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温肾健脾法对代谢综合征大鼠LKB1/AMPK信号通路的影响及机制
目的：通过检测代谢综合征大鼠肾周脂肪组织中LKB1、AMPK含量，探讨温肾健脾法对于代谢综合征（ MS）的治疗效果及作用机制。方法30只SD雄性大鼠随机分成空白对照组、模型组、温肾健脾方药组（药物组），采用高脂高糖饲料造MS大鼠模型，药物组给予0.78 g/100 g药物，持续12周，观察温肾健脾法对于大鼠体质量、空腹血糖、血清胰岛素、稳态模型评价胰岛素抵抗（ HOMA-IR）、肝激酶B1（LKB1）、腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）的影响。结果与空白对照组相比较，模型组大鼠体质量、空腹血糖、胰岛素和稳态模型评价胰岛素抵抗显著升高。与模型组比较，药物组大鼠体质量和稳态模型评价胰岛素抵抗显著降低。与模型组比较，空白对照组及药物组LKB1、AMPK值显著升高，差异有统计学意义（ P﹤0.01）；药物组LKB1、AMPK值虽低于空白对照组，但差异无统计学意义（ P﹥0.05）。结论温肾健脾方能明显改善MS大鼠模型的肥胖、胰岛素抵抗症状，有效提高MS大鼠体内p-LKB1及AMPK的含量，对恢复模型组大鼠的能量代谢平衡有很大作用。
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喉癌组织中LKB1与VEGF -C表达的相关性研究
目的:检测喉癌组织中抑癌基因LKB1和血管内皮生长因子VEGF-C的表达情况,探讨VEGF-C在喉鳞状细胞癌、正常组织中的表达关系.方法:选取喉癌患者40例喉癌组织为实验组,40例癌旁正常组织(距肿瘤边缘＞5mm,且病理证实为正常组织)为对照组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析两组之间LKB1mRNA和VEGF-CmRNA的表达情况.结果:LKB1在癌组织中阳性表达率低于癌旁组织(P＜0.05),VEGF-C在癌组织中阳性表达率高于癌旁组织(P＜0.05),均与组织分化程度有相关性(P＜0.05).LKB1与VEGF-C呈直线负相关.结论:在喉鳞状细胞癌发生的过程中,LKB1和VEGF -C发生异常表达,且与喉鳞状细胞癌的进展有关.
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LKB1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及相关分子实验
目的:探讨LKB1在胃癌发生中的作用及相关分子机制研究,为胃癌化疗药物的研发提供一定的理论基础.方法:利用LKB1过表达质粒以及LKB1 siRNA转染人胃癌细胞株SGC7901,实时荧光定量PCR及Western blot检测质粒以及siRNA转染效果,流式细胞术检测LKB1过表达以及干扰后的SGC7901细胞(血清饥饿处理2 h)凋亡数量.活性氧检测试剂盒检测LKB1对SGC7901细胞内ROS产生的影响.MTT法检测NAC抑制细胞内ROS产生后LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞数量的改变.Western blot检测LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞中凋亡相关蛋白的表达水平.结果:LKB1过表达质粒转染后的人胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡增加,胞内ROS产生增加,LKB1过表达后的SGC7901细胞凋亡则明显增多(3.54％ vs l.29％),转染LKBl siRNA的人胃癌细胞株SGC7901早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量占总数较转染scramble siRNA组明显减少(0.54％ vs l.39％).同时Western blot检测发现LKB 1过表达后的SGC7901细胞中剪切型Caspase3表达明显升高上升3.12倍,较对照组差异有统计学意义,而siRNA干扰后剪切型Caspase3表达则表现为相反的趋势,结论:LKB1通过促进ROS的产生,上调剪切型Caspase3介导的凋亡通路促进胃癌细胞凋亡,因此LKB1在胃癌发生发展过程中具有重要抑制作用,其可能作为胃癌化疗药物研发的重要目标分子.
关键词： LKB1 胃癌 SGC7901胃癌细胞系 细胞凋亡 -
LKB1-AMPK信号通路与胰岛素抵抗
腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)广泛存在于各种真核细胞中,被认为是真核生物的"细胞能量调节器",受AMP/ ATP 比值的调节.
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P53对丝氨酸-苏氨酸激酶11-磷酸腺苷激活的蛋白激酶信号传导途径的影响
丝氨酸-苏氨酸激酶11(serine/threonine kinase11,LKB1)的胚系突变可以引起Peutz-Jeghers综合征(PJS)[1].PJS是一种常染色体显性遗传性疾病,其肿瘤的发生率是普通人群的10～18倍[2].研究结果显示,散发性肿瘤中LKB1突变罕见,但在非小细胞肺癌(NSCLC)中,LKB1的突变率可达30%.
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LKB1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨LKB1 蛋白在胃癌组织中表达的临床意义,为胃癌的诊断及预后判断提供新指标.方法 采用免疫组化过氧化物酶标记链霉卵白素法(SP 法)检测胃癌组织中LKB1蛋白的表达水平,并与患者的年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移和远处转移、生存时间等临床病理因素进行相关性分析研究.结果 LKB1 蛋白在正常胃上皮组织、胃癌组织及转移淋巴组织中均有表达,3 组之间阳性表达率差异有统计学意义(P < 0.01).LKB1 蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度、浸润深度均无相关关系;而与淋巴结转移、远处转移及临床分期(TNM)相关(P < 0.05).LKB1 蛋白阴性组预后与阳性组比较差异有统计学意义(P < 0.05).结论 LKB1 基因蛋白表达下降与胃癌患者发生淋巴结转移和远处转移相关;测定胃癌组织中的LKB1 蛋白的表达,有助于判断患者的预后.
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肝激酶B1与肺癌发生发展关系的研究现状
目的:对肝激酶B1(LKB1)的结构、功能及其与肺癌相关性的研究进展进行概述.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“肝激酶B1和肺癌”为关键词,检索1998-2011年的相关文献.纳入标准:1)LKB1的结构和生物学功能；2)在肺癌细胞中LKB1基因的突变；3)LKB1与肺癌的发生和发展.根据纳入标准分析文献30篇.结果:LKB1,也称为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(STK11),在调节能量代谢、细胞生长和细胞极性等方面发挥重要作用.LKB1的胚系突变导致多发性息肉综合征(PJS).在多数散发的肿瘤中,LKB1体细胞突变罕见,但在非小细胞肺癌(NSCLC)中,LKB1突变率可高达20％～30％.近年来的研究结果表明,LKB1的缺失促进K-ras突变活化诱发的肺部肿瘤的发展和转移.LKB1与肺癌细胞的分化、上皮细胞间质化、肺癌细胞的侵袭和脱落凋亡等肿瘤转移过程中的重要事件相关.结论:LKB1抑制肺癌的发生和转移,为肺癌的分子靶向治疗提供了潜在的靶点.
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p53/LKB1双缺失子宫内膜癌小鼠模型建立与生物学鉴定
目的 近年来,子宫内膜癌发病率逐年上升,LKB1基因缺失是引发子宫内膜癌的一个重要原因.建立由p53loxploxpLKB1loxploxp双缺失致子宫内膜腺癌的小鼠模型,为研究子宫内膜肿瘤的发生发展提供动物模型.方法 选取6周龄p53和LKB1小鼠雌雄各2只.PCR鉴定拟诱导模型小鼠的基因型.显微镜下将Ad5-CMV-Cre(AdCre)腺病毒注射到p53loxploxpLKB1loxploxp基因型小鼠的一侧子宫内,诱导子宫内膜肿瘤形成.HE切片染色确定子宫肿瘤的类型.结果 成功获得基因型为p53loxploxpLKB1loxploxp的转基因小鼠.经PCR鉴定目的基因含有loxp位点.该小鼠子宫AdCre腺病毒注射后早第2周出现不典型增生,4周时约25％HE切片染色诊断为子宫内膜腺癌,而未注射侧子宫正常;12周左右出瘤率为100％,荷瘤生存时间≤34周.LKB1loxploxp与p53loxp LKB1loxploxp基因型小鼠注射侧子宫20周出瘤率约为33％,荷瘤生存时间平均为52周.结论 小鼠模型病理学示,腺体不规则,腺管排列拥挤、紊乱,异型性细胞增多,可见核分裂像,符合子宫内膜腺癌特征.通过显微注射AdCre腺病毒于小鼠子宫内,成功敲除p53及LKB1基因,建立子宫内膜腺癌转基因小鼠模型.该模型成瘤时间短,出瘤率高,其病理表现与人类子宫内膜腺癌类同,是研究子宫内膜癌发生发展的理想小鼠模型.
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LKB1基因沉默增强AICAR诱导大肠癌HCT116细胞凋亡的作用
目的 探讨肝激酶B1 (liver kinase B1,LKB1)表达被抑制的情况下,腺苷酸活化蛋白激酶(Adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)激活剂AICAR对大肠癌HCT116细胞诱导凋亡作用及相关机制.方法 采用慢病毒的方法构建LKB1敲除的HCT116-LKB1-shRNA细胞株及对照HCT116-PLKO.1细胞株.用不同浓度的AICAR作用于HCT116-PLKO.1及HCT116-LKB1-shRNA细胞,用SRB法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平及细胞周期改变,蛋白质印迹法检测pAMPK、P21、P53及caspase-3等蛋白的表达水平,比较两组细胞间的差异.结果 AMPK激活剂AICAR处理48小时后,随着AICAR浓度的升高,两组细胞的生长抑制率均逐渐升高,呈浓度依赖;而且HCT116-LKB1-shRNA细胞对AICAR的敏感性高于对照组.蛋白印迹法的结果发现,AICAR处理后两组细胞caspase-3均被激活,且HCT116-LKB 1-shRNA细胞组中的表达显著高于HCT116-PLKO.1组.细胞凋亡分析结果显示AICAR导致HCT116-LKB1-shRNA细胞的凋亡高于HCT116-PLKO.1组.细胞周期分析的结果显示,AICAR处理12小时后HCT116-PLKO.1细胞周期停滞于G0/G1期,而HCT116-LKB1-shRNA细胞周期未出现明显停滞.免疫印迹的结果提示HCT116-PLKO.1细胞中P21基因被激活,但HCT116-LKB1-shRNA细胞P21的表达并未升高.结论 LKB1基因的沉默增强了HCT116细胞对AICAR的敏感性.可能是AICAR在HCT116细胞中通过LKB1-AMPK通路激活P21,导致细胞周期停滞,避免肿瘤细胞凋亡.
关键词： LKB1 AICAR HCT116大肠癌细胞 细胞凋亡 -
肝激酶B1和p53在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨肝激酶B1(LKB1)和p53在胃癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测115例胃癌组织、20例胃正常组织中LKB1和p53的表达.结果 LKB1在胃癌组织中的阳性率为20.9％(24/115),低于正常胃组织中的95.0％(19/20)(P＜ 0.01);p53在胃癌组织中的阳性率为45.2 ％(52/115),高于正常胃组织中的5.00％(1/20)(P＜0.05).LKB1在胃癌组织中的表达程度与胃癌的TNM分期、淋巴结转移、Lauren分型及预后有关(均P＜0.05);p53在胃癌中的表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期及预后相关(P＜0.05).结论 LKB1的表达与胃癌的发生、发展有关,对胃癌恶性生物学行为的评估及预后判断具有重要的指导意义.
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转录因子Sp1对肺癌细胞LKB1-VEGF通路调控作用研究
目的:通过构建LKB1基因获得性肺癌细胞模型,了解转录因子Sp1对LKB1-血管内皮生长因子(VEGF)通路的调控作用.方法:应用巢式PCR(nPCR)方法扩增LKB1基因编码区,构建LKB1真核表达载体;Western 印迹检测LKB1在A549细胞中的表达;siRNA技术干扰Sp1的表达;RT-PCR联合ELISA方法检测VEGF的变化;SEAP检测系统检测Sp1的转录活性.结果:成功构建LKB1基因稳定表达细胞模型;LKB1蛋白下调VEGF表达和Sp1转录活性;siRNA介导的Sp1沉默伴随VEGF表达下调.结论:转录因子Sp1参与LKB1基因对VEGF的表达调控.
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急性低氧暴露对大鼠骨骼肌AMPK/TSC2/mTOR信号通路的影响
目的:观察急性低氧暴露复氧后骨骼肌丝/苏氨酸蛋白激酶(LKB1)、AMP/ATP、结节性硬化症复合体(TSC2)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号时程变化规律,探索低氧经该信号通路下调骨骼肌蛋白合成的作用机制.方法:8周龄雄性SD大鼠分为:常氧安静组、低氧暴露即刻组、复氧1h组、复氧2h组、复氧6h组和复氧12h组.低氧暴露10h(氧浓度13.6％).采用HPLC检测大鼠趾长伸肌AMP、ATP含量,Western Blot测LKB1、AMPK、TSC2、mTOR磷酸化水平.结果:低氧暴露后即刻,骨骼肌AMP含量、AMP/ATP比值,LKB1、AMPK和TSC2磷酸化水平显著升高(P＜0.01),同时mTOR磷酸化显著降低(P＜0.01),均于复氧后6h恢复.结论:(1)低氧可以通过AMP/ATP和LKB1激活AMPK.(2)低氧可经AMPK/TSC2/mTOR通路下调mTOR活性,从而抑制骨骼肌蛋白合成.
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胃癌组织中LKB1和VEGF-C的表达及其意义
目的 探讨LKB1和VEGF-C在胃癌中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化方法,检测LKB1和VEGF-C在人胃癌组织中的表达,同时对其与胃癌临床病理因素的关系进行统计学分析.结果 LKB1在胃癌组织中高表达率为27.1％,显著低于正常组织;VEGF-C在胃癌组织中高表达率为67.14％,显著高于正常组织;而且,LKB1表达与VEGF-C表达呈显著负相关(r =0.736,P=0.000).胃癌组织中LKB1和VEGF-C的表达水平与肿瘤的组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P＜0.05).结论 LKB1和VEGF-C有望成为胃癌分子诊断和病期评估的标志之一.
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LKB1在甲状腺乳头状癌中表达及意义
目的 探讨LKB1在甲状腺乳头状癌中的表达特点及其生物学意义.方法 甲状腺乳头状癌和正常甲状腺组织标本各25例,采用免疫组织化学、Western blot和real-time PCR检测比较LKB1蛋白表达及mRNA情况.结果 人甲状腺乳头状癌组织中LKB1蛋白表达显著低于正常甲状腺组织(P＜0.05),其mRNA明显下调(P＜0.01),LKB1表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移呈负相关(P＜0.01).结论 LKB1基因和蛋白表达水平在甲状腺乳头状癌组织中普遍下调并与其淋巴结转移呈负相关,提示LKB1在甲状腺乳头状癌的形成及淋巴结转移中起负向调节作用.
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LKB1调节细胞周期的主要分子机制
LKB1基因编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，该基因突变导致黑斑息肉综合征。在非小细胞肺癌中LKB1基因突变率可高达30％。作为抑癌基因，LKB1可以引起细胞周期阻滞在G1期，抑制细胞生长。LKB1主要以p53依赖的机制上调p21表达来对细胞周期进行调控。定位在细胞质中的LKB1可以引起细胞生长负调控的信号传递，而定位在细胞核中的LKB1可以直接参与转录调节。此外，也有研究表明LKB1以p53和p21非依赖的机制参与调节细胞周期。
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抑癌基因 LKB1在肺癌中的研究进展
肺癌已经成为目前癌症死亡的首要原因，近年来研究发现LKB1在非小细胞肺癌中LKB1体细胞突变率仅次于p53、 K－ras突变率，尤其在NSCLC中其突变率甚至高达15％～35％。 LKB1主要抑癌机制是可以引起细胞周期阻滞在G0／G1期，阻碍或延缓细胞DNA的合成，从而抑制细胞生长。研究者们发现LKB1的缺失突变在促进肺癌组织类型的分化和肺癌转移中扮演着相当重要的角色，因此动态检测LKB1是否异常可用于肺癌早期发生、发展及判断预后，并可能成为肺癌的恶性程度及预后因子。本文对近年来关于LKB1在肺癌领域中的研究进展作一综述。
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特异性下调LKB1的表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响
目的 研究特异性下调LKB1的表达对肝癌细胞系SK-hep-1迁移侵袭能力的影响.方法 Real-time PCR和Western B1ot检测人肝癌细胞株和人正常肝细胞HL7702中LKB1表达情况.设计并合成LKB1特异性双链小干扰RNA(LKB1-siRNA),转染到高表达LKB1的人肝癌细胞株SK-hep-1中靶向沉默LKB1基因表达,并设置阴性对照组(NC组).Real-time PCR和WesternBlot检测LKB1基因的mRNA水平与蛋白表达水平的变化.利用CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力.通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察LKB1表达沉默后对人肝癌细胞株SK-hep-1侵袭迁移能力的影响.计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与正常人肝细胞HL7702相比,LKB1基因和蛋白在人肝癌细胞SK-hep-1中高表达(P值均＜0.05).与NC组相比,siLKB1-1处理组SK-hep-1细胞中的LKB1基因和蛋白表达均明显降低(P值均＜0.05).与NC组相比,siLKB1-1转染的SK-hep-1细胞增殖速度明显加快、侵袭和迁移能力明显增强(1.393±0.022 vs 1.128±0.032、147±19 vs 83±21、113±13 vs 75 ±17;t值分别为15.313、14.879、8.791;P值均＜0.001).结论 LKB1有可能参与抑制肝癌增殖、侵袭迁移的过程并影响肝癌的预后.
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PTEN,LKB1基因缺失、突变检测对良恶性胸腔积液鉴别的意义
[目的]探讨检测PTEN,LKB1基因缺失、突变对鉴别良恶性胸腔积液的价值.[方法]提取漏出液组43例、良性胸腔积液组44例、恶性胸腔积液组47例患者胸腔积液中的DNA,采用PCR-SSCP法检测PTEN第5～8外显子、LKB1第1～9外显子缺失、突变情况.[结果]与漏出液组比较,良性胸腔积液组未发现PTEN,LKB1基因缺失或突变;恶性胸腔积液组PTEN基因总改变率为46.8％,LKB1基因总改变率为42.6％,联合检测PTEN,LKB1诊断恶性胸腔积液的灵敏度为78.7％,显著高于胸腔积液细胞学检查的53.2％ (P＜0.05).[结论]PCR-SSCP技术检测PTEN,LKB1基因缺失、突变可作为鉴别良恶性胸腔积液的辅助方法.
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LKB1基因多态性与2型糖尿病相关性研究
目的:探讨陕西汉族人群中LKB1基因位点rs741765 (380C＞T)及rs6510599(459G＞A)单核苷酸多态性(SNPs)与2型糖尿病遗传易感性及相关临床代谢指标的关系.方法:采用等位基因特异性引物PCR(SASP-PCR)对2型糖尿病患者130例及健康对照组100例进行LKB1基因内含子6 rs741765 (380C＞T)及内含子1 rs6510599(459G＞A)两个位点进行基因多态性筛查,并测序鉴定,分析其基因多态性位点与2型糖尿病临床代谢指标关系.结果:rs741765(380C＞T)基因突变情况:2型糖尿病患者TT基因型频率显著高于健康对照组(P=0.023);TT基因2型糖尿病组中糖化血红蛋白水平及低密度脂蛋白胆固醇水平在型中明显升高(P=0.030;P=0.002);健康对照组中,空腹血糖水平在TT基因型中明显升高(P=0.011).rs6510599(459G＞A)基因突变情况:AA基因型频率在2型糖尿病组及健康对照组间无显著性差异(P＞0.05);该基因位点与临床指标亦无相关性(P＞0.05).结论:陕西汉族人群中LKB1基因内含子6 rs741765(380C＞T)及内含子1 rs6510599(459G＞A)存在基因多态性.LKB1基因内含子6 rs741765(380C＞T)基因多态性与2型糖尿病的发病有相关性.LKB1基因内含子l rs6510599(459G＞A)基因多态性与2型糖尿病的发病无相关性.
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人喉癌组织中抑癌基因LKB1和血管内皮生长因子C的表达及意义
目的:研究人喉癌组织中抑癌基因LKB1与血管内皮生长因子C(Vascular Endothelial Growth Factor-C,VEGF-C)的表达并探讨其意义.方法:选取50例喉鳞状细胞癌患者喉癌组织及50例喉良性疾病喉组织,采取逆转录聚合酶链反应检测组织标本中LKBl mRNA与VEGF-C mRNA的表达情况,并比较不同Broder分级及临床分期等的表达差异.结果:喉癌组织中的LKB1mRNA阳性表达明显低于良性疾病喉组织,VEGF-C mRNA阳性表达明显高于良性疾病喉组织,差异具有统计学意义(P＜0.05)；Broder分级LKBl mRNA在Ⅰ级中阳性表达率高,Ⅲ级-Ⅳ级中阳性表达低,VEGF-C mRNA阳性表达在Ⅰ级中低,Ⅱ级-Ⅳ级中高,差异具有统计学意义(P＜0.05)；LKB1 mRNA在T1中阳性表达率高,T3-T4中阳性低,VEGF-C mRNA阳性表达在Tl中低,T3-T4中高,差异具有统计学意义(P＜0.05)；LKBl mRNA、VEGF-C mRNA阳性表达与年龄无关(P＞0.05)；喉癌组织中的LKBl mRNA、VEGF-C mRNA阳性表达Spearman相关性分析呈现直线负相关(r=0.648,P＜0.05).结论:喉鳞状细胞癌组织中抑癌基因LKB1、血管内皮生长因子VEGF-C的表达存在异常,并且与肿瘤的Broder分级、分期等病理情况有关,提示LKB1、VEGF-C可能在喉癌发生及发展中起到重要作用.
