载Rapamycin多聚物涂层支架在猪冠状动脉模型预防再狭窄的实验研究

目的评价载Rapamycin(RAP)新型可降解多聚物涂层支架在小型猪冠状动脉模型的可行性、安全性和预防再狭窄的疗效.方法体外模拟测定从药物从膜释放的持续时间.支架多聚乳酸/多聚羟基乙酸(PLGA)涂层包埋RAP药物剂量为400 μg(小剂量)或800 μg(大剂量).小型猪冠状动脉置入过大的裸支架、单PLGA涂层支架或含RAP涂层支架并形成冠状动脉损伤模型,术后第5周重复定量冠状动脉造影术(QCA)后处死动物,测定三组支架血管段的损伤积分、冠状动脉横断面积、管腔面积、内膜厚度和面积,并作比较.同时观察支架边缘段5mm内血管组织.结果药物从涂层膜释放时间达30 d.三组分别为裸支架组(置入支架数n=5),单涂层组(n=7)和RAP组(n=8,其中小剂量为3只,大剂量组为5只).三组冠状动脉大小和血管损伤程度基本相同,裸支架组、单涂层组和RAP组的血管平均损伤积分分别为1.84±0.32, 1.83±0.35和1.83±0.26 (P=0.996).术后5周,三组的管腔面积分别为 (6.7±1.5)mm2,(5.8±4.0)mm2和(9.7±2.1)mm2(P<0.05), RAP组大.平均内膜厚度分别为(0.51±0.12)mm,(0.64±0.46)mm和(0.20±0.11)mm(P<0.05),RAP组小.三组均未见支架边缘狭窄和血栓形成.RAP小剂量和大剂量两亚组的平均内膜厚度分别为(0.21±0.13)mm和(0.20±0.10)mm (P=0.99).结论载RAP新型多聚物涂层支架在小型猪冠状动脉模型的置入是可行和安全的,至少在5周的随访期内抑制内膜增生、预防再狭窄疗效明显.

Rapamycin, similar to FK506, can promote neural regeneration in vitro. We assumed that the mechanisms of action of rapamycin and FK506 in promoting peripheral nerve regeneration were similar. This study compared the effects of different concentrations of rapamycin and FK506 on Sc hwann cells and investigated effects and mechanisms of rapamycin on improving peripheral nerve regeneration. Results demonstrated that the lowest rapamycin concentration (1.53 nmol/L) more signiifcantly promoted Schwann cell migration than the highest FK506 concentration (100μmol/L). Rapamycin promoted the secretion of nerve growth factors and upregulated growth-associated protein 43 expression in Schwann cells, but did not signiifcantly affect Schwann cell proliferation. Therefore, rapamycin has potential application in peripheral nerve regeneration therapy.

Neurodegenerative disorders affect more than 30 million individuals throughout the world and lead to signiifcant disability as well as death. These statistics will increase almost exponentially as the lifespan and age of individuals increase globally and individuals become more susceptible to acute disorders such as stroke as well as chronic diseases that involve cognitive loss, Alzheimer’s disease, and Parkinson’s disease. Current therapies for such disorders are effective only for a small subset of individuals or provide symptomatic relief but do not alter disease progression. One exciting therapeutic approach that may turn the tide for addressing neurodegenerative disorders involves the mammalian target of rapamycin (mTOR). mTOR is a component of the protein complexes mTOR Complex 1 (mTORC1) and mTOR Complex 2 (mTORC2) that are ubiquitous throughout the body and control multiple functions such as gene transcription, metabolism, cell survival, and cell senescence. mTOR through its relationship with phosphoinositide 3-kinas e (PI 3-K) and protein kinase B (Akt) and multiple downstream signaling pathways such as p70 ribosomal S6 kinase (p70S6K) and proline rich Akt substrate 40 kDa (PRAS40) promotes neuro-nal cell regeneration through stem cell renewal and oversees critical pathways such as apoptosis, autophagy, and necroptosis to foster protection against neurodegenerative disorders. Targeting by mTOR of speciifc pathways that drive long-term potentiation, synaptic plasticity, andβ-amyl oid toxicity may offer new strategies for disorders such as stroke and Alzheimer’s disease. Overall, mTOR is an essential neuroprotective pathway but must be carefully targeted to maximize clini-cal efifcacy and eliminate any clinical toxic side effects.

雷帕霉素靶蛋白信号通路及其临床意义的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种非典型高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其特异性抑制剂为雷帕霉素,当雷帕霉素与之结合后可抑制其激酶活性.mTOR对生长因子、营养物质、机体能量状态等刺激产生应答,调节细胞生长、增殖、代谢、调控细胞周期等,因此与许多疾病相关.以下本文就mTOR信号通路及其对心血管疾病、炎症、肿瘤、代谢性疾病和神经性疾病的意义进行综述.1.mTOR信号通路:TOR有两种结构和功能上不尽相同的复合物:TOR复合物1(TORC1)和2(TORC2)[1].短期应用雷帕霉素治疗,仅能抑制TORC1,如果延长用药时间则能对TORC2产生间接抑制作用.

套细胞淋巴瘤靶向治疗进展

套细胞淋巴瘤(mantle cell Iymphoma,MCL)是一种较为特殊类型的淋巴瘤.多数患者确诊时已经处于临床晚期.治疗上MCL是一种顽固的、难以治愈的疾病.常规化疗疗效较差,因此目前关于套细胞淋巴瘤的免疫靶向和其他靶向治疗的研究较多,如针对细胞表面CD20抗原的利妥昔单抗能够提高缓解率,而其他靶向药物,如蛋白酶体抑制剂硼替佐米、细胞周期依赖激酶抑制剂flavopiridol、针对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR,mammaliantarget of rapamycin)的信号转导抑制剂temsirolimus(GCI-779)等均有不同程度的研究进展.下面分别予以介绍.

mTOR的反馈激活机制及其抑制剂的抗肿瘤应用

mTOR是处于调节细胞代谢、生长、增殖等整个过程中心环节的重要激酶.干扰或抑制mTOR会引起细胞尤其是癌细胞的生长停滞继而死亡.因而也被公认为是癌症治疗当中的一个潜在靶标.一系列的mTOR抑制剂Rapamycin及类似物已经形成并在临床抗肿瘤中有所应用,但其展示的效应非常有限.随着研究的深入,发现mTOR信号通路存在反馈激活机制:即抑制mTOR能反馈性激活多个与细胞生长增殖相关的信号通路.并且认为是这些反馈激活机制削弱了mTOR抑制荆的效能.也是其临床效应未达预期的原因.本文就目前国内外研究较深入的mTOR-AKT,mTOR-ERK,mTOR-elF4E反馈信号通路做详细概述.并阐述目前采取的防止这一反馈机制形成的Rapamycin类似物与特定通路抑制剂的联合用药策略,使mTOR抑制剂在临床抗肿瘤中能充分发挥其效能.

RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡

目的:探讨PI3K/AKT/mTOR和JAK/STAT3 2条信号转导途径共同作用对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌基因治疗提供依据.方法:选取对数生长期BEL 7402细胞,随机分为对照组、mTOR抑制剂rapamycin(Rapa)组、阴性质粒组、阴性质粒+Rapa组、STAT3-siRNA质粒组和STAT3-siRNA质粒+Rapa组,应用LipofectamineTM2000转染试剂将含有目的基因的质粒转染BEL-7402细胞,同时应用rapamycin,分别采用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测缅胞凋亡率和形态学的变化,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位(△Ψm)变化,Western blotting法检测活性caspase-3蛋白表达水平.结果:STAT3-siRNA+Rapa组细胞凋亡率为60.22％±0.87％,明显高于其他各组(P＜0.05),且细胞△Ψm明显降低(27.28％±1.82％,P＜0.05);Hoechst33258荧光染色检测,见STAT3-siRNA有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化和核碎裂等典型细胞凋亡形态;Western blotting检测,STAT3-siRNA+ Rapa组活性caspase-3蛋白表达水平明显高于其他各组(P＜0.05).结论:RNAi沉默BEL-7402肝癌细胞STAT3基因联合rapamycin可促进BEL-7402肝癌细胞的凋亡,二者具有明显的协同作用.

PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂对白血病细胞株增殖及其PHLPP表达的影响

目的:观察PI3K/Akt/mTOR通路抑制剂wortmannin或rapamycin对白血病细胞株增殖及其PHLPP( PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase)蛋白表达的影响.方法:以不同浓度的wortmannin或rapamycin分别作用于人类髓细胞白血病细胞系K562、HL-60,采用WST-1法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测细胞中p-Akt、Akt、PHLPP蛋白的表达.结果:Wortmannin以时间以及剂量依赖方式抑制K562、HL-60细胞的增殖(P＜0.05),48 h的IC50值分别为(187.6 ±48.4)、(185.5±48.1)nmol/L.100 nmol/L wortmannin作用于K562细胞、50nmol/L wortmannin作用于HL-60细胞12和24h后,细胞凋亡率均较对照细胞显著升高[(12.4±0.7)％、(17.6±2.3)％vs(5.0±0.6)％,P＜0.05；(11.0±0.2)％、(17.9±1.6)％ vs (6.8±0.4)％,p＜0.05].Wortmannin分别作用于K562、HL-60细胞12、24、36 h后,p-Akt、PHLPP的蛋白表达水平明显降低；rapamycin同样可使K562、HL-60细胞中PHLPP蛋白的表达水平降低.结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂抑制白血病细胞株增殖的同时降低其PHLPP蛋白的表达.

自噬在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中作用的实验研究

目的：探讨大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）模型中，应用激动剂rapamycin（RAP）增强自噬后观察SAH后早期大鼠神经功能评分、脑水肿和血-脑屏障（BBB）通透性的变化，以及应用抑制剂3-Methyladenine（3-MA）减弱自噬后上述指标的变化。探讨自噬在SAH后早期脑损伤（ EBI ）中可能的作用。方法雄性SD大鼠60只，随机分为对照组、SAH组、SAH＋vehicle组、SAH＋RAP组和SAH＋3-MA组5组，每组12只，于24 h时间点处死动物后取颞底脑皮层，利用western blot法测定自噬标志物LC3和Beclin-1的表达变化，分别观察各组大鼠神经功能评分的变化，并测定各组大鼠脑水肿和BBB通透性的变化。结果 SAH后脑皮层中LC3和Beclin-1表达较对照组明显增加（均P＜0．01），同时伴有明显的脑水肿（P＜0．01）及BBB通透性破坏（P＜0．01）；与SAH＋vehicle组相比SAH＋RAP组LC3和Beclin-1的表达明显增加（均P＜0．05），脑水肿指数下降（P＜0．01）， BBB通透性好转（P＜0．01），同时大鼠的神经功能评分明显好转（P＜0．01）。而SAH＋3-MA组与SAH＋vehicle组相比，LC3和Beclin-1的表达明显下降（均P＜0．01），大鼠神经功能评分变差（P＜0．05）。结论应用RAP干预自噬后，LC3和Beclin-1的表达明显增高，自噬明显增强，同时大鼠神经功能评分明显好转，脑水肿指数明显下降，BBB通透性明显好转。自噬增强后能减轻SAH后的EBI；3-MA的应用可使EBI加重。

Rapamycin联合供体脾细胞对大鼠移植心脏生存时间的影响

目的 观察术中静脉应用Rapamycin及供体脾细胞对移植心脏生存时间的影响.方法 建立大鼠异位心脏移植模型,术中静脉应用Rapamycin及供体脾细胞.术后通过腹壁触诊判断移植心脏存活情况.结果 Rapamycin组移植心脏的生存时间为(12.3±3.9)d,与未用药组(8.5±2.4)d相比差异有统计学意义(P=0.018<0.05).Rapamycin+供体脾细胞组移植心脏生存时间是(12.4±3.7)d,与单独应用Rapamycin组相比差异无统计学意义(P=0.948>0.05),但比单独用脾细胞组[(8.40±3.5d,P=0.013<0.05)]和未用药组有明显延长(P=0.015<0.05).结论 Rapamycin及联合应用供体脾细胞均可以延长移植心脏生存时间.

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路增强紫杉醇对子宫内膜癌细胞化疗敏感性

目的 观察紫杉醇联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG - 14260和阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对子宫内膜癌细胞株Ishikawa的影响.方法 紫杉醇、RG -14260、Rapamycin单独和联合处理Ishikawa细胞后,MTT法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Transwell法检测细胞体外侵袭力.结果 紫杉醇、RG -14260与Rapamycin均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低细胞侵袭力,三者联合应用呈协同效应(P＜0.01).结论 紫杉醇联合RG-14260及Rapamycin靶向治疗剂能协同性地抑制子宫内膜癌细胞生长、降低其侵袭力,这种作用可能是通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现的.

大鼠肾脏组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白增龄性的表达变化

肾脏是衰老较快的器官之一,随年龄的增长出现肾小球肥大、系膜增生、肾小球硬化和肾小管-间质纤维化等病理变化.但这一现象的分子机制并不完全清楚.研究发现,雷帕霉素可显著抑制糖尿病肾病早期及单侧肾切除后代偿性的.肾小球肥大[1,2],并且它还能减轻蛋白尿相关的肾小管-间质的炎性反应及纤维化[3].

雷帕霉素在慢性肾脏病治疗中的应用研究

雷帕霉素( rapamycin),又名西罗莫司,初是由复活岛土壤菌落中分离出来的一种抗真菌药物.此后相继发现了雷帕霉素特异性抑制蛋白——哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其下游的磷酸化核糖体S6蛋白激酶( pS6K)[1].雷帕霉素与其细胞内受体FK506 -结合蛋白(FKBP-12)结合后形成mTOR蛋白抑制复合物,从而发挥特异性抑制mTOR信号通路的生物学作用[2].

CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增

[目的]探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法.[方法]收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg.将实验分为3组,第1组在CD4+CD25+Treg中加入100 nmol/L rapamyein (1μg/mL)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周,第8天开始加入1 000 U/mL的IL-2,第2组培养条件除不加rapamycin外其余与第1组相同,第3组培养细胞为CD4+CD25-T细胞,培养条件同第1组.培养第7、14、21天收集细胞计数,第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达.MTr法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD40+T细胞增殖的抑制作用.[结果]三组细胞均有明显的扩增.加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低,但细胞的纯度明显增加.CD4+CD25-T细胞组在培养第1周扩增迅速,从第2周开始增殖减慢,其中CD4+CD25+Treg细胞的比例较培养前无明显的差别.三组至第3周时扩增倍数分别为89±21、338±78、216±55(F=484.655.P<0.0001).细胞的纯度分别为84.32%±4.62%、34.04%±5.78%、0.68%±0.39%(F=24.660,P<0.0001).体外抑制实验显示体外扩增的CD4+C在CD25+T细胞对自体和异体的CD40+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低.在CD4+T/Treg比例为8:1、4:1、2:1、1:1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%,对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%.而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之开间均尤明显的差异.[结论]我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg,其扩增的倍数为89.4 ±20.53,具有免疫抑制功能,有望进一步应用于临床.

LKB1-AMPK-mTOR信号传导通路在肿瘤中的研究进展

肿瘤可以认为是一种基因疾病,其中癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生、发展过程中为关键的环节之一[1].近年来,一个新的抑癌基因LKB1,又名STK11(serine threonine protein kinase 11),在肿瘤中的作用引起了越来越多的关注.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是目前肿瘤信号传导通路研究的热点之一.

抑制IL -6/STAT3信号通路对脓毒症大鼠肝损伤的影响

脓毒症及其导致的MODS仍然是临床医学的棘手问题.研究表明,多种信号通路参与了全身炎症反应和组织损伤的病理过程.信号转导和转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)作为脓毒症时细胞内的主要信号转导系统之一,与脓毒症主要炎症介质IL -6的释放密切相关[1,2],在脓毒症的急性组织损害中发挥着重要作用.但是,抑制IL - 6/STAT3信号通路是否影响脓毒症时的全身炎症反应或组织损害,目前仍不清楚.笔者采用盲肠结扎穿孔( cecal ligation and puncture,CLP)制作脓毒症大鼠模型,选用STAT3抑制剂西罗莫司(Rapamycin,RPM)阻断该信号通路,观察其对脓毒症大鼠肝损伤的影响.