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氨甲蝶呤对大鼠急性胰腺炎细胞因子的影响及意义
目的:观察氨甲蝶呤(MTX)对急性胰腺炎时炎症性细胞因子和抗炎症细胞因子的调节作用,从免疫的角度探讨氨甲蝶呤治疗急性胰腺炎的作用机制.方法:实验用 SD大鼠共分3组:1组为正常对照组(n=6);2组为采用开腹胰管注射5%牛黄胆酸钠(1.0m/kg)制备急性胰腺炎模型(n=8);3组为胰腺炎诱导成功后0.5 h静脉注射氨甲蝶呤(1.2 mg/kg),手术后2,6和24 h处死动物(每时段n=7),分别抽血查TNF α,IL-1,IL-6,IL-10和TGF-β及胰淀粉酶、胰腺湿质量和白细胞计数.结果:在急性胰腺炎时血中的炎症性细胞因子和抗炎症细胞因子均显著升高,在使用MTX治疗后,上述因子均下降.其中TNF α,IL-1,IL-6在2、6和24 h均明显下降(P＜0.05),IL-10和TGF-β在24 h段下降为明显(P＜0.05).1、2和3组动物24 h胰腺湿质量分别为0.53±0.09 g,1.53±0.13 g和0.85±0.22 g;三组24 h淀粉酶分别为374.±93 U/L,1817±459 U/L和766±373 U/L,对比MTX治疗前后,可见反映胰腺炎病情的胰腺湿质量和淀粉酶2项指标均明显好转(P＜0.05).结论:MTX可以同时抑制急性胰腺炎时血中过高的炎症性细胞因子和抗炎症细胞因子,从而可能通过免疫调节的方式缓解胰腺炎的病理生理异常,达到治疗目的.
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急性重症胰腺炎血液滤过治疗的机制
目的:探讨血液滤过减轻急性重症胰腺炎(SAP)全身炎症反应的机制.方法:逆行性胰管注射50 g/L牛黄胆酸钠/自身胆汁制备犬SAP动物模型,2 h后实施血液滤过2 h,并设立对照组(制模后仅给予深静脉穿刺插管而不血液滤过).记录不同时间段心率,12 h处死动物后通过病理学评分评价肺、肝脏和胰腺组织损伤情况,Westen blotting法检测肺和肝脏组织核转录因子NF-κB的核移位及RT-PCR检测肿瘤坏死因子TNF-αmRNA表达,通过比较血滤组和对照组脏器组织炎性激活和损伤的情况,分析血液滤过的作用机制.结果:血滤前心率两组之间无显著差异,血滤后各时间点均为对照组显著高于血滤组.病理学评分显示血滤减轻肺脏的损伤,而对肝脏和胰腺损伤作用不明显.NF-κB核移位和TNF-α mRNA表达均为血滤组低于对照组.结论:血液滤过减轻肺、肝脏等远离病灶器官的炎症激活和损伤,这一作用可能同血液中致炎因子的滤过清除有关.
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大鼠重症急性胰腺炎对免疫机制及TAI的影响
目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)时细胞免疫功能的变化并通过给予外源性胸腺素α1(TA1),观察能否减轻SAP的严重程度并初步探讨其作用机制.方法:♂SD大鼠54只随机分为对照组、SAP组和TA1治疗组.SAP模型采用50 g/L牛黄胆酸钠1 mL/kg胰胆管逆行穿刺注射建立,治疗组造模成功后立即皮下注射TA1(100μg/kg),对照组仅给予开腹手术.三组大鼠分别在造模后3,6,12 h处死,收集外周血与胰腺标本.观察TA1对血清淀粉酶、TNF-α及胰腺组织炎症评分的影响;同时应用流式细胞术观察外周血CD3,CD4+,CD8+T细胞的变化.结果:SAP组与治疗组各时间点血清淀粉酶、TNF-α水平及胰腺组织炎症评分均显著高于对照组(P＜0.01);12 h治疗组与SAP组相比,TNF-α水平明显下降,胰腺组织炎症评分显著改善(P＜0.01).SAP组3,6 h外周血CD3,CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P＜0.01);但在12 h则明显低于对照组(P＜0.01);治疗组3 h外周血CD3,CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P＜0.01),但6,1 2 h与对照组没有明显的差异.结论:SAP时存在细胞免疫功能的低下,外源性TA1可能通过调节CD3,CD4T细胞分化从而减轻胰腺炎症.
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肠壁穿刺逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠重症急性胰腺炎造模
目的建立一种操作简单、病变典型且稳定性好的大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型.方法46只健康雄性SD大鼠分为SAP组和对照组,SAP组经肠壁穿刺逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠,对照组同法注射等量0.9%生理盐水.两组大鼠分别于注射后3、6、12 h检测血清淀粉酶水平、胰腺组织的湿/干质量比率及病理组织学评分,观察24 h生存指数.结果SAP组各时间段血清淀粉酶和胰腺病理组织学评分均显著高于对照组,胰腺组织湿/干质量比率在注射后6、12 h显著高于对照组;其造模后24 h的总死亡率为70%(7/10).结论经肠壁穿刺逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠成功诱发大鼠SAP,其模型操作简单、可重复性好.
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黑鱼鱼胆抗炎活性成分研究
目的 研究黑鱼鱼胆的抗炎成分活性.方法 采用萃取、硅胶柱层析等方法进行分离纯化,然后通过氢谱、碳谱对分离出的单体进行结构鉴定,利用小鼠脾淋巴细胞增殖实验和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)实验评价黑鱼鱼胆抗炎活性成分.结果 利用活性追踪的方法分离得到化合物牛黄胆酸钠(C1)和化合物牛黄鹅去氧胆酸钠(C2),且两个化合物对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖实验的细胞相对活力分别为65.9%±11.7%、60.5%±9.4%,与模型组相比差异均具有极显著性(P<0.01);对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的量分别为(16.4±1.9)、(15.5±1.7) μmol·L-1,与模型组相比差异均具有极显著性(P<0.01).结论 黑鱼鱼胆中牛黄胆酸钠和牛黄鹅去氧胆酸钠具有一定的抗炎活性且对正常脾淋巴细胞和巨噬细胞无毒性作用.
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不同浓度胆盐诱导小鼠急性胰腺炎效果
目的：观察不同剂量牛黄胆酸钠诱导小鼠急性胰腺炎的效果，寻求一种稳定可靠、重复率高的胰腺炎模型建立方法。方法：利用显微外科技术，实验组小鼠开腹后，从十二指肠逆行胰胆管注射1％、2％及4％牛黄胆酸钠溶液50μL，对照组开腹后仅翻动肠管，术后12、24、48 h杀活评估胰腺炎症程度。结果：与对照组相比，不同浓度的牛黄胆酸钠胰胆管内注射均可导致小鼠血淀粉酶值升高，胰腺的病理改变为胰腺组织水肿、炎症细胞浸润、坏死等，随着浓度的提高，总体炎症程度呈加重趋势。结论：成功建立小鼠急性胰腺炎模型，结果显示逆行胰胆管注射1％、4％牛黄胆酸钠并不适用于建立小鼠胰腺炎模型，而注射2％牛黄胆酸钠50μL，可成功诱导小鼠急性重症胰腺炎模型，且成模率高，重复性好。
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HPLC-ELSD法同时测定牛胆粉中3种胆酸类成分的含量
目的:建立HPLC-ELSD同时测定动物类药材牛胆粉中胆酸、去氧胆酸和牛黄胆酸钠3种成分含量的方法.方法:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相采用乙腈-0.2%甲酸进行梯度洗脱,流速1 mL·min-1,采用蒸发光散射检测器检测.结果:胆酸、去氧胆酸和牛黄胆酸钠的线性范围分别为0.45～4.48,0.21～4.18,0.23～4.56 μg;加样回收率(n=9)分别为96.39%,96.78%,97.37%.结论:本方法简便、灵敏、准确,可用于牛胆粉药材中胆酸、去氧胆酸和牛黄胆酸钠3种成分的含量测定.
