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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞微小 RNA-206表达水平
目的：检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC）微小 RNA-206（microRNA-206，miRNA-206）表达水平，探讨其在 SLE 发病机制中的作用。方法选择2012年12月至2013年11月在沭阳县人民医院确诊的 SLE 患者，SLE 活动性判断采用 SLE 疾病活动指数（systemic lupus erythematosus diease activity index，SLEDAI）；将所纳入 SLE 患者分为非活动组（SLEDAI≤9分）和活动组（SLEDAI ＞9分）。采集 SLE 患者及健康对照者外周血标本，分离 PBMC。用实时荧光定量聚合酶链反应检测 PBMC 中 miRNA-206及锌指样转录因子4（Kruppel-like factor 4，KLF4）和孤儿核受体γt（orphan nuclear receptor γt，RORγt）mRNA 相对表达量。统计学处理采用 t 检验和 Spearman 相关分析。结果共纳入27例 SLE 患者（非活动组12例，活动组15例）和20名健康对照者。SLE 患者 PBMC 中 miRNA-206表达水平显著低于健康对照组，差异有统计学意义[（0．066±0．021）vs．（0．143±0．059），P ＜0．01]；SLE 活动组（0．034±0．015）显著低于非活动组（0．125±0．038）与健康对照组，差异均有统计学意义（均 P ＜0．01）。SLE 患者 KLF4和 RORγt mRNA 表达水平显著高于健康对照组[（0．637±0．186）vs．（0．104±0．028），P ＜0．01；（0．575±0．263）vs．（0．065±0．014），P ＜0．01]。SLE 活动组 KLF4 mRNA （0．973±0．231）显著高于非活动组（0．131±0．056）与健康对照组，且 RORγt mRNA（0．968±0．316）显著高于非活动组（0．094±0．019）与健康对照组，差异均有统计学意义（均 P ＜0．01）。直线相关分析显示，miRNA-206与 SLEDAI 呈负相关（r ＝－0．654，P ＜0．01），KLF4 mRNA 与 SLEDAI 呈正相关（r ＝0．673，P ＜0．01），RORγt mRNA 与 SLEDAI 呈正相关（r ＝0．719，P ＜0．01）；SLE 患者 miRNA-206与 KLF4、RORγt mRNA相对表达量均呈负相关（r ＝－0．627，P ＜0．01；r ＝－0．853，P ＜0．01），KLF4与 RORγt mRNA 呈正相关（r ＝0．684，P ＜0．01）。结论：SLE 患者 PBMC 中 miRNA-206表达水平下降，KLF4和 RORγt mRNA 表达水平升高，并与疾病活动性密切相关，提示 miRNA-206可能在 SLE 发生发展中起重要作用。
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微小RNA-206在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中表达的变化
目的 检测SLE患者PBMCs微小RNA (miR)-206表达的水平,探讨其在SLE发病中的作用.方法 收集SLE患者及健康对照外周血标本,分离PBMCs.采用实时定量(qRT)-PCR方法检测PBMCs中miR-206及锌指样转录因子4(KLF4)、孤儿核受体γt(RORγt)mRNA相对表达量.采用t检验和Spearman相关分析.结果 SLE患者PBMCs miR-206表达的水平显著低于健康对照组(0.066±0.021和0.143±0.059,t=3.136,P＜0.01),KLF4 mRNA、RORγt mRNA表达水平显著高于健康对照组(0.637±0.186和0.104±0.028,t=6.673,P＜0.01)、(0.575±0.263和0.065 ±0.014,t=7.386,P＜0.01),SLE患者PBMCs miR-206表达水平与KLF4、RORγt相对表达量均呈负相关(r=-0.627,P＜0.01)、(r=-0.853,P＜0.01).结论 SLE患者PBMCsmiR-206表达的水平下降,与疾病的发生发展关系密切.
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呼吸道合胞病毒毛细支气管炎婴幼儿外周血单个核细胞microRNA-206表达水平的变化
目的 检测呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎婴幼儿外周血单个核细胞(PBMCs) microRNA-206 (miR-206)的表达水平,探讨其在毛细支气管炎发生发展中的作用.方法 收集35例RSV毛细支气管炎婴幼儿急性期和恢复期及25名健康对照儿童外周血标本,分离PBMCs,经佛波酯(PMA)和离子霉素刺激后提取总RNA,反转录成互补DNA.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测PBMCs中miR-206及锌指样转录因子4(KLF4)的相对表达量,酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素-17 (IL-17)水平.结果 RSV毛细支气管炎急性期、恢复期患儿及健康对照组儿童miR-206水平分别为0.055±0.018、0.187±0.069和0.204±0.075,急性期分别低于恢复期与健康对照组,组间差异有统计学意义(P＜0.01);而恢复期与健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).KLF4 mRNA水平分别为0.588±0.161、0.086±0.024和0.075±0.019,急性期分别高于恢复期和健康对照组,组间差异有统计学意义(P＜0.01);而恢复期和健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).IL-17水平分别为(58.26±25.88) ng/L、(9.87±3.01) ng/L和(7.65±2.16) ng/L,急性期分别高于恢复期和健康对照组,组间差异有统计学意义(P＜0.01);而恢复期和健康对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).急性期miR-206水平与KLF4 mRNA相对表达量和血清IL-17水平均呈负相关(r=-0.624、-0.609,P均＜0.01),KLF4 mRNA相对表达量与血清IL-17水平呈正相关(r=0.662,P＜0.01).结论 miR-206在RSV感染引起的毛细支气管炎中起一定作用,低表达miR-206的患儿可能在感染RSV后患毛细支气管炎的易感性增加.
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KLF4在大鼠晶状体损伤促进视神经再生过程中的表达
目的 观察单纯视神经损伤及视神经损伤联合晶状体损伤后视网膜神经节细胞及其轴突中锌指样转录因子4(KLF4) mRNA表达量的变化,探讨晶状体损伤促进视神经再生的相关机制.方法 取54只健康成年Wistar大鼠随机分成对照组(6只)、单纯视神经损伤组(24只)、视神经损伤联合晶状体损伤组(24只).分别于7d、14 d、21 d处死对照组大鼠各2只,单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组大鼠各8只.透射电镜观察损伤后轴突的显微结构变化,荧光定量聚合酶链反应检测不同分组不同时间点视网膜神经节细胞及其轴突上KLF4 mRNA的表达.结果 损伤7d时,透射电镜下见单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组轴突较对照组明显肿胀,轴浆电子密度降低,髓鞘结构混乱,联合晶状体损伤组可见部分簇状排列的无髓鞘包裹的新生神经纤维,损伤14 d和21 d时单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组均少见髓鞘轮廓,见众多胶原纤维.损伤7d时,单纯视神经损伤组(2-△△△为0.561 ±0.045)和联合晶状体损伤组(0.091 ±0.026)KLF4 mRNA相对表达量较对照组(1.003±0.113)均有不同程度降低,联合晶状体损伤组降至低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05)；损伤14 d时,单纯视神经损伤组(2-△△Ct为0.333±0.106)和联合晶状体损伤组(0.401±0.169) KLF4 mRNA相对表达量较对照组仍有不同程度降低,差异有统计学意义(均为P＜0.05),但单纯视神经损伤组和联合晶状体损伤组间差异无统计学意义(P＞0.05)；损伤21d时,单纯视神经损伤组(2-△△Ct为1.100±0.100)和联合晶状体损伤组(1.166 ±0.115) KLF4 mRNA相对表达量较对照组轻度增高,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 晶状体损伤促进视神经再生的机制可能与KLF4表达减少有关,这为基因转录水平靶向治疗视神经病变提供了新的思路.
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重症肌无力患者外周血单个核细胞中KLF4、RORγt与miR-206水平变化的临床意义
目的 检测重症肌无力患者外周血单个核细胞(PBMC)中锌指样转录因子4(KLF4)、孤儿核受体γt(RORγt)、microRNA-206的表达水平,探讨它们在重症肌无力患者发病中的作用.方法 采集重症肌无力患者及健康对照者清晨空腹外周血标本,梯度离心得到人PBMC.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PBMC中KLF4、RORγt mRNA、microRNA-206的相对表达量.结果 重症肌无力患者PBMC中KLF4 mRNA为0.594±0.181,健康对照者为0.089±0.025;重症肌无力患者PBMC中RORγt mRNA表达水平为0.570±0.266,健康对照者为0.067±0.016,重症肌无力患者均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).重症肌无力患者PBMC中microRNA-206表达水平为0.053±0.018,健康对照者为0.134±0.056,重症肌无力患者显著低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).重症肌无力患者PBMC中KLF4、RORγt相对表达量与microRNA-206表达水平均呈负相关(r=-0.675,P＜0.05,r=-0.806,P＜ 0.05).结论 重症肌无力患者PBMC中KLF4mRNA、RORγtmRNA的表达水平增高及microRNA-206表达水平下降,和疾病的发生和发展有密切的关系.
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类风湿关节炎患者外周血单个核细胞microRNA-206表达水平的变化及意义
目的：探讨外周血单个核细胞microRNA-206在类风湿关节炎发生中的作用。方法收集2012年12月～2013年11月确诊的类风湿关节炎患者27例及25例健康对照外周血标本，分离 PBMCs。采用实时定量 PCR（qRT-PCR）方法检测PBMCs中microRNA-206及锌指样转录因子4（KLF4）、孤儿核受体γt（RORγt）mRNA相对表达量。统计学处理采用非配对t检验和 Spearman相关分析。结果类风湿关节炎患者外周血单个核细胞 microRNA-206表达的水平显著低于健康对照组（0.056±0.019 vs 0.138±0.057，t＝3.103，P＜0.01），KLF4 mRNA和RORγt mRNA表达水平显著高于健康对照组（0.604±0.183 vs 0.098±0.027，t＝6.651，P＜0.01；0.583±0.271 vs 0.069±0.018，t＝7.438，P＜0.01），类风湿关节炎患者外周血单个核细胞microRNA-206表达水平与 KLF4及 RORγt相对表达量均呈负相关（r＝-0.639，P＜0.01；r＝-0.842，P＜0.01）。结论类风湿关节炎患者外周血单个核细胞 microRMA-206表达的水平下降，与疾病的发生发展关系密切。
