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阿托伐他汀钙对原代成骨细胞OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响
目的 观察不同浓度阿托伐他汀钙对体外培养原代成骨细胞增生和对OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响,探讨阿托伐他汀钙抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据.方法 采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞；采用差速贴壁法进行纯化.光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化SABC法对细胞进行鉴定.用不同浓度的阿托伐他汀钙(10-9、10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L)干预成骨细胞,在24、48和72 h后,用实时荧光定量方法检测OPGmRNA、RANKL mRNA、M-CSF mRNA的表达水平.结果 镜下观察显示细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角、多边、长梭等形态,并伸有粗大伪足；碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性.实时荧光定量PCR结果显示:不同浓度的阿托伐他汀钙(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)均可以促进OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,对M-CSF mRNA基因的表达也具有促进作用,且与药物浓度及作用时间有关.结论 采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,采用多次“差速贴壁法”可以获得数量多、纯度高且活性好的成骨细胞.阿托伐他汀钙可以促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达,抑制RANKL基因mRNA的表达,对M-CSF基因的表达也有一定的促进作用.
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辅酶Q10干预糖尿病牙周炎大鼠血清骨指标的变化
目的:探索辅酶Q10对伴2型糖尿病牙周炎大鼠血清RANKL、OPG的水平,及牙周病损中的作用.方法:选择质量200g左右Wistar健康雄性清洁级大鼠48只,随机分为3组:糖尿病对照组(D G),牙周炎+糖尿病+NaCl组(PDNaG),牙周炎+糖尿病+CoQ10组(PDCoG).观察大鼠的牙周探诊深度,牙槽骨垂直吸收高度,HE染色检测牙周组织病理变化.酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清RANKL/OPG水平.结果:灌胃第8周,各组大鼠的牙周探诊深度、牙槽骨垂直吸收高度差异均有统计学意义(P＜0.05);各组血清RANKL、OPG水平差异无统计学意义(P＞0.05);灌胃第8周,各组间RANKL/OPG的比值差异有统计学意义(P＜0.05).结论:辅酶Q10对伴2型糖尿病牙周炎大鼠牙周炎有改善作用,可调节血清RANKL/OPG达到平衡.
关键词： 牙周炎 2型糖尿病 辅酶Q10 核因子-KB受体活化子配体 骨保护因子 -
体外培养的人牙周膜细胞在机械力作用下骨保护因子mRNA的表达
目的研究机械力对体外培养的人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达的影响.方法应用细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施予间歇性牵张力48小时,原位杂交检测细胞加力前后OPG mRNA的表达.结果机械力作用下人牙周膜细胞OPG mRNA表达下降.结论正畸骨改建过程中,机械力引起牙周膜细胞OPG表达的变化.这一结论为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建的机理打下基础.
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流体剪切力对MLO-Y4骨细胞骨性标志物表达的影响
目的 通过研究MLO-Y4骨细胞受流体剪切力作用前后骨性标志物在mRNA水平的表达变化,探讨机械力影响骨组织代谢中骨细胞的作用.方法 以小鼠成骨细胞(MOB)为参照,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MLO-Y4细胞在体外培养条件下,以及受流体剪切力作用0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h,24 h后骨性标志物在mRNA水平的表达特征和变化.结果 以MOB为参照,在mRNA水平,体外培养条件下MLO-Y4细胞骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)高表达;破骨细胞分化因子(RANKL)、骨保护因子(OPG)低表达,但RANKL/OPG比值明显高于MOB.受流体剪切力作用后,MLO-Y4细胞ALP、OCN表达降低;RANKL和OPN表达增加;OPG随加力时间也有一定变化.结论 MLO-Y4细胞具有分化终末骨细胞的特点;流体剪切力作用后,RANKL/OPG比值以及ALP、OCN和OPN等骨性标志物的表达发生变化,为其参与机械力信号到生物信号的传导过程提供了间接证据.
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姜黄素对脂多糖刺激成骨细胞骨吸收的影响
目的 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法探讨姜黄素对脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后骨保护因子(OPG)和破骨细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL) mRNA表达的影响.方法 1μg/mL LPS作用成骨细胞6、12、18、24、48 h,并用10μmol/L姜黄素预处理成骨细胞60 min后加入1μg/mL LPS继续作用6、12、18、24、48 h,RT-PCR检测成骨细胞OPG和RANKLmRNA的表达.结果 当以1μg/mL LPS作用于成骨细胞,随着作用时间的增加成骨细胞表达RANKL mRNA的能力逐渐增强,到24 h达到高峰,到48 h基本恢复至初始水平;用10 μmol/L姜黄素预处理成骨细胞,然后再用1μg/mL LPS处理成骨细胞48h,发现成骨细胞表达RANKL mRNA的能力明显减弱,随着作用时间的增加成骨细胞表达RANKL mRNA的能力变化不明显.当以1 μg/mL LPS作用于成骨细胞,成骨细胞表达OPG mRNA的能力无明显变化;用10 μmol/L姜黄素预处理成骨细胞,然后再用1 μg/mL LPS处理成骨细胞48 h,发现成骨细胞表达OPG mRNA的能力也无明显变化.结论 姜黄素可以减少LPS刺激后成骨细胞RANKL mRNA的表达,对OPG mRNA表达无影响,进而使得RANKL/OPG的比值减小,抑制骨吸收.
关键词： 姜黄素 脂多糖 骨保护因子 破骨细胞核因子κB受体活化因子配基 -
破骨细胞在大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期中的改变
目的 初步研究大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期中破骨细胞和骨保护因子(osleoprotegerin,OPG)的变化和规律,探讨破骨细胞在正畸导致的炎性牙根吸收修复中的作用.方法 建立大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期模型,免疫组化检测OPG的表达,TRAP染色观察破骨细胞的变化.结果 实验第1天,OPG表达量下降,第3天以后逐渐恢复至生理水平.实验第1天起,TRAP染色阳性细胞逐渐减少,实验第7、10、14天,TRAP染色阳性数量已逐渐恢复至生理水平.结论 施力终止后,大鼠牙根即停止吸收,并于1～3 d后开始牙根修复,OPG的量与此过程密切相关.
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乏氧对IL-17调控牙周膜细胞RANKL及OPG表达的影响
目的 探究不同乏氧条件下IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL及OPG表达的影响.方法 在常氧(氧体积分数20%)及不同乏氧条件下:轻度乏氧(氧体积分数10%)、中度乏氧(氧体积分数5%)、重度乏氧(氧体积分数2%) IL-17处理人牙周膜成纤维细胞24 h.通过CCK8比色法检测细胞增殖情况,实时定量RT-PCR和Western-blot方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL及骨保护因子OPG的表达水平.结果 氧体积分数10%、5%时,人牙周膜成纤维细胞的增殖与时间呈正相关关系,氧体积分数2%时,细胞增殖受到明显抑制.乏氧培养后随氧体积分数的降低,人牙周膜成纤维细胞RANKL蛋白及mRNA的表达升高,OPG的蛋白及mRNA表达呈现先升后降的趋势.结论 当氧体积分数在5%左右时大程度上调RANKL/OPG比例,提示中度乏氧可促进IL-17调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达,并参与牙槽骨的改建.
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PRF复合组织工程骨修复牙周骨缺损中基因的表达及意义
目的 探讨组织工程煅烧骨复合富血小板纤维蛋白(PRF)修复牙周骨缺损中BMP-2、骨保护素(OPG)和核因子B受体活化因子配体(RANKL)的表达及意义.方法 将36只新西兰大白兔随机均分为4组,制备单侧牙周骨缺损模型,其中3组于骨缺损处分别植入煅烧骨、Bio-oss骨和煅烧骨/PRF复合物,以未植入任何材料者作为空白对照.术后4,8,12周处死动物,获取完整标本,进行大体、Masson染色及免疫组化观察.结果 Masson染色:煅烧骨/PRF组术后8周时即见部分鲜红色成熟骨形成,骨成熟速度明显优于其他3组.免疫组化观察:术后4周时煅烧骨/PRF组BMP-2、OPG、RANKL强阳性表达,数目高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05).RANKL阳性细胞的表达在骨改建过程中有不同程度的降低,煅烧骨/PRF组中组中RANKL下降为明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 煅烧骨/PRF组修复牙周骨缺损会增加BMP-2、OPG、RANKL的表达,通过促进成骨细胞分化成熟而刺激OPG表达升高,抑制破骨细胞,有助于加快牙周骨改建,缩短骨愈合过程.
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骨质疏松症髋部骨折患者骨组织OPG、ODFmRNA的表达及意义
目的 观察骨质疏松症髋部骨折患者骨保护因子(OPG)及破骨细胞分化因子(ODF)mRNA的表达,并探讨其意义.方法 采用半定量RT-PCR技术检测50例50岁以上骨质疏松症髋部骨折患者(观察组)和30例非骨质疏松症髋部骨折患者(对照组)骨组织OPG、ODFmRNA的表达.结果 对照组骨组织中OPG mRNA有表达,ODFmRNA呈微弱表达;观察组骨组织中OPGmRNA、ODF mRNA均有表达,OPGmRNA与ODFmRNA的比值远远低于对照组骨组织.结论 老年骨质疏松症髋部骨折患者ODFmRNA表达明显上升.OPGmRNA与ODFmRNA的比值显著下降.这可能是老年骨质疏松症髋部骨折的发病机制之一.
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糖尿病对大鼠种植体周围OPG和RANKL表达的影响
建立糖尿病大鼠实验动物模型成功后,将大鼠分为糖尿病种植组(T组),糖尿病对照组(T0组),正常种植组(C组),正常对照组(C0组).T组及C组的胫骨近骺端种植纯钛种植体,分别于植入后1、2周处死动物,采用免疫组化和实时定量PCR方法 检测种植体周围骨组织中骨保护因子(OPG)和破骨细胞核因子KB受体活化因子配体(RANKL)的表达.结果 OPG和RANKL表达在骨基质、成骨细胞及骨髓基质细胞中,T、C组阳性信号增强,髓腔内更加明显;T、T0组大鼠皮质骨孔隙明显多于C、C0组.T、C组第1、2周OPG均较C0组增加,T组第2周比T0组增加;T组第1、2周RANKL均比C0、T0组增加(P均<0.05).提示糖尿病可能通过OPG和RANKL通路使种植体植入周围骨组织中破骨细胞的形成增加,削弱了糖尿病种植体与周围骨组织的骨整合.
关键词： 糖尿病 种植牙 骨保护因子 破骨细胞核因子κB受体活化因子配体 -
人白介素－1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系
目的：检测不同浓度重组人白介素－1β（recombinant human interleukin－1β，rhIL－1β）对体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells，HPDLCs）表达骨保护因子（osteoprotegerin，OPG）的影响，研究rhIL－1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法：正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜，体外传代培养HPDLCs；ELISA法和RT－PCR法测定不同浓度rhIL－1β（0、5、10、15μg／L）下HPDLCs的OPG分泌量及mRNA表达。结果：ELISA和RT－PCR法检测结果显示，5、10、15μg／L rhIL－1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和mRNA表达。同一时间点与0μg／L对照组比较，5、10、15μg／L组OPG蛋白分泌和mRNA表达依此下调，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：rhIL－1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制，对牙槽骨健康产生不利影响。
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RANK/RANKL/OPG系统与肿瘤
胞核因子κB受体活化因子/细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护因子(RANK/RANKL/OPG)系统在破骨细胞的活化、发育、成熟过程中起关键性作用,近年研究发现该系统也广泛参与骨肿瘤发生、肿瘤骨转移、细胞凋亡,这些研究为相关疾病的治疗提供了新的思路和方法,如重组OPG和人类RANKL单克隆抗体AMG-162的应用.
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钛表面改性对MG-63细胞分泌和OPG/RANKL表达的影响实验研究
目的 检测纯钛钛片表面改性后的表面微型貌对MG-63人成骨样细胞分泌和表达OPG/RANKL mRNA的影响.方法 将MG-63细胞传代培养后分别接种于采用砂磨抛光和喷砂-酸碱处理的两种不同钛片表面及对照组玻片表面,收集第2,4,6,8天的细胞采用RT-PCR和real time PCR法检测OPG/RANKL mRNA的表达量,并对结果进行统计学分析.结果 具有多孔结构和较大粗糙度的喷砂-酸碱处理组OPG mRNA的表达量高于其余各组(P＜0.05)；时间点上,第8天的表达量高于前3个时间点,存在统计学差异(P＜0.05),随时间延长,表达呈上调趋势.喷砂-酸碱处理组和砂磨抛光组钛片表面的RANKL mRNA的表达量高于对照组(P＜0.05)；时间点上,在第6天出现峰值后呈下降趋势.结论 一定表面粗糙度和微孔结构以及足够的作用时间对OPG/RANKL mRNA的局部表达比有上调优势,表面微型貌和时间对表达有协同作用.
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不同熔附金属全冠对种植体周围组织中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL表达的影响
目的:研究不同熔附金属全冠对种植体周围组织中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL表达的影响.方法:选取在本院接受熔附金属全冠修复的90例患者纳入研究,包括镍铬合金修复、钴铬合金修复、金合金修复各30例,分别纳入镍铬合金组、钴铬合金组和金合金组,检测龈沟液中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL的表达情况.结果:(1)炎症因子:镍铬合金组龈沟液中白细胞介素-6(IL-6)、NO以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)含量均高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P＜0.05);(2)黏附分子:镍铬合金组龈沟液中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子-1(sV-CAM-1)、E型钙粘附分子(E-cadherin)含量均高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P＜0.05);(3) OPG/RANKL:镍铬合金组患者的RANKL含量、RANKL/OPG比例低于钴铬合金组和金合金组,OPG含量高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:钴铬合金和金合金熔附金属全冠对牙周组织的刺激较弱,龈沟液中炎症因子、黏附分子含量以及OPG/RANKL比例较低.
关键词： 熔附金属冠 炎症因子 黏附分子 破骨细胞核心因kB受体活化因子配基 骨保护因子 -
骨保护因子及其配体调控骨吸收的研究进展
成骨细胞或骨髓基质细胞在破骨细胞分化、激活过程中起重要作用.骨保护因子及其配体是各种亲骨性因子、骨代谢激素、药物调节骨代谢的核心因子.其中,骨保护因子是抑制破骨细胞骨吸收功能的核心因子,通过阻断其配体--破骨细胞分化因子对骨吸收的激活作用来调控骨代谢的平衡.因此,骨保护因子在治疗多种骨病中具有巨大潜力,有望成为治疗骨质疏松症的理想药剂.
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破骨细胞核因子κB受体活化因子配基和骨保护因子在种植体周围软组织及骨组织的表达
目的 研究破骨细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)及其伪受体骨保护因子(OPG)在非负荷期种植体周围软组织和骨组织中的表达变化及时间分布特点.方法 选用6只1～2岁龄的雄性Beagle犬建立种植义齿动物模型,分别观测种植体植入后3、7、15、30、60、90d种植体周围的骨改建情况.取种植体周围软组织进行实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)；取犬下颌骨进行大体标本观察拍摄X线片；取种植体周围骨组织进行免疫组化染色,检测RANKL和OPG随时间的表达变化及分布特点.结果 骨改建的活跃期为种植体植入后的第7天,种植体周围软组织中的RANKL和OPG mRNA及骨组织中的RANKL和OPG均随种植体植入时间的增加而增加,第7天达高峰,而后均逐渐降低.RANKL和OPG在种植体周围软组织及骨组织中的表达变化规律一致.结论 OPG和RANKL能在种植体周围软组织中表达,且变化规律与种植体周围骨组织改建过程一致.种植体周围组织可以通过OPG/RANKL系统参与破骨细胞的形成,调节骨质吸收,影响骨组织代谢微环境.
关键词： 牙种植 核因子κB受体活化因子配基 骨保护因子 种植体周
