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β-arrestin2对急性支气管哮喘小鼠模型脾CD4+T细胞T-bet表达的影响
目的探讨β-arrestin 2在急性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型脾CD4+T细胞中的表达及对T-bet表达的影响.方法建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4-T细胞,RNA 干扰β-arrestin 2的表达后.检测CD4+T细胞β-arrestin 2、T-bet mRNA和蛋白的表达.结果 siRNA-β-arrestin 2-1123沉默效果佳,相对于未转染siRNA的哮喘组及其他siRNA-β-arrestin 2转染组,β-arrestin 2 mRNA明显降低(P＜0.01);哮喘小鼠模型脾CD4+T细胞β-arrestin 2蛋白的表达明显高于正常组(P<0.01);β-arrestin 2沉默后,哮喘小鼠脾CD4+T细胞T-bet mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.05).结论β-arrestin 2可能通过抑制小鼠CD4+T细胞T-bet的表达参与哮喘的发病.
关键词： 哮喘 CD4+T细胞 β-arrestin 2 T-bet转录因子 -
重组人白细胞介素11对特发性血小板减少性紫癜患者Th1/Th2和T-bet/GATA-3失衡的影响
目的 探讨重组人白细胞介素(recombinant human interleukin,rhIL)11治疗特发性血小板减少症(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)对 Thl、Th2水平及其转录因子 T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平的影响.方法 收集2015年5月至2016年12月在大同市第二人民医院血液科住院治疗的成人ITP患者,共56例,男21例,女35例;年龄29~73岁;我院同期体检健康人10名为对照组,男4名,女6名;年龄20~52岁.使用rhIL-11治疗ITP患者,流式细胞仪检测治疗前后Th1、Th2细胞比例及Th1/Th2比值;实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)分析转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达.结果 rhIL-11治疗ITP有效率为76.8%(43/56).对于有效的患者,治疗后PLT中位数明显升高为[25.0(15.0,36.0)]×109/L与[68.0(49.0,108.0)]×109/L(Z=-5.712,P<0.001);Th1细胞较治疗前下降[14.8%(12.6%,17.6%)与10.6%(9.8%,12.6%),Z=-4.825,P<0.001];Th2细胞水平较治疗前升高[0.4%(0.3%,0.5%)与1.2%(0.9%,1.4%),Z=-5.720,P<0.001];Th1/Th2治疗后比治疗前明显降低[40(30,49)与10.6(7.8,12.0),Z=-5.711,P<0.001];T-bet mRNA表达水平较治疗前下降[0.36 (0.18,0.51)与0.09(0.05,0.13),Z=-2.668,P=0.008];GATA-3 mRNA表达水平较治疗前升高[0.04 (0.03,0.05)与0.12(0.09,0.15),Z=-2.366,P=0.018].对于无效的患者,治疗前PLT中位数为11.0 (8.0,15.5)×109/L,治疗后PLT中位数为15.0(10.0,19.5)×109/L(Z=-3.027,P=0.002);ITP患者治疗前后Th1、Th2细胞水平、Th1/Th2比率以及T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平差异无统计学意义(P均>0.05).结论 rhIL-11可有效纠正 ITP 患者体内 Th1、Th2细胞失衡,及其相应的调控因子 T-bet、GATA-3的失衡;但对少部分患者无明显的治疗作用.
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β-arrestin2对急性支气管哮喘小鼠模型脾CD4+T细胞T-bet表达的影响
目的 探讨β-arrestin 2在急件支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型脾CD4+T细胞可的表达及对T-bet表达的影响.方法 建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4+T细胞,RNA干扰β-arrestin 2的表达后,检测CD4+T细胞β-arrestin 2、T-bet mRNA和蛋白的表达.结果 siRNA-β-arrestin 2-1123沉默效果佳,相对于未转染siRNA的哮喘组及其他siRNA-β-arrestin 2转染组,β-arrestin 2 mRNA明显降低(P<0.01);哮喘小鼠模型脾CD4+T细胞β-arrestin 2蛋白的表达明显高于正常组(P<0.01);β-arrestin 2沉默后,哮喘小鼠脾CD4+T细胞T-bet mRNA和蛋白的表达明显升高(P<0.05).结论 β-arrestin 2可能通过抑制小鼠CD4+T细胞T-bet的表达参与哮喘的发病.
关键词： 哮喘 CD4+T细胞 β-arrestin 2 T-bet转录因子 -
GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞分化的关系
目的 评价核蛋白转录因子GATA-3和T-bet与吗啡抑制成人辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的关系.方法 健康志愿者10名,年龄20 ～ 50岁,体重50 ～ 70 kg,清晨空腹采集外周静脉血样20 ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs).采用随机配伍设计,将每份血样分离出的PBMCs随机分为5组(n=10):常规培养组(C组)、刺激剂刺激分化组(P组)、吗啡50 μg/ml组(M组)、吗啡50μg/ml+纳洛酮50 μg/ml组(MN组)、纳洛酮50μg/ml组(N组).刺激剂孵育4h后分别收集细胞和上清液.应用流式细胞术检测Th1、Th2细胞亚群比例,计算二者比值(Th1/Th2);用酶联免疫吸附法检测上清液中干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的浓度;使用凝胶电迁移技术检测淋巴细胞核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性.结果 与P组比较,M组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性降低,MN组Th1细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ浓度降低(P ＜0.05或0.01);与M组比较,MN组Th1、Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、上清液IFN-γ和IL-4的浓度、GATA-3和T-bet活性升高(P＜0.05或0.01);N组与C组上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡通过激活阿片受体抑制Th细胞分化,而这种抑制作用与抑制核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的活性有关.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达在allo-HSCT后aGVHD中的作用及意义
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)中的作用及临床意义.方法 选择2013年6月到2016年4月接受异基因造血干细胞移植的65例受者,收集移植后15、30、60、90 d以及当受者发生aGVHD时的外周血样本,同时收集10例正常志愿者外周血样本作为正常对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应法定量检测PPARγ、γ干扰素(WN-γ)及T-bet mRNA的表达水平,分析PPARγ表达水平与aGVHD及TH1细胞因子IFN-γ和T-bet表达的相关性.在体外进行淋巴细胞混合实验,采用CCK8试剂盒检测PPARγ激动剂罗格列酮对淋巴细胞增殖的影响.结果 65例受者中移植后90d内有45例发生aGVHD(aGVHD组),20例未发生aGVHD(无aGVHD组).正常志愿者外周血PPARγ表达量明显低于移植后90 d内的受者(P＜0.05).未发生aGVHD的受者移植后90 d内PPARγ的表达量无明显变化.aGVHD组受者PPARγ的表达量比无aGVHD组受者表达量降低(P＜0.05).发生Ⅲ～Ⅳ度aGVHD受者的PPARγ表达量显著低于发生Ⅰ～Ⅱ度aGVHD受者,二者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).在aGVHD组,TH1细胞相关因子IFN-γ、T-bet的表达明显升高,且与PPARγ的表达存在负相关(P＜0.05).体外淋巴细胞混合实验显示,PPARγ激动剂罗格列酮在25 μmol/L及以上浓度对淋巴细胞增殖剂量依赖性抑制(P＜0.01).结论 PPARγ表达与aGVHD的发生及严重程度存在相关性,PPARγ激动剂可以抑制淋巴细胞的增殖,可能成为治疗aGVHD的新方法.
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慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉筛窦黏膜组织中T-bet和GATA-3的表达
目的:研究Th1特异性转录因子T-bet及Th2特异性转录因子GATA-3在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)筛窦黏膜组织中的表达.方法:选取48例CRSwNP患者,根据是否伴变应性鼻炎(AR)分成CRSwNP伴AR组(AR组,25例)和CRSwNP不伴AR组(NAR组,23例);对照组为16例无CRS及AR的上颌窦囊肿或蝶窦囊肿患者.手术中均取前组筛窦黏膜.采用Real-time PCR和免疫组织化学检测黏膜组织中转录因子T-bet与GATA-3的表达;用ABC-ELISA检测黏膜组织中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的含量.结果:与对照组比较,AR组转录因子GATA-3 mRNA表达水平明显升高,GATA-3表达的阳性细胞数增多,IL-4和IL-5的含量显著增加(P＜0.05);NAR组T-bet与GATA-3mRNA表达水平及T-bet与GATA-3表达的阳性细胞数差异均有统计学意义,IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的含量均明显升高(P＜0.05).NAR组与AR组比较,T-bet mRNA表达水平升高以及T-bet表达的阳性细胞数增多,差异均有统计学意义,且IFN-γ和IL-2的含量也显著升高(P＜0.05);而GATA-3的表达水平以及IL-4和IL-5的含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GA-TA-3在CRSwNP伴AR患者的筛窦黏膜中高表达,提示Th2型免疫反应可能占主导;在CRSwNP不伴AR患者中T-bet和GATA-3表达水平均升高,提示Th1与Th2型免疫反应均可能存在.
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STAT1和T-bet基因敲除在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型中的不同作用
目的 观察STAT1信号分子和T-bet转录因子在咪喹莫特诱导的银屑病疾病模型中的不同作用.方法 将雄性8周龄129和C57BL/6小鼠分别随机分为正常对照组、野生型咪喹莫特诱导组,将雄性8周龄STAT1-/-小鼠和T-bet-/-小鼠分为STAT1-/-咪喹莫特诱导组、T-bet-/-咪喹莫特诱导组,依据PASI评分标准记录评价小鼠银屑病疾病模型的严重程度,HE染色观察疾病模型中皮损组织的形态和炎性细胞浸润情况来评价其病理学改变,实时荧光定量PCR检测疾病模型的皮损组织中相关细胞因子基因表达水平的改变.结果 局部给予咪喹莫特诱导后4种小鼠(129、C57BL/6、STAT1-/-、T-bet-/-)背部皮肤均出现不同程度红斑、鳞屑、炎症细胞浸润.与T-bet-/-对比,STAT1-/-给药组皮炎反应更严重.与野生型给药组相比,STAT1-/-给药组分泌的IL-22水平明显升高而IL-17升高不明显.结论STAT1信号分子可能通过除Th17细胞分泌外的其他途径调控IL-22表达水平,从而影响银屑病严重程度.
