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Flavopiridol通过调节CDK4/CDK6/cyclinD1复合物表达抑制肝癌细胞增殖
目的 研究flavopiridol对肝癌细胞Huh7增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 Flavopiridol处理Huh7细胞后,检测细胞增殖和凋亡,进行细胞周期分析.Western blot检测flavopiridol对CDK4/CDK6/cyclinDl复合物表达的影响.结果 Flavopiridol可显著抑制Huh7细胞增殖;Flavopiridol 可剂量依赖性导致Huh7细胞发生凋亡,空白对照组凋亡细胞2.65％,550nmol/L剂量处理组凋亡细胞14.17％; Flavopiridol可剂量依赖性引起Huh7细胞G1期阻滞,空白对照组G1期细胞51.06％,550nmol/L剂量处理组G1期细胞57.53％；Flavopiridol可抑制Huh7细胞G1期相关的蛋白细胞周期素依赖激酶(CDK)4,CDK6,细胞周期素D1(cyclinD1)的表达.结论 Flavopiridol通过抑制肝癌细胞G1期CDK4/CDK6/cyclinD1蛋气复合物表达,引起细胞G1期阻滞并发生凋亡,从而抑制细胞增殖.
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flavopiridol对前列腺癌细胞LNCaP增殖、侵袭及凋亡的影响
目的 研究细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对人前列腺癌细胞LNCaP增殖、侵袭及凋亡的影响,探讨其在前列腺癌治疗中的潜在价值.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度flavopiridol对LNCaP细胞增殖的影响,Transwell小室实验观察细胞体外侵袭能力的改变,流式细胞术检测flavopiridol对细胞凋亡的影响.结果 flavopiridol对LNCaP细胞增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性,并减弱LNCaP细胞的侵袭能力(P＜0.05).10 ng/Lflavopiridol作用48 h后,细胞凋亡率为(7.5±0.9)％,较对照组的(5.3±0.5)％显著升高(P＜0.05).结论 flavopiridol能抑制前列腺癌细胞LNCaP增殖,降低其侵袭能力,并诱导其凋亡,具有一定的临床应用前景.
关键词： 前列腺肿瘤 flavopiridol 增殖 凋亡 侵袭 -
Flavopiridol对胃肠道间质瘤细胞GIST882增殖、侵袭、凋亡及细胞周期的影响
目的:研究Flavopiridol对胃肠道间质瘤细胞GIST882增殖、侵袭、凋亡及细胞周期的影响.方法:体外培养GIST882细胞至指数增长期,采用不同浓度的Flavopiridol对其进行干预,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测凋亡及周期比例,western-blot检测CDK1,CDK2及caspase3蛋白的表达.结果:Flavopiridol呈浓度和时间依赖性抑制GIST882细胞增殖;Flavopiridol作用后GIST882细胞穿膜数量减少,侵袭能力降低,细胞凋亡率及G0/G1期比例增加,CDK1及CDK2蛋白的表达逐渐降低,caspase-3蛋白的表达逐渐增高.结论:Flavopiridol可抑制GIST882细胞增殖、降低侵袭力、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能成为胃肠道间质瘤新的治疗途径.
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套细胞淋巴瘤靶向治疗进展
套细胞淋巴瘤(mantle cell Iymphoma,MCL)是一种较为特殊类型的淋巴瘤.多数患者确诊时已经处于临床晚期.治疗上MCL是一种顽固的、难以治愈的疾病.常规化疗疗效较差,因此目前关于套细胞淋巴瘤的免疫靶向和其他靶向治疗的研究较多,如针对细胞表面CD20抗原的利妥昔单抗能够提高缓解率,而其他靶向药物,如蛋白酶体抑制剂硼替佐米、细胞周期依赖激酶抑制剂flavopiridol、针对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR,mammaliantarget of rapamycin)的信号转导抑制剂temsirolimus(GCI-779)等均有不同程度的研究进展.下面分别予以介绍.
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细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol对骨肉瘤耐药细胞MG63/ADR增殖抑制的体内外实验研究
目的 探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂(flavopiridol)在-体内外抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR增殖的作用及其机制.方法 四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率.流式细胞计数法测量flavopiridol给药后MG63/ADR细胞周期的变化及凋亡率.免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中pro-caspase-9、pro-caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bcl-xL、p53、Bax及活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达.采用MG63/ADR建立荷瘤裸鼠模型,FP腹腔内给药,测量肿瘤体积及裸鼠体质量变化,计算肿瘤抑制率.结果 Flavopiridol可抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度依赖性.Flavopiridol给药后,耐药细胞株MG63/ADR的细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).Flavopiridol给药后,耐药细胞姝中的pro-caspase-9、pro-caspase-3、Bcl-2以及Bcl-xL的表达下降,活化型caspase-8、PARP-85的表达增加.Flavopiridol可有效抑制荷瘤小鼠体内耐药骨细胞的生长.结论 细胞周期蛋白激酶抑制可在体外及体内有效抑制骨肉瘤耐药细胞株的增殖,其机制可能与死亡受体介导的caspase信号传导途径及非p53介导的线粒体凋亡信号传导途径相关.
关键词： flavopiridol 细胞周期 骨肉瘤 凋亡 Caspase -
Flavopiridol对大鼠局灶性脑缺血后神经元cyclin D1蛋白表达的影响
目的 观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达与神经细胞凋亡的关系以及Flavopiridol对其的影响.方法 采用线栓法大鼠大脑中动脉持续栓塞模型,应用免疫组化和TUNEL染色方法 观察缺血组、Flavopiridol治疗组(分高剂量FH组和低剂量FL组)和假手术组神经元阳性细胞染色数量及分布情况.结果 cyclin D1蛋白和凋亡细胞分别自缺血后6h和12h开始表达,前者缺血后48h达高峰;后者缺血后72h达高峰,FH组和FL组各相应时间点cyclin D1蛋白表达均明显减少(P<0.01);FL组各相应时间点凋亡细胞明显减少(P<0.01),FH组仅在缺血48h凋亡细胞明显减少.相邻切片可见cyclin D1蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同.结论 cyclin D1的蛋白表达可能诱发缺血神经细胞的凋亡,Flavopiridol通过抑制cyclin D1的表达而减少缺血后神经细胞的损害,但同时Flavopiridol本身也可能引起神经细胞凋亡.
关键词： 脑缺血 细胞周期蛋白D1 凋亡 flavopiridol -
抑制Livin基因对肺腺癌SPC-A1细胞增殖及顺铂敏感性的影响
目的:Livin是近年来发现的人类凋亡抑制蛋白(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族的新成员,发现在多数肿瘤中表达,与肿瘤发生有密切关系,并可能作为肿瘤诱导凋亡治疗的新靶点.本研究旨在探讨siRNA-Livin和夫拉平度(Flavopiridol,FP)协同凋亡诱导配体(TRAIL)两种方式有效抑制Livin表达,诱导非小细胞肺癌SPC-A1凋亡并增强对化疗药物顺铂的敏感性.方法:siRNA-Livin转染SPC-Al,Real-Time PCR检测Livin基因的表达水平,MTT检测干扰组和干扰加药组肿瘤细胞的增殖及活性;TRAIL、FP单独及联合作用诱导细胞凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡抑制蛋白Livin的表达水平,MTT检测各处理组细胞的增殖及活性.结果:100 nmol/LFP处理组(F)细胞存活率为(84.30± 1.34)％,100 ng/mLTRAIL处理组(T)为(93.40± 1.56)％,FP和TRAIL联合组(F+T)为(48.02± 1.35)％,siRNA-Livin处理组为(50.88± 1.14)％,1.2 μg/mL Cisplatin处理组为(19.30±0.89)％,siRNA-livin+Cisplatin组为(14.37±0.81)％,FP+T+Cisplatin组为(10.86±0.87)％,C组存活率为100％.F+T组对细胞的增殖抑制作用显著高于单独用药组,siRNA-livin+Cisplatin与siRNA-Livin组相比、FP+T+Cisplatin与FP+T组相比都显著增强了化疗药物对SPC-A1的杀伤作用.50 μmol/LZ-VAD-FMK预处理后联合用药组细胞的存活率为(88.16± 1.64)％,caspase抑制剂能明显抑制F+T联合处理组的凋亡效应.结论:RNA干扰和F+T联合用药都能显著降低凋亡抑制蛋白Livin的表达,有效抑制肿瘤细胞的增殖生长,并增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,为肺腺癌的靶向治疗提供新的理论依据.
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂
目的系统介绍细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂的抗肿瘤作用.方法对近几年国外有关CDK抑制剂的发现、构效研究及临床试验等文献进行检索和综述.结果 olomoucine, roscovitine等三取代嘌呤类化合物, flavopiridol及butyrolactone三类化合物具有明显的CDK抑制活性,对多种人类肿瘤均有疗效,且不良反应小.结论细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂有望成为新一代抗肿瘤药.
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Flavopiridol 联合顺铂对人 U2-OS 细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨 Flavopiridol（FP）联合顺铂（DDP）对人骨肉瘤细胞株（U2-OS）的增殖及凋亡的作用。方法将不同浓度的 FP（0、50、100、200、400、1000 nmol·L－1）分别与人 U2-OS 细胞共同培养24、48 h 后，采用 MTT 法检测 U2-OS 细胞增殖，以确定 FP 作用48 h 的半数抑制浓度（IC50）；采用 Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变；采用流式细胞术测定 U2-OS 细胞凋亡率。然后将培养后的 U2-OS 细胞分为4组：空白对照组、单用 FP组、单用 DDP 组、联合用药组（FP＋DDP 组），每组设5个复孔，分别加入0．1％DMSO、FP（IC50）、DDP、FP（IC50）＋DDP 处理，采用 MTT 法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果FP 对人 U2-OS 细胞的增殖抑制作用呈现浓度依赖性，作用48 h 的 IC50值为340 nmol·L－1，Hoechst33258染色后细胞出现明显的核固缩、核浓聚等凋亡改变，随着 FP 浓度的增加，流式细胞术检测细胞凋亡率升高。FP＋DDP 联合作用于人 U2-OS 细胞，随着时间的增加抑制率逐渐增大（P ＜0．05）；与 FP 和 DDP 单独用药组比较，抑制率、凋亡率及周期阻滞差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论FP 可明显抑制人 U2-OS 细胞增殖并诱导凋亡，联合顺铂对人 U2-OS 细胞的增殖抑制及凋亡促进具有协同作用。
关键词： flavopiridol 顺铂 人 U2-OS 细胞 增殖 凋亡 协同作用 -
Flavopiridol对C型Niemann-Pick病小鼠的神经保护作用
目的:观察CDK4特异性抑制剂Flavopiridol对突变型C型Niemann-Pick病(npc-/-)小鼠的治疗作用.方法:采用20、40、60和80 nmol/d的Flavopiridol 对4周龄的npc小鼠(4只)进行2周侧脑室注射,以DMSO灌注的同龄npc小鼠(4只)为对照组.采用免疫组织化学染色、免疫印记、HE染色和小鼠衣架悬挂试验来进行研究.结果:80 nmol/d flavopiridol 可以显著减少磷酸化神经丝蛋白SMI31在npc小鼠脑部的表达和病理性球状神经轴突数量,并在一定程度上改善了小鼠的运动功能. 结论:CDK抑制剂对NPC的神经元细胞骨架损伤和变性有一定保护作用.
