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心肌营养素-1mRNA和糖蛋白130在压力超负荷性大鼠心肌中的表达变化及替米沙坦干预的影响
目的 观察心肌营养素-1(CT-1)和糖蛋白130(GP130)在压力超负荷性大鼠心肌中的表达变化与心室重构的关系,以及替米沙坦对心室重构及CT-1和GP130表达的影响.方法 20只雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术后2周制成压力负荷性心肌肥厚模型,随机分为左心室肥厚组(LVH)(10只)和替米沙坦组(Tel)(10只),另设8只作为假手术组(Sham).替米沙坦组灌胃给药(3 mg·kg-1·d-1),连续4周.测定血流动力学指标和心室质量指数,放射免疫法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,原位杂交法检测心肌的CT-1 mRNA表达水平；免疫组化法检测心肌中GP130蛋白水平表达.结果 与假手术组比较,肥厚组SBP、DBP和MBP显著升高(P=0.022,0.011,0.013),LVMI和RVMI亦明显升高(P =0.010,0.017)；心肌组织AngⅡ含量、CT-1 mRNA和GP130蛋白表达水平明显增加(P＜0.01,P=0.032,0.021).相关分析表明,心肌组织中CT-1 mRNA和GP130的蛋白表达与AngⅡ及LVMI呈显著正相关(均为P＜0.05).替米沙坦改善血流动力学指标相比较肥厚组显著降低(P =0.041,0.021,0.019),降低LVMI和RVMI(P=0.038,0.042),血浆AngⅡ含量显著增加,心肌AngⅡ含量显著降低(均为P＜0.01),CT-1 mRNA和GP130蛋白表达明显下降(P=0.029,0.018).结论 压力超负荷性大鼠心肌中CT-1 mRNA及其受体GP130蛋白的过度表达与心室重构的发生密切相关；替米沙坦逆转心室重构的机制可能与抑制CT-1及受体GP130蛋白的过度表达相关.
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重组人白细胞介素-35的真核表达及生物活性
目的 构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用.方法 构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL-35蛋白,SDS-PAGE及Western blot法鉴定蛋白表达,ELISA法检测IL-35-Fc与其受体链gp130的结合作用,并在M1小鼠白血病细胞上研究IL-35对gp130的生物学作用.结果 获得高纯度的人IL-35-Fc重组蛋白,ELISA法检测结果发现IL-35-Fc与其受体链gp130具有结合作用,并且IL-35在M1小鼠白血病细胞上对gp130具有中和作用.结论 成功制备了具有生物活性的人IL-35-IgG1(Fc)重组蛋白,发现IL-35能够与其受体链gp130的结合,在M1小鼠白血病细胞上对gp130也具有中和作用.
关键词： 重组人白细胞介素-35 糖蛋白130 M1小鼠白血病细胞 -
糖蛋白130小分子抑制剂SC144对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的影响
目的·动态观察糖蛋白130小分子抑制剂SC144对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾组织细胞外基质堆积和Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号转导通路(简称JAK2/STAT3信号通路)的影响,探讨SC144防治肾间质纤维化的可能机制.方法·将18只雌性BALB/c小鼠分为3组:假手术组、模型对照组和SC144干预组.于造模后第14日,用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)、Masson染色观察肾组织学形态改变,免疫组织化学检测肾脏巨噬细胞浸润和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达,real-time PCR检测I型/IV型胶原、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA水平,Western blotting检测肾组织JAK2、STAT3的表达和磷酸化水平.结果·SC144干预组肾小管间质损伤程度有明显减轻趋势(H-E染色,P=0.052;Masson染色,P=0.063);肾组织内纤维化指标α-SMA、I型/IV型胶原和TGF-β的mRNA表达下降,与模型对照组相比差异具有统计学意义(均P<0.05).纤维化信号通路的JAK2和STAT3的磷酸化水平较模型对照组下降(均P<0.05).结论·在小鼠UUO模型中,小分子抑制剂SC144能抑制α-SMA的活化及STAT3的磷酸化,通过JAK2/STAT3信号通路减轻肾小管上皮间质转化、减少细胞外基质表达,具有延缓UUO小鼠肾间质纤维化进程的作用.
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卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠细胞凋亡及gp130表达的影响
目的：研究卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡及gp 130表达的影响及意义。方法将60只Wistar雄性大白鼠随机分为3组：异丙肾上腺素损伤组、卡托普利预处理组、对照组（n=20）；用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡；用免疫组化方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达；用Western blot方法检测心肌组织gp 130表达。结果卡托普利预处理组与异丙肾上腺素损伤组比较，心肌细胞凋亡指数降低，Bax、gp 130表达减少，Bcl-2表达增加（P<0.01或P<0.05）。结论卡托普利预处理可通过降低gp 130的表达来减少急性心肌损伤引起的细胞凋亡。
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糖蛋白130和c-kit同时激活对脐血CD34+细胞的扩增作用
目的:探讨同时激活糖蛋白130(gpl30)和c-kit信号系统,对脐血长期培养启动细胞(LTC-IC)和混合造血细胞集落形成单位(CFU-Mix)的扩增作用.方法:利用免疫磁珠法分离纯化脐血CD细胞,在体外液体培养体系中,经可溶性白细胞介素6受体(slL-6R)、白细胞介素6(IL-6)、干细胞因子(SCF)和白细胞介素3(IL-3)的不同因子及组合扩增3w,分别用甲基纤维素法和有限稀释法测定CFU-Mix和LTC-IC的扩增效率.结果:sIL-6、IL-6和SCF单独都不能使CFU-Mix得到扩增,而三者联合可使CFU-Mix数目显著扩增,且于培养2w时扩增效能佳,此时CFU-Mix扩增到22.5倍,LTC-IC扩增到3.5倍,作为对照的SCF+IL-6+IL-3组则仅分别扩增到3.0和1.9倍.形态学分析发现:IL-6、slL-6R和SCF协同作用下,产生的集落体积较大,并可观察到各系造血细胞集落及不同发展阶段的细胞.结论:由IL-6/slL-6R复合物和5CF联合激活gpl30和c-kit信号系统可刺激造血干/祖细胞发生明显扩增,体外扩散时间以l～2周为宜.
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痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中gp130、SOCS3表达的影响
目的 观察痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织中糖蛋白130(gp130)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)基因和蛋白表达的影响.方法 将60只大鼠随机分为A、B、C、D组各15只,B、C、D组均采用三硝基苯磺酸/乙醇溶液+束缚应激、饮食失节法行肝郁脾虚型UC造模,A组采用同样方法用等量的生理盐水灌肠.C、D组分别予以痛泻要方 (生药5.5 g/kg)、美沙拉秦(0.5 g/kg)灌胃10 mL/kg,A、B组灌服等体积生理盐水.各组造模成功后第1天开始灌胃,1次/d,连续21 d.取出距肛门以上7～8 cm处结肠段,肉眼行结肠黏膜损伤评分,分别采用Real-time荧光定量PCR法及免疫组化、免疫印迹法检测结肠组织中的gp130、SOCS3基因和蛋白.结果 B组结肠黏膜损伤评分为(2.67±0.62) 分,高于A组的(0.6±0.63)分(P<0.01);C、D组分别为(1.73±0.70)、(1.27±0.46)分,均高于B组(P均<0.01);C、D组间比较无统计学差异.B组较A组结肠组织中gp130基因和蛋白表达升高、SOCS3基因和蛋白表达降低(P均<0.05),C、D组较B组结肠组织中gp130基因和蛋白表达降低、SOCS3基因和蛋白表达升高(P均<0.05),C、D组结肠组织gp130、SOCS3基因和蛋白比较无统计学差异.结论 痛泻要方可下调gp130表达、上调SOCS3表达,从而有效降低肝郁脾虚型UC大鼠结肠黏膜损伤程度.
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糖蛋白130基因在大鼠梗死心肌中的表达及意义
目的:观察急性心肌梗死(AMI)后左室梗死区(LVIZ)糖蛋白130(GP130)表达的动态变化与左室重构(LVRM)的关系,以及氯沙坦对GP130表达的影响.方法:AMI术后24 h存活的73只雄性Wistar大鼠随机分为:AMI组及氯沙坦组,AMI组又依照术后1,3,7,1 4,21,28 d分为6组,氯沙坦组于术后第2天起灌胃给药,连续4周.另设假手术组及正常组各8只为对照.行心脏标本病理分析,分别用放射免疫法和氯氨T法测定LVIZ血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和羟脯氨酸(HC)含量,用免疫组化法检测LVIZ GP130蛋白水平的表达.结果:AMI后,心脏质量(HW)、左室质量(LVW)、左室质量指数(LVWI)、HC均显著增加(P《0.05或P《0.01);AMI组LVIZ AngⅡ明显升高,与LVRM有相关性(均P《0.01);LVIZ GP130蛋白表达在AMI第1天开始即明显增加,7 d达高峰,以后有所下降,但28 d时仍明显高于假手术组(P《0.01);相关分析显示LVIZ GP130蛋白表达与 LVIZ Ang Ⅱ、LVRM参数间呈正相关(P《0.05或P《0.01);与AMI 28 d组相比,氯沙坦组LVRM明显减轻,GP130蛋白表达明显下调(P《0.05或P《0.01).结论:大鼠AMI后LVIZ GP130基因的过度表达与LVRM的发生密切相关,氯沙坦改善LVRM的机制还可能与抑制GP1 30基因的过度表达有关.
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乳腺癌淋巴结转移与癌组织中白细胞介素-6受体及糖蛋白130的关系
目的探讨乳腺癌淋巴结转移与活体癌组织中白细胞介素-6受体(IL-6R)、糖蛋白130(gp130)表达的关系.方法应用病理学诊断的方法检查腋窝淋巴结有无癌细胞转移,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织IL-6R、gp130的mRNA表达.结果 IL-6R组中,有淋巴结转移的IL-6R表达率为37.500%(9/24),无转移的为84.314%(43/51),差异有非常显著性(χ2=16.82,P<0.001);gp130组中,有腋窝淋巴结转移的癌组织中gp130表达率为25.000%(6/24),无转移的为78.431%(40/51),差异有非常显著性(χ2=19.65,P<0.001).结论乳腺癌组织中的IL-6R、gp130及IL-6表达与乳腺癌患者的淋巴结转移及预后有关.
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大鼠压力超负荷心肌糖蛋白130表达及贝那普利干预研究
目的 研究糖蛋白130(GP130)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心肌肥大模型中的表达变化与心肌肥大的关系,以及贝那普利(Benazepril,Ben)对GP130蛋白表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,随机分为左室肥厚组(LVH,n=7)、贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d-1,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组化法检测心肌中GP130 蛋白水平表达.结果与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量(P＜0.01)和GP130蛋白表达水平明显增加(P＜0.05).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度(P＜0.01)与GP130蛋白表达水平(P＜0.05).结论 GP130蛋白的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对GP130蛋白表达及心肌肥大有抑制作用.
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下调糖蛋白130基因表达对HaCaT细胞体外增殖及IL-6水平的影响
目的 探讨下调糖蛋白(glycoprotein,gp) 130基因表达对人永生化角质形成细胞株(human immortal keratinocyte colony HaCaT cells,HaCaT)细胞体外增殖及IL-6水平的影响.方法 设计并合成三条gp130的siRNA,转染HaCaT细胞后,从mRNA表达、蛋白质水平上检测gp130,筛选出适siRNA序列及浓度用于后续实验.转染HaCaT细胞24h,48h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞增殖周期;荧光定量PCR法检测mRNA表达;Western blotting印迹法检测蛋白水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-6水平.结果 siRNA-1与siRNA-NC、空白对照组相比,HaCaT细胞增殖率及增殖周期在24h时差异均无统计学意义(均P＞0.05),48h时差异均有统计学意义(均P＜0.05);IL-6mRNA表达、蛋白水平在转染HaCaT细胞24h时差异均无统计学意义(均P＞0.05),48h时差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 下调gp130基因可抑制角质形成细胞增殖,影响角质形成细胞增殖周期,并可抑制IL-6的表达和分泌.
