幅均大于对照组和无菌水组，且差异有显著性意义（P＜0．05）。 ATP 1 mL（0．1 mg）对交感神经末梢跨节段兴奋范围达10 cm。结论小腿局部皮下注射ATP 1 mL（0．1 mg）能产生该区域皮肤交感神经兴奋作用，其兴奋作用有沿皮肤向外周扩散特征。
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三磷腺苷损伤PC12细胞的剂量和时间依赖性观察
目的 探讨细胞外三磷腺苷(ATP)对PC12细胞损伤作用的剂量和时间依赖性特点.方法 将对数生长期的PC12细胞分别用0.00、0.03、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP处理3h后,光学显微镜下观察细胞形态的变化,甲氮甲唑蓝(XTT)比色法检测细胞死亡率,锥虫蓝染色检测细胞存活率.将对数生长期的PC12细胞分别在7.00 mmol·L-1ATP作用0、1、2、3、6、12、24 h时,用XTT比色法检测细胞死亡率.结果 (1)XTT比色法检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50、1.00和2.00 mmol·L-1 ATP组PC12细胞死亡率与0.00 mmol · L-1 ATP组比较差异无统计学意义(P＞0.05).随着浓度升高,ATP诱导PC12细胞死亡作用逐渐增强,3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1 ATP明显增加细胞的死亡率,与0.00 mmol·L-1 ATP组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)锥虫蓝染色检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50和1.00 mmol·L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol·L-1 ATP组比较差异无统计学意义(P ＞0.05)；2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol· L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol · L-1 ATP组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).(3)XTT法检查7.00 mmol·L-1ATP处理细胞死亡率显示,1、2h组与0h组比较差异有统计学意义(P＜0.05),3、6、12、24h组与0h组比较差异更显著(P＜0.01),3、6、12、24h组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ATP对PC12细胞毒性作用具有剂量和时间依赖性特点.
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局部注射αβme-ATP对大鼠背部皮肤初级传入纤维的兴奋作用
目的探讨P2X嘌呤受体激动剂αβme-ATP对大鼠背部皮肤感受单位的兴奋和敏化作用.方法在大鼠T9～Ti3脊神经背侧皮支分离细束,进行单纤维电生理学记录,观察相应皮肤感受野注射αβme-ATP(100 μmol/L,10μl)或生理盐水对皮肤感受单位机械阈值和自发放电的影响及时程变化.结果①Aδ和C类纤维的机械阈值分别是(0.384±0.018)和(0.943±0.102)mN,注射αβme-ATP后降低至(0.304±0.013)和(0.659±0.071)mN(P＜0.05,P＜0.01);Aβ纤维的机械阈值是(0.301±0.019)mN,注射αβme-ATP后为(0.288±0.018)mN(P＞0.05).生理盐水对照组注射前后Aβ、Aδ和C类纤维的机械阈值均无显著变化(P＞0.05).②注射αβme-ATP后,Aβ、Aδ和C类纤维自发放电频率增加的比例分别为7.7%、66.7%和75.0%,其中Aδ和C类纤维的反应比例显著高于Aβ纤维(P＜0.01).生理盐水对照组未见自发放电频率显著增加的单位.③Aδ和C类纤维在注射αβme-ATP过程中(5 min)的平均自发放电数和注射后(5 min)的平均自发放电数与注射前相比均显著增加(P＜0.05),但Aβ纤维在注射过程中平均自发放电数和注射后平均自发放电数与注射前相比无显著性差异(P＞0.05).另外,还观察了αβme-ATP引起感觉神经自发放电的时程变化,发现αβme-ATP对Aδ和C类初级传入末梢的兴奋作用可见于所观察的整个时段.结论ATP的类似物αβme-ATP对大鼠背部皮肤的Aδ和C类纤维具有兴奋和敏化作用.
