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糖化低密度脂蛋白对成骨细胞低氧诱导因子1α表达的影响
目的：研究不同糖化程度的低密度脂蛋白（LDL）对成骨细胞增殖及代谢的影响并探讨其可能机制。方法用不同程度（4．97％和8．24％）的糖化 LDL（gly-LDL）处理小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）48 h，设普通 LDL（n-LDL）组和空白对照（Blank）组，测定缺氧诱导因子-1α（HIF-1α），VEGF mRNA表达，以及 HIF-1α蛋白表达，同时检测细胞存活率及细胞上清骨钙素（OC）水平。结果 n-LDL 组、4．97％ gly-LDL 组和8．24％ gly-LDL 组细胞存活率分别为95．6％、57．1％和71．2％。与 Blank 组比较，各实验组 OC 降低，且随着 LDL 的糖化，OC 分泌受到抑制的程度越大。n-LDL 组与 Blank 组比较， VEGF mRNA 表达量下调（P＜0．05）；8．24％ gly-LDL 组与 n-LDL 组比较，VEGF 表达量相对上调。与Blank 组及 n-LDL 组比较，8．24％ gly-LDL 上调 HIF-1αmRNA 的表达（P ＜0．01），同时上调 HIF-1α的蛋白表达。结论高糖化程度的 LDL 可影响小鼠成骨细胞 HIF-1α的基因及蛋白表达影响，这可能是gly-LDL 影响成骨细胞增殖与代谢的机制之一。
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血清和肺组织匀浆 HIF-1α水平在 COPD稳定期合并周围型肺癌中的变化和意义研究
目的：探讨血清和肺组织低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)水平在 COPD 稳定期合并周围型肺癌患者中的变化和意义。方法选取周围型肺癌择期手术患者76例,根据术前是否具有 COPD 合并症将患者分为2组,其中 COPD 稳定期患者作为 A 组(38例),肺功能正常者作为 B 组(38例),术中采集肺癌组织标本,免疫组织化学法检测肺组织 HIF-1α表达,ELISA方法检测血清和肺组织匀浆 HIF-1α水平,分析 HIF-1α与肺功能指标[肺活量(VC)、 FEV1、残气量/肺总量(RV/TCL)]的关系。结果 A 组血清 HIF-1α和肺组织匀浆 HIF-1α均明显高于 B组,2组比较差异有统计学意义(t =4.36、5.01,P <0.05),肺组织 HIF-1α阳性表达率均明显高于B 组,2组比较差异有统计学意义(χ2=6.12,P <0.05),经 Pearson 相关性分析发现,血清和肺组织匀浆 HIF-1α与 VC、FEV1呈负相关(r =-0.681、-0.712、-0.546、-0.623,P <0.05),与RV/TCL 呈正相关(r =0.651、0.611,P <0.05)。结论血清和肺组织 HIF-1α在 COPD 稳定期合并周围型肺癌中明显增高,可能与肺功能的异常改变相关。
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脯氨酰羟化酶3调控低氧诱导因子1α表达在非小细胞肺癌中的临床意义研究
目的：研究非小细胞肺癌组织中脯氨酰羟化酶3（PHD3）与低氧诱导因子1α（HIF -1α）的表达及关系，并探讨其在非小细胞肺癌发病过程中的临床意义。方法收集河北大学附属医院2010年7月-2012年4月手术切除的非小细胞肺癌标本89例，并取非小细胞肺癌组织、癌旁正常肺组织（距离肿瘤边缘>5 cm）标本进行实验。淋巴结转移51例（淋巴结转移组），无淋巴结转移38例（无淋巴结转移组）；肿瘤分期（TNM）：Ⅰ期26例，Ⅱ期34例，Ⅲ期29例。分别采用反转录聚合酶链反应（ RT - PCR）和免疫印迹法（ Western blotting）检测 PHD3和HIF -1α的mRNA 和蛋白表达水平，并分析其相关性。结果 PHD3 mRNA 在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为（17.8±2.9），高于癌旁正常肺组织中的（7.1±1.3）（t =31.763，P <0.05）；PHD3蛋白在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为（13.0±2.8），低于癌旁正常肺组织中的（20.7±4.2）（t =14.391，P <0.05）。癌旁正常肺组织及非小细胞肺癌组织不同临床分期 PHD3 mRNA 及蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（ P <0.05）；随着 TNM 分期的增加，PHD3 mRNA的相对表达量增高，而 PHD3蛋白的相对表达量降低（ P <0.05）。癌旁正常肺组织及有无淋巴结转移组 PHD3 mRNA 及蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）；且淋巴结转移组 PHD3 mRNA 的相对表达量高于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组，PHD3蛋白的相对表达量低于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组（ P <0.05）。HIF -1α mRNA在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为（17.2±2.9），高于癌旁正常肺组织中的（6.5±1.2）（t =32.163，P <0.05）；HIF -1α蛋白在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为（20.9±3.8），高于癌旁正常肺组织的（9.2±1.8）（t =26.251，P <0.05）。癌旁正常肺组织及非小细胞肺癌组织不同临床分期HIF -1α mRNA 及蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）；随着 TNM 分期的增加，HIF -1α mRNA 、HIF -1α蛋白的相对表达量增高（P<0.05）。癌旁正常肺组织及有无淋巴结转移组HIF -1α mRNA 及蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（ P <0.05）；且淋巴结转移组HIF -1α mRNA及蛋白的相对表达量高于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组（P <0.05）。非小细胞肺癌组织 PHD3蛋白的表达与HIF -1α蛋白的表达呈负相关（ r =-0.746，P <0.05）；PHD3 mRNA 的表达与HIF -1α蛋白表达呈正相关（r =0.792，P <0.05）。结论 PHD3调控HIF -1α表达可能在非小细胞肺癌的发病中发挥了重要作用，为临床将其作为抑制肿瘤发病的新靶点提供了理论依据。
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SMVT 大鼠肠道组织中 HIF-1α、VEGF表达变化及意义
目的：观察肠系膜上静脉血栓形成（SMVT）大鼠肠道组织中 HIF-1α、VEGF 的表达变化并探讨其意义。方法将64只雄性 SD 大鼠随机分为实验组和假手术组，每组32只。实验组结扎法建立 SMVT 单纯性周围型模型，建模后8、24、48、72 h 分批处死大鼠（每次8只）；假手术组仅打开腹腔，不阻断血运，术后8、24、48、72 h 分批处死大鼠（每次8只）。观察肠道大体变化；HE 染色观察大鼠肠道组织形态学变化；RT-qPCR 法、免疫组化染色及Western blotting 法检测大鼠肠道组织中 HIF-1α、VEGF mRNA 及蛋白表达。结果大体观察及 HE 染色结果示，实验组大鼠均出现不同程度的血液淤滞，且随时间延长淤血程度逐渐减轻；假手术组大鼠肠道组织均无明显病理变化。RT-qPCR、免疫组化染色及 Western blotting 结果示，实验组较假手术组对应各时间点 HIF-1α、VEGF mRNA 及蛋白表达明显升高（P 均＜0．05）。结论 SMVT 大鼠肠道组织中 HIF-1α、VEGF 表达升高，HIF-1-VEGF 信号通路可能促进 SMVT 中侧支循环的建立。
关键词： 肠系膜上静脉血栓形成 低氧诱导因子 1α 血管内皮生长因子 侧支循环 大鼠 -
突变型低氧诱导因子1α加速骨缺损部位新血管生成的实验观察
目的：通过突变低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1,HIF1α)基因的3个氨基酸位点研究该基因在常氧条件下骨缺损区域对血管新生效应的影响。方法定点突变 HIF1α编码区(coding sequence,CDS)402、564和803位3个氨基酸后将基因重组入腺病毒 pAdEasy-1系统并测定滴度,同理包装未突变组和空病毒组；以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(A 组：含突变 HIF1α基因病毒液,B 组：含未突变 HIF1α基因病毒液,C 组：空病毒液, D 组：空白组)；将病毒液转染入兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内,通过示踪因子人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)观察病毒转染效率,检测各组转染细胞中 HIF1α基因 mRNA 和蛋白表达情况；制作兔桡骨缺损动物模型,将含目的基因的病毒液按上述分组转染 MSCs 后作为种子细胞移植到多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷(apatite-wollastonite magnetic bioactive glass-ceramic,A-W MGC)载体中搭建人工组织工程骨架载体并植入体内,于术后8周处死各组动物,取植入区域组织做新血管生成检测。结果CDS 区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；3种腺病毒重组体构建成功并鉴定完毕；A、B 两组 HIF1αmRNA 表达量明显高于 C、D 两组,差异具有统计学意义(P <0.05),而 A、B 两组之间及 C、D 两组之间比较,差异无统计学意义(P >0.05)；A 组 HIF1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异具有统计学意义(P <0.05),而 B、C、D 3组之间比较差异无统计学意义(P >0.05)；A 组转染到动物体内后可见明显成血管效果,其他3组未见缺损区域有血管新生。结论①3点突变后 HIF1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达；②3点突变后 HIF1α基因能够在体内局部形成有效的血管网络。
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不同海拔及时间下大鼠白细胞 TERT及 HIF-1α mRNA 的表达及其对机体细胞寿命的影响和可能机制※
目的：研究不同海拔及时间下大鼠白细胞 TERT 及 HIF-1α mRNA 的表达规律，并探讨其对机体细胞寿命的影响及其可能机制。方法110只大鼠随机分为低海拔对照组、中度海拔组及特高海拔组，后两组根据时间不同分为1、3、7、15、30天组，每组各10只。采用 real-time PCR 法检测大鼠白细胞端粒酶逆转录酶（TERT）及低氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA 表达水平，并行相关意义分析。结果中度海拔组大鼠白细胞 TERT mRNA 水平明显高于低海拔与特高海拔组（P＜0.05），各组 TERT mRNA 水平变化与时间相关；HIF-1α mRNA 在中度海拔与特高海拔组表达均升高，中度海拔组又高于特高海拔组（P＜0.05），其变化趋势与 TERT 水平的变化基本一致。结论轻度低氧可通过 HIF-1α上调 TERT 的表达，从而使白细胞端粒酶活性升高、端粒长度延长、机体细胞寿命增加。
