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微小RNA-375调控NIT-1胰岛细胞脂性凋亡
目的 探讨提高或降低内源性微小RNA-375(miRNA-375)的水平是否影响小鼠胰岛β细胞NIT-1的脂性凋亡.方法 以500μmol/L长链不饱和游离脂肪酸棕榈酸孵育NIT-1 48 h,建立脂性凋亡模型,并以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测重组胰岛素样生长因子1(V1)表达水平.将NIT-1分为:空白组(正常培养细胞),空转组(等量lipo 2000),阴性对照miRNA组(等量lipo 2000+阴性对照miRNA),miRNA-375组(等量lipo 2000+miRNA-375)(提高内源性miRNA-375水平),2'-O-me-375组(等量lipo 2000+2'-O-me-375)(降低内源性miRNA-375水平).在2 ml转染体系,通过转染脂质体lipo 2000 5 μl(空白组不加),以80 nmol/L miRNA或对照物(空转组不加)转染NIT-1,72 h后各组分别予500μmoL/L棕榈酸孵育48 h.72 h后各组分别予500μmol/L棕榈酸孵育48 h.以Hochest 33342染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测并计算凋亡率,以Western blot检测V1表达水平.结果 棕榈酸组凋亡细胞数明显比对照组增多,而V1表达水平比对照组下降约66.8%(t=5.051,P＜0.0001).与其他三组比较,miRNA-375组脂性凋亡率高,比空白组升高73.7%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001),比阴性对照miRNA组升高1.47倍(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001).miRNA-375组V1表达水平降低,比阴性对照miRNA组降低56.06%(P＜0.05).而另一方面,与其他三组比较,2'-O-me-375组脂性凋亡率低,比空白组降低64.7%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001),比阴性对照miRNA组下降49.6%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P=0.001).2'-O-me-375组V1表达水平高,比空白组升高5.33倍(P＜0.0001),比阴性对照miRNA组升高75.9%(P=0.021).结论 棕榈酸诱导小鼠胰岛细胞凋亡伴有V1表达水平下降;miRNA-375参与调节小鼠胰岛β细胞的脂性凋亡.
关键词： RNA干扰 脂性凋亡 微小RNA-375 Myotrophin 反义技术 -
miR-375在肿瘤发生及诊断中的研究进展
miRNA是一类保守的、非编码的、单链的小RNA分子,通过调节基因表达从而在各种生物进程中发挥着重要的生物学作用.miR-375作为特异的miRNA,初在胰岛β细胞内被发现,同时它也是一种多功能miRNA,它能调控胰岛素的分泌和胰岛的形成,更重要的是参与肿瘤的发生发展.研究证实miR-375是通过靶向多个重要的致癌基因如AEG-1、YAPI、IGFIR及PDKI等发挥作用的.研究发现miRNA-375在肝癌、胃癌等肿瘤中明显下调,但在乳腺癌和前列腺癌中却显著上调,并且miR-375在前列腺癌和乳腺癌中起到促肿瘤生长作用.因此miR-375可能成为调控肿瘤细胞生长的一个新靶点,并且miR-375表达水平的监测能促进肿瘤的早期诊断和预后判断.
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抑制miR-375降低NIT-1胰岛β细胞脂性凋亡
目的 探讨抑制内源性微小RNA-375(miR-375)是否影响NIT-1胰岛β细胞的脂性凋亡.方法 将NIT-1细胞分为4组:空白组(无脂质体)、空转组(脂质体)、阴性对照miRNA组(脂质体+阴性对照miRNA)、2'-O-me-375组(脂质体+2'-O-me-375,抑制内源性miR-375的作用).转染72 h后,各组细胞分别以500 μmol/L棕榈酸孵育48 h.以Hochest 33342染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,以Western印迹法检测miR-375靶基因肌营养素(myotrophin,VI)的表达.结果 与其他3组比较,2'-O-me-375 RNA组NIT-1脂性凋亡率低(P<0.01),同时V1表达水平高(P<0.01).结论 抑制内源性miR-375可降低胰岛β细胞的脂性凋亡.
关键词： RNA干扰 β细胞凋亡 微小RNA-375 肌营养素 2'-O-me-375 -
微小RNA-375通过靶向PAX6对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响
目的 探讨微小RNA-375 (miR-375)和人类配对盒基因6(PAX6)在宫颈癌顺铂耐药株HeLa cisR中的表达及耐药逆转作用并初步探讨可能机制.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测28例正常宫颈组织、30例宫颈癌组织(14例顺铂敏感和16例顺铂不敏感)和不同顺铂敏感性细胞HeLa、HeLa cisR中miR-375、PAX6 mRNA水平,采用脂质体法向HeLa和HeLa cisR细胞转染含miR-375模拟物(mimics)的寡核苷酸探针(过表达组)和阴性对照NC(阴性对照组),以不行任何转染的为空白对照组.采用QPCR检测转染后HeLa和HeLa cisR细胞中miR-375和PAX6 mRNA水平,采用MTI法检测不同浓度顺铂(1、3、10、30、100 μmol/L)处理后的增殖情况并计算半数抑制浓度(IC50)以评价顺铂敏感性,Western blotting检测PAX6蛋白水平,双荧光素酶报告基因试验评价miR-375对PAX6的靶向调控作用.结果 宫颈癌组织中的miR-375水平低于正常宫颈组织(0.714±0.341vs1.006±0.299),PAX6 mRNA水平高于正常宫颈组织(1.855±0.928vs.1.011±0.257),miR-375水平与PAX6 mRNA水平呈负相关(r=-0.416,P＜0.05).与化疗敏感组相比,化疗不敏感组的miR-375水平降低,而PAX6 mRNA水平升高(P＜0.05).HeLa cisR细胞的miR-375水平低于HeLa细胞(0.365±0.098vs.1.032±0.135),而PAX6mRNA水平高于HeLa细胞(3.154±0.957vs.1.067±0.168),差异均有统计学意义(P＜0.05).与其余两组相比,过表达组转染后的miR-375水平升高,PAX6蛋白和mRNA水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-375过表达可降低顺铂IC50(P＜0.05),先转染miR-375 mimics 24 h后再转染过表达PAX6的pCMV-PAX6质粒后细胞的IC50与未转染细胞的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-375通过靶向PAX6参与了宫颈癌细胞的顺铂耐药,miR-375有望成为逆转宫颈癌顺铂耐药的靶点.
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miR-375及其靶基因PDK1在胰腺癌中的表达
目的 探讨微小RNA 375(miR 375)与3磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(PDK1)在人胰腺癌中的表达及其相关性.方法 实时荧光定量PCR方法检测胰腺癌组织中miR-375和PDK1表达,分析两者的相关性.结果 在人胰腺癌组织中,miR-375表达下调,而PDK1表达上调,两者呈负相关.结论 miR-375在胰腺癌中发挥抑癌基因作用,对其靶基因PDK1具有负性调控作用.
关键词： 胰腺癌 微小RNA-375 3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1 -
血清miR-375、TSGF、SCC联合检测对宫颈癌的诊断价值
目的 评价血清微小RNA-375(miR-375)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、鳞状细胞癌抗原(SCC)联合检测对宫颈癌的诊断价值.方法 选取宫颈癌患者32例(宫颈癌)、宫颈上皮内瘤变患者23例(宫颈上皮内瘤变)及同期健康体检者25例(对照组).采用光度比色法检测各组血清TSGF水平,ELISA法检测血清SCC水平,实时荧光定量PCR法检测血清miR-375水平.采用ROC曲线评价miR-375、TSGF、SCC单独及联合检测诊断宫颈癌的效能.结果 宫颈癌组血清miR-375水平低于宫颈上皮内瘤变组和对照组,血清TSGF、SCC水平高于宫颈上皮内瘤变组和对照组(P均＜0.05);宫颈上皮内瘤变组血清miR-375低于对照组,血清SCC水平高于对照组(P均＜0.05).ROC曲线分析显示,miR-375、TSGF、SCC单独及联合检测诊断宫颈癌的曲线下面积分别为0.842、0.757、0.748、0.891,联合检测高于单独指标检测;血清miR-375、TSGF、SCC联合检测诊断宫颈癌的敏感度、特异度及准确率分别为84.38％、78.26％、81.82％,均高于单独指标检测.结论 宫颈癌患者血清TSGF、SCC水平升高而miR-375水平降低,三者联合检测有助于宫颈癌的诊断.
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食管癌组织中miRNA-375表达及其甲基化与肿瘤发生发展的关系
目的 观察食管癌组织中miRNA-375表达变化,并探讨其表达变化及其甲基化与肿瘤发生发展的关系.方法 选择食管癌组织42例(食管癌组)、非癌组织68例(非癌对照组).用实时荧光定量PCR检测两组miRNA-375表达,分析miRNA-375表达变化与食管癌患者临床病理特征的关系,用甲基化特异性PCR检测miRNA-375基因启动子区CpG甲基化阳性率.结果 食管癌组miRNA-375相对表达量低于非癌对照组(t=6.692,P＜0.05),食管癌组miRNA-375启动子区甲基化阳性率高于非癌对照组(x2=24.483,P＜0.01).不同性别、年龄、病理类型食管癌组织miRNA-375相对表达量、启动子区甲基化阳性率比较差异无统计学意义(P均＞0.05);低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期食管癌组织中miRNA-375相对表达量低于高中分化、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期食管癌组织(P均＜0.05),miRNA-375启动子区甲基化阳性率高于高中分化、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期食管癌组织(P均＜0.05).结论 miRNA-375在食管癌组织中呈低表达与其启动子区甲基化有关,且miRNA-375参与食管癌的发生发展.
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微小RNA-375在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其甲基化调控
目的 观察微小RNA(miRNA)-375在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,探讨其启动子区的甲基化水平与ESCC发生的关系.方法 对62例ESCC组织标本和正常食管组织(距癌肿边缘＞3 cm)进行实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测,使用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测样本中miRNA-375上游启动子区的甲基化.统计学分析miRNA-375的表达与临床因素的相关性.结果 62例ESCC组织标本中有53例miRNA-375E呈明显低表达(85％).MSP结果显示,ESCC组织的甲基化水平明显高于正常食管组织,差异有统计学意义(P＜0.05).与临床因素的相关分析显示,miRNA-375在ESCC组织中低表达,与ESCC的TNM分期呈负相关(P＜0.05).结论 ESCC组织中存在miRNA-375基因异常低表达及其启动子区的高甲基化,可能在ESCC发生发展中发挥重要作用.
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2型糖尿病患者血浆miR-375和miR-126表达水平检测的临床意义
目的 探讨血浆微小RNA-375(miR-375)和微小RNA-126(miR-126)在2型糖尿病(T2DM)患者血浆中的变化及临床意义.方法 选取30例T2DM患者和30例糖耐量正常者作为研究对象,所有研究对象均行75g葡萄糖耐量检测(OGTT),根据1999年WHO的糖尿病诊断标准,将研究对象分为T2DM组和糖耐量正常的对照组.以RNU6为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-375和miR 126的相对表达水平.结果 miR-126在对照组的表达量为0.191(0.129,0.270),T2DM组表达量为0.252(0.119,0.418).miR-375在对照组表达量为0.042(0.004,0.132),T2DM组表达量为0.386(0.160,0.560).进行非参Mann-Whitney U检验,miR-126在T2DM和对照组中表达差异无统计学意义(U=169,P=0.318),miR 375在T2DM中表达上调(U=99.5,P＜0.001).结论 血浆miR-126在两组表达量无统计学差异,miR-375在T2DM组表达上调,对T2DM诊断具有潜在应用价值.
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MiRNA-375在腹腔镜胃旁路术治疗2型糖尿病疗效评估与预测中的作用
目的：探讨微小RNA-375（miR-375）在腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术（LRYGB）治疗2型糖尿病疗效评估与预测中的作用。方法回顾性分析2010年5月至2013年3月在苏州大学附属第一医院接受LRYGB治疗的17例2型糖尿病患者的临床资料和实验室数据。其中男7例，女10例；年龄（46±13）岁。所有患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。比较患者术前和术后1、3、6个月的体质指数（BMI）、空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、空腹胰岛素（FIns）、空腹C肽（FCP)、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和miR-375水平。手术前后临床和实验室数据的比较采用t检验和Mann-Whitney U检验，miR-375与各因素间的相关性分析采用Spearman秩相关分析。结果17例患者均成功完成LRYGB治疗。术后6个月，患者的BMI（26±5）kg/m2、FPG（6.3±1.7）mmol/L、HbA1c（6.5±0.8）%、FIns 6.1[3.5，8.6] mU/L、HOMA-IR 1.9[1.0，2.6]、TC（4.1±1.1）mmol/L、TG（0.9±0.4）mmol/L、LDL-C （2.3±0.7）mmol/L、miR-3750.06[0.00，0.12]，明显低于术前的（33±7）kg/m2、（11.1±3.6）mmol/L、（9.3±1.6）%、12.7[3.6，19.3] mU/L、5.4[1.9，13.7]、（5.0±1.0）mmol/L、（3.6±4.0）mmol/L、（3.1±0.7）mmol/L、1.20[0.60，1.85]（P值均＜0.05）；患者的HDL-C为（1.23±0.19）mmol/L，明显高于术前的（1.05±0.14）mmol/L。miR-375与BMI、TC、TG、LDL-C、HbA1c、FPG、FIns、FCP、HOMA-IR均呈正相关关系（P＜0.05）。结论血清miR-375与血糖的控制、血脂的改善、胰岛素抵抗的好转密切相关，且在血清中检测切实可行，故可能成为一种新型的生物标志物，作为手术治疗T2DM后评估、预测疗效的指标。
关键词： 微小RNA-375 腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术 糖尿病 2型
