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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞微小 RNA-206表达水平
目的：检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC）微小 RNA-206（microRNA-206，miRNA-206）表达水平，探讨其在 SLE 发病机制中的作用。方法选择2012年12月至2013年11月在沭阳县人民医院确诊的 SLE 患者，SLE 活动性判断采用 SLE 疾病活动指数（systemic lupus erythematosus diease activity index，SLEDAI）；将所纳入 SLE 患者分为非活动组（SLEDAI≤9分）和活动组（SLEDAI ＞9分）。采集 SLE 患者及健康对照者外周血标本，分离 PBMC。用实时荧光定量聚合酶链反应检测 PBMC 中 miRNA-206及锌指样转录因子4（Kruppel-like factor 4，KLF4）和孤儿核受体γt（orphan nuclear receptor γt，RORγt）mRNA 相对表达量。统计学处理采用 t 检验和 Spearman 相关分析。结果共纳入27例 SLE 患者（非活动组12例，活动组15例）和20名健康对照者。SLE 患者 PBMC 中 miRNA-206表达水平显著低于健康对照组，差异有统计学意义[（0．066±0．021）vs．（0．143±0．059），P ＜0．01]；SLE 活动组（0．034±0．015）显著低于非活动组（0．125±0．038）与健康对照组，差异均有统计学意义（均 P ＜0．01）。SLE 患者 KLF4和 RORγt mRNA 表达水平显著高于健康对照组[（0．637±0．186）vs．（0．104±0．028），P ＜0．01；（0．575±0．263）vs．（0．065±0．014），P ＜0．01]。SLE 活动组 KLF4 mRNA （0．973±0．231）显著高于非活动组（0．131±0．056）与健康对照组，且 RORγt mRNA（0．968±0．316）显著高于非活动组（0．094±0．019）与健康对照组，差异均有统计学意义（均 P ＜0．01）。直线相关分析显示，miRNA-206与 SLEDAI 呈负相关（r ＝－0．654，P ＜0．01），KLF4 mRNA 与 SLEDAI 呈正相关（r ＝0．673，P ＜0．01），RORγt mRNA 与 SLEDAI 呈正相关（r ＝0．719，P ＜0．01）；SLE 患者 miRNA-206与 KLF4、RORγt mRNA相对表达量均呈负相关（r ＝－0．627，P ＜0．01；r ＝－0．853，P ＜0．01），KLF4与 RORγt mRNA 呈正相关（r ＝0．684，P ＜0．01）。结论：SLE 患者 PBMC 中 miRNA-206表达水平下降，KLF4和 RORγt mRNA 表达水平升高，并与疾病活动性密切相关，提示 miRNA-206可能在 SLE 发生发展中起重要作用。
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微小RNA在中国汉族人血浆中的分布研究
目的 观察中国汉族人血浆中miR-192、miR-206及miR-613的分布情况.方法 用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定116例健康受试者的miR-192、miR-206及miR-613的表达,外加cel-miR-39进行校正,分析不同受试者血浆中miR-192、miR-206及miR-613的表达差异.结果 116例受试者血浆中miR-192、miR-206、miR-613的相对表达量(△Ct)分别为14.01 ±4.19,17.63±4.42,19.77±4.68,miR-192在血浆中的表达量明显高于miR-206、miR-613(P＜0.05);将3组数据分别按四分位数分组后,发现miR-192、miR-206、miR-613各四分组组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 中国人汉族人血浆中miR-192、miR-206和miR-613呈正态分布且这3种miRNAs在血浆中的分布有显著差异.
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双相障碍I型患者治疗前后微小RNA206基因表达水平变化及与对照的比较
背景 微小RNA206( MicroRNA-206,miRNA-206)可能是双相障碍的生物学标志之一,有待深入探究.目的 评估双相障碍躁狂发作期外周血miRNA-206水平与患者临床状态的关系.方法 采用美国精神障碍诊断与统计手册第4版轴I障碍定式临床检查,符合双相障碍I型躁狂发作期的新入院患者36例和年龄、性别匹配的健康对照者30名纳入研究.健康对照者入组时,双相障碍患者在基线、治疗后第2、4、8周末外周血淋巴细胞miRNA-206水平被检测.在检测miRNA-206水平相同时间点,采用杨氏躁狂量表(YoungMania Rating Scale,YMRS)评估双相障碍患者躁狂症状严重程度.结果 在基线(Z=-0.02,P=0.988)和治疗后第2周末(Z=-0.17,P=0.864)、第4周末(Z=-0.86,P=0.392)、第8周末(Z=-1.29,P=0.197),双相障碍患者与健康对照者之间外周血miRNA-206水平差异无统计学意义.对于双相障碍患者,在4个时间点miRNA-206水平与躁狂症状严重程度之间也无统计学明显相关(统计值依次为:rs=0.13,P =0.518;rs =0.12,P =0.532;rs=-0.18,P=0.361;rs =0.02,P =0.912).结论 外周血淋巴细胞miRNA-206水平可能不是双相障碍I型或躁狂发作期治疗效果的生物学标志.由于本研究检测患者与对照者之间差异的统计效能仅22％,今后需要大样本研究(可能应用不同技术检测miRNA-206水平)进一步验证.
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发作期哮喘患儿外周血单个核细胞中 miR-206表达变化及意义
目的 探讨发作期哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA-206(miR-206)的表达变化及意义.方法 选取发作期哮喘患儿43例,根据病情分为轻度组18例、重度组25例;同期选取30例健康儿童作对照.抽取各组外周静脉血并分离PBMCs.用qRT-PCR法检测PBMCs中miR-206、白细胞介素17(IL-17)mRNA表达.Pearson相关分析发作期患儿PBMCs中miR-206、IL-17 mRNA表达的相关性.Spearman秩相关分析哮喘急性发作严重度与PBMCs中miR-206、IL-17 mRNA表达的关系.结果 与健康儿童比较,哮喘患儿发作期PBMCs中miR-206相对表达量低、IL-17 mRNA相对表达量高(t分别为26.781、16.102,P均<0.05),而缓解期PBMCs中miR-206、IL-17 mRNA相对表达量与健康儿童比较差异无统计学意义(t分别为0.222、1.826,P均>0.05).哮喘患儿发作期PBMCs中miR-206、IL-17 mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.960,P<0.05).哮喘患儿病情严重程度与miR-206表达呈负相关(rs=-0.592,P<0.05),与IL-17 mRNA表达呈正相关(rs=0.601,P<0.05).结论 发作期哮喘患儿PBMCs中miR-206低表达,miR-206表达变化可反映哮喘患儿的病情发展.
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miR-206对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制
目的：观察微小 RNA-206（miR-206）对β-甘油磷酸钠（β-GP）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响，并探讨其机制。方法取原代培养大鼠主动脉 VSMCs 并进行细胞鉴定。将 VSMCs 随机分为5组：空白对照组、模拟物阴性对照组、miR-206模拟物组、抑制物阴性对照组、miR-206抑制物组，用相应引物进行转染。转染后48 h，各组给予β-GP 10 mmol／L 诱导 VSMCs 钙化。诱导4 d，茜素红染色镜下观察各组钙化情况，采用微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性，采用免疫荧光法检测细胞缝隙连接蛋白43（Cx-43）表达。结果VSMCs 转染后48 h，经β-GP 诱导4 d，与阴性对照组比较，miR-206模拟物组钙化结节减少，miR-206抑制物组钙化结节增多；与阴性对照组比较，miR-206模拟物组 ALP 活性及 Cx43表达降低（P 均＜0．05），miR-206抑制物组 ALP 活性及Cx43表达升高（P 均＜0．05）。结论miR-206可能通过调控 Cx43表达抑制β-GP 诱导的大鼠 VSMCs 钙化。
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微小RNA-206过表达慢病毒载体构建及其对MCF-7乳腺癌细胞生物学特性的影响
目的 构建微小RNA-206(miR-206)的慢病毒载体转染MCF-7细胞,观察转染效率和细胞生物学特性的改变.方法 针对miR-206有效的靶序列设计合成寡链DNA,经过退火、连接、聚合酶链反应(PCR)筛选、测序鉴定、慢病毒包装、共转染等步骤获得慢病毒LV-hsa-miR-206,将其转染MCF-7细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-206表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 PCR扩增出插入片段,目的基因的测序结果与GeneBank序列一致.感染慢病毒后,MCF-7的miR-206表达由1.000增加至120.331±1.801;细胞增殖能力显著降低,在转染后第2天由1.420±0.052降低为1.275±0.147,第3天由1.762±0.089降低为1.387±0.093,第4天由2.045±0.235降低为1.269±0.103,凋亡细胞和G2期细胞比例显著增加.结论 成功构建LV-hsa-miR-206慢病毒载体,并在MCF-7细胞中成功表达,miR-206表达水平增加导致细胞的生物学特性发生明显变化.
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微小RNA-206及其靶基因间隙连接蛋白43基因在激素性股骨头坏死中的作用
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-206及其靶基因间隙连接蛋白43基因(GJA1)调控的间隙连接蛋白43(Cx43)在激素性股骨头坏死中的表达变化.方法 收集激素性股骨头坏死与股骨颈骨折行全髋置换手术患者的股骨头标本46例,其中激素性股骨头缺血性坏死(实验组)26例;新鲜股骨颈骨折(对照组)20例.苏木素-伊红(HE)染色观察两组股骨头组织形态变化,免疫组织化学检测Cx43蛋白在股骨头的表达,提取患者股骨头总RNA和蛋白质,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组股骨头miR-206及Cx43 mRNA的表达,Western blot定量检测股骨头Cx43蛋白的表达.结果 HE染色结果:实验组:骨小梁坏死,成骨细胞、骨细胞核消失,骨髓造血及微循环障碍;对照组:骨小梁内有少量坏死骨细胞,骨髓腔造血细胞增生活跃.免疫组织化学检测结果:Cx43蛋白阳性表达于成骨细胞、骨细胞及骨髓腔间质内.FQ-PCR:miR-206在实验组的表达量较对照组增加4.3倍,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05),Cx43 mRNA在实验组的表达较对照组下降44％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示:Cx43蛋白的相对表达量在实验组(0.236 ±0.017)低于对照组(0.496±0.022),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-206在激素性股骨头坏死组织中表达上调,Cx43蛋白表达下调,miR-206可能通过调控其靶基因CA J1目的蛋白的表达参与激素性骨头坏死的发生与发展.
