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靶蛋白信号通路相关蛋白在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达
目的 观察磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷怕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白Akt和mTOR在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况.方法 选择SD大鼠72只,随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和PI3K抑制剂LY294002组(LY294002组),每组24只.每组又随机分为模型制备成功后1、2、4、8周4个时间点,每个时间点6只.采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型.免疫组织化学法检测Akt、mTOR蛋白的表达情况.结果 假手术组海马CA1区不同时间点可见少量Akt和mTOR蛋白阳性表达.与假手术组比较,模型组和LY294002组1、2、4、8周Akt、mTOR蛋白表达明显增高;与模型组比较,LY294002组1、2、4、8周Akt[(8.83±1.47)个/高倍视野vs(12.50±1.87)个/高倍视野,(12.83±2.32)个/高倍视野vs (20.67±4.23)个/高倍视野,(29.00±2.60)个/高倍视野vs (40.33±3.33)个/高倍视野,(24.33±4.32)个/高倍视野vs (35.00±4.15)个/高倍视野]、mTOR蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 Akt和mTOR蛋白在血管性痴呆大鼠海马CA1区过度表达,可能是血管性痴呆发生、发展的重要机制之一.
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抑制PI_3 K/Akt信号通路对Ephrin-A1介导的肝癌细胞运动和侵袭能力的影响
目的 探讨PI_3K/Akt信号传导通路在Ephrin-A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中的作用.方法 Western blot法检测Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用人肝癌细胞系Huh-7细胞前后丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI_3K)信号分子的表达,利用LY294002特异性的阻断PI_3K/Akt信号通路后,检测细胞运动能力、细胞侵袭能力的变化.结果 Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用后p-Akt磷酸化蛋白的表达与对照组比较明显上升(t=4.564,P＜0.05),PI_3K/Akt信号通路可能为Ephrin-A1/EphA1作用的下游信号传导通路;LY294002明显抑制Ephrin-A1/Fc融合蛋白对Huh7细胞中PI_3K/Akt信号通路的激活,p-Akt磷酸化蛋白的含量与对照组比较明显减少(P＜0.05);Ephrin-A1介导肝癌细胞的运动能力及侵袭能力明显受到抑制(P＜0.05). 结论 PI_3K/Akt信号通路在Ephrin-A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中起重要的作用.
关键词： 癌 肝细胞 信号传导 Ephrin-A1 1-磷脂酰肌醇3激酶 -
17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用
目的探讨17β-雌二醇(E2)对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI-3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI-3K抑制剂对其的影响.方法应用免疫印迹杂交技术,检测一定浓度(1×10-6 mol/L)17β-E2 作用于Ishikawa细胞不同时间(分别为0、5、15、30、60、120 min)后和不同浓度(分别为0、1×10-10、1×10-8、1×10-6、1×10-4 mol/L)17β-E2作用Ishikawa细胞一定时间(30 min)后PKB的活化情况[以磷酸化PKB和总PKB比值(p-PKB/PKB)表示],以及用同法检测PI-3K抑制剂LY294002对17β-E2活化PKB的影响.结果 1×10-6 mol/L 17β-E2作用于Ishikawa细胞15 min时,PKB的活化水平(0.533±0.029)已明显高于对照(0.361±0.029,P<0.05),30 min时明显(0.666±0.021,P<0.001),而且持续至少达120 min时;随着17β-E2浓度(分别为1×10-10、1×10-8、1×10-6、1×10-4 mol/L)的增加,PKB的活化水平逐渐增高,与对照比较, 差异有显著性(除1×10-10 mol/L外, P值分别为>0.05、<0.05、<0.05、<0.001).随着LY294002作用浓度 (分别为0.1、10、50、100 μmol/L) 的增加,17β-E2作用Ishikawa细胞后PKB的活化水平逐渐下降(分别为0.415±0.032、0.111±0.035、0、0),同对照(0.443±0.032)比较,差异有显著性(除0.1 μmol/L外, P值分别为>0.05、<0.05、<0.001、<0.001),50 μmol/L 的LY294002已完全阻断了17β-E2对Ishikawa细胞PKB的活化作用.结论 17β-E2可通过非转录效应,迅速激活Ishikawa细胞的PI-3K/PKB信号传导通路,LY294002可抑制17β-E2对此通路的激活.
关键词： 子宫内膜肿瘤 雌二醇 1-磷脂酰肌醇3激酶 原癌基因蛋白质类 信号传导 -
重症急性胰腺炎肺损伤时磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路的表达
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的表达和意义. 方法 健康雄性长白猪24只,随机分为假手术组、急性肺损伤(ALI)组、ALI+内毒素(LPS)组和ALI+Wortmannin(P13K抑制剂)组,每组6只.逆行聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹方法检测肺组织PI3K/PKB mRNA和PKB蛋白活性,凝胶电泳迁移滞留试验(EMSA)法检测核转录因子-κB(NF-κB)活性变化,酶联免疫法检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量变化,并观察肺组织病理学变化. 结果 ALI组较假手术组肺组织PI3K、PKB mRNA表达及PKB磷酸化水平明显增强[PDK mRNA(43.7±14.3)%vs(20.7±9.1)%,P<0.05;PKB mRNA(52.2±22.2)%vs(22.2±10.2)%,P<0.01;p-PKB/PKB(0.547±0.036)vs(0.348±0.029),P<0.05],NF-κB活性变化同步增强(10.5±2.1 vs 2.4±0.5,P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β高表达,且尤以注射LPS后表现更显著,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).ALI+Woamannin组PI3K、PKB mRNA及PKB磷酸化水平较ALI组和ALI+LPS组明显下降[PDK mRNA(31.3±8.5)%vs(43.7±14.3)%,(75.7±17.2)%,P<0.05,P<0.01;PKB mRNA(27.5±9.8)%vs(52.2±22.2)%,(69.7±14.3)%,P<0.05,P<0.01;p-PKB/PKB(0.380±0.031)vs(0.547±0.036),(0.695±0.042),均P<0.01)],NF-κB活性、TNF-α及IL-1β含量也明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01). 结论 PI3K/PKB信号转导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程,PDK/PKB信号转导通路可被LPS激活并通过上调NF-κB活性、TNF-α及IL-1β水平而发挥作用.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 呼吸窘迫综合征 成人 1-磷脂酰肌醇3激酶 -
磷脂酰肌醇3激酶信号转导通路与Barrett食管发生的实验研究
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路与Barrett食管发生的关系.方法 将140只大鼠分为假手术组10只、铁剂组10只、食管十二指肠端侧吻合组30只、食管十二指肠端侧吻合加铁剂组30只、食管胃十二指肠侧侧吻合组30只、食管胃十二指肠侧侧吻合加铁剂组30只.后共获得10份正常食管组织、62份反流性食管炎组织、34份Barrett食管组织,应用免疫组织化学方法检测以上3种组织中表皮生长因子受体(EGFR)、Akt、磷酸化Akt和磷酸化mTOR蛋白的表达水平.采用单因素方差分析、SNK两两比较和非参数相关性分析进行统计学处理.结果 Barrett食管组织中EGFR、Akt、磷酸化Akt、磷酸化mTOR蛋白的表达水平高于反流性食管炎和正常的食管组织(EGFR为0.1799±0.0367比0.0438±0.0025和0.0277±0.0069,q=6.79、4.13; Akt为0.1874±0.0250比0.0986±0.0093和0.0383±0.0048,q=6.51、3.56;磷酸化Akt为0.1418±0.0130比0.0592±0.0027和0.0281±0.0017,q=7.68、3.99;磷酸化mTOR为0.1591±0.0275比0.0674±0.0059和0.0112±0.0017,q=5.62、4.11,P均＜0.05).反流性食管炎食管组织中EGFR、Akt、磷酸化Akt、磷酸化mTOR蛋白的表达水平高于正常食管组织(q=4.67、4.29、4.27、4.03,P均＜0.05).结论 反流性食管炎、Barrett食管组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导通路被激活,为临床多靶点治疗疾病提供了一定的理论依据.
关键词： Barrett食管 受体 表皮生长因子 1-磷脂酰肌醇3激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 信号转导 疾病模型 动物
