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大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中Asporin基因的表达及意义
目的 通过大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型,探讨大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中Asporin基因的表达及意义.方法 取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞,选取P1代及P5代,体外培养6d,在倒置显微镜下观察细胞形态,利用HE染色及甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行观察及鉴定.用RT-PCR及Western blot检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖及Asporin基因变化.结果 随着细胞传至P5代,细胞形态上有梭形变趋势,Ⅱ型胶原( P5/P1=0.111767,P=0.009842)及蛋白多糖表达(P5/P1=0.328965,P=0.002371)明显下调,Asporin蛋白表达明显上调.结论 终板软骨细胞传至P5代,细胞发生自然退变,Asporin基因表达明显上调,提示Asporin基因表达与终板软骨的退变具有重要联系.
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不同年龄大鼠终板软骨细胞抗氧化能力研究
目的:通过研究不同年龄大鼠的终板软骨细胞氧化应激的差异,探讨衰老对终板软骨细胞抗氧化能力的影响.方法:原代培养获取SD大鼠2个月、18个月来源的终板软骨细胞鉴定后,使用第三代细胞进行实验.实验分为两组,A组为2个月大鼠来源的终板软骨细胞,B组为18个月大鼠来源的终板软骨细胞.待A、B两组细胞贴壁后,通过β-半乳糖脱氢酶染色和RT-PCR对端粒酶长度进行检测,比较两组细胞衰老的差异;通过总抗氧化能力试剂盒检测两组细胞总抗氧化能力的不同.以浓度为200umol/L过氧化氢对细胞进行2.5h的处理,RT-PCR法检测处理前后两组细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、caspase-3及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,bcl-2)的mRNA表达情况,使用流式细胞仪检测两组细胞的凋亡情况.对Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、caspase-3及bcl-2的相对表达量进行组间t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果:未使用过氧化氢处理时,A、B两组终板软骨细胞的在β-半乳糖脱氢酶染色、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达及凋亡率无明显差异(P＞0.05),而B组在端粒酶的相对长度(T/S=10±2)及总抗氧化能力(0.72±0.18)较A组(T/S=135±5,1)显著降低(P＜0.05).在相同条件的过氧化氢刺激后,B组终板软骨细胞的Ⅱ型胶原(0.60±0.16)、蛋白聚糖(0.75±0.22)表达明显低于A组细胞(P＜0.05),而凋亡率显著高于A组细胞(P＜0.05).结论:不同年龄大鼠终板软骨细胞衰老及抗氧化能力存在差异,衰老越明显的终板软骨细胞,总抗氧化能力越低,抵抗过氧化损伤的能力越差.
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调控转录因子NF-κB信号通路对体外自然退变终板软骨细胞的影响
目的 探讨终板软骨细胞体外自然退变模型中转录因子(NF)-κB信号通路表达变化及意义.方法 分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞自然退变模型.根据细胞传代次数分P2代细胞(空白对照组),P5代细胞(体外自然退变组)及NF-κB信号通路抑制组(细胞传代中加入Bay11-7082的P5代细胞).观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型,阿新蓝染色观察细胞外基质变化.实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,Ⅱ型胶原,蛋白聚糖,人基质金属蛋白酶(MMP) 13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65、IκBα、p-IκBα表达变化.结果 随着体外传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失,阿新蓝染色可见细胞外基质减少,P5代细胞(体外自然退变组)较P2代细胞(空白对照组)SOX-9(P5/P2=0.488,P＜0.01)、蛋白聚糖(P5/P2=0.287,P＜0.01)、Ⅱ型胶原(P5/P2=0.182,P＜0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,胞质中p-IκBα增高,NF-κB信号通路相关基因MMP13 (P5/P2=1.324,P＜0.05)表达明显上升,NF-κB信号通路抑制组较P5代细胞(体外自然传代组)核内p-P65减少,胞内p-IκBα降低,NF-κB信号通路相关基因MMP13(Bay11-7082/P5=0.611,P＜0.05)表达降低,信号通路抑制组中Ⅱ型胶原(Bay11-7082/P5 =4.173,P＜0.01)、蛋白多糖(Bay11-7082/P5=2.732,P＜0.05)、SOX-9(Bay11-7082/P5=1.567,P＜0.05)等基因表达明显回升.结论 NF-κB信号通路在终板软骨细胞体外退变中发挥重要的调节作用,调控NF-κB信号通路可能会改善椎间盘退变.
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腰椎软骨终板细胞凋亡与椎间盘退变的关系
目的:建立脊柱退变的动物模型,确定脊柱软骨终板细胞凋亡在脊柱退变过程中的意义.方法:选取健康大白鼠24只,随机分为实验组和对照组.建立模型后,在不同时间段对腰椎标本行矢状位切片,分离软骨终板和椎间盘.计数椎间盘软骨终板细胞凋亡数量,评估软骨终板消失状况.结果:腰椎间盘退变的组织学表现,HE染色观察腰椎间盘细胞凋亡状况,TUNEL染色比较对照组和实验组在18周均有明显差别.结论:脊柱退变模型显著增加了软骨终板细胞凋亡数量,腰椎间盘退变过程加速,所以软骨终板细胞凋亡是椎间盘发生退行性变的重要原因.
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高静水压下益气活血汤通过p38MAPK信号通路对兔椎体终板软骨细胞的调控作用
目的 观察益气活血汤含药血清在高静水压下对兔终板软骨细胞p38MAPK信号通路的调控作用,探讨益气活血汤治疗椎间盘退行性病变的可能作用机制.方法 选用3月龄新西兰白兔制备益气活血汤含药血清,体外分离培养第3代兔椎体终板软骨细胞,建立体外高静水压加载干预模型,确定益气活血汤含药血清佳干预条件.将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分为空白组、模型组及含药血清组,空白组无任何干预,其余2组分别施加1 MPa静水压干预24 h后收集终板软骨细胞,运用Western Blot法检测各组终板软骨细胞p38、磷酸化p38蛋白表达情况.结果 持续高静水压干预下,1μg/μL含药血清促终板软骨细胞增殖作用明显.各组终板软骨细胞p38蛋白表达量比较差异无统计学意义;模型组磷酸化p38蛋白表达量显著高于空白组,而含药血清组磷酸化p38蛋白表达量显著低于模型组(P<0.05).结论 益气活血汤可以提高持续高静水压下终板软骨细胞增殖率,抑制软骨细胞凋亡,可能与其降低磷酸化p38蛋白表达水平,抑制p38MAPK信号通路的激活有关,推测益气活血汤可能通过调控p38MAPK信号通路发挥延缓椎间盘退行性病变的作用.
关键词： 终板软骨细胞 静水压 益气活血汤 p38MAPK信号通路 -
AMP活化蛋白激酶在终板软骨细胞体外传代培养中的表达及意义
背景：终板软骨功能障碍是椎间盘退变的始动因素，AMPK在软骨的形成和降解过程中也具有相应的调节作用。目的：观察AMP活化蛋白激酶(AMPK)在终板软骨细胞体外自然传代退变模型中的作用。方法：分离大鼠腰椎终板软骨细胞，体外自然传代培养，取原代细胞(P0)、第2代细胞(P2)及第5代细胞(P5)，倒置显微镜及细胞骨架染色观察终板软骨细胞形态的变化，甲苯胺蓝染色观察终板软骨细胞表型的改变；MTT法检测3组细胞的增殖能力；通过Real time-PCR评价3组终板软骨细胞中软骨标志基因(Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9)以及基质金属蛋白酶3和13的表达变化，Western blot检测终板软骨细胞中AMPK蛋白磷酸化的改变。结果与结论：①随着传代次数的增加终板软骨细胞形态发生改变，增殖能力降低，软骨细胞表型逐渐丢失；②P5代终板软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9基因表达明显下调(P<0.05或0.01)，而基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶13基因表达较P0代及P2代均明显增高(P<0.01)；③Western blot结果显示P5代终板软骨细胞中AMPK蛋白磷酸化水平明显降低。提示：AMPK磷酸化的水平与终板软骨细胞体外自然传代过程中软骨细胞的退变密切相关，调控AMPK活性有可能减轻或阻止终板软骨及椎间盘的退变。
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生长因子对椎间盘终板软骨细胞抗氧化能力的影响
背景：维生素E的抗氧化能力众所周知，但其他生长因子是否对终板软骨细胞具有抗氧化能力，国内外未见报道。目的：观察不同生长因子对椎间盘终板软骨细胞抗氧化能力的影响。
方法：将原代培养获取的终板软骨细胞后分为4组，即空白对照组、血清剥夺组、过氧化氢刺激组、过氧化氢刺激后+不同生长因子干预组。第4组再细分为胰岛素生长因子1组、碱性成纤维细胞生长因子组、转化生长因子β组、Forskolin组、维生素E组，共5个亚组，通过RT-PCR检测各组半胱氨酸蛋白酶3、基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶抑制剂1及凝血酶4、凝血酶5等基因表达情况；通过凋亡试剂盒及流式细胞仪分析不同组内细胞凋亡情况；Western blot检测细胞的合成与分泌；使用试剂盒检测总抗氧化能力和过氧化氢含量，并进行统计学分析。
结果与结论：①不同生长因子对终板软骨细胞凋亡、分泌和抗氧化能力的影响存在差异；②总体来讲，转化生长因子β和Forskolin对过氧化氢刺激后的细胞具有进一步损伤作用，而胰岛素生长因子1和维生素E对损伤后的细胞存在保护作用。 -
酸敏感离子通道1a介导细胞内钙离子内流调节椎间盘终板软骨细胞凋亡
目的:观察酸敏感离子通道1a(ASIC1a)介导的钙离子内流在酸诱导的终板软骨细胞凋亡的作用.方法:SD培养大鼠终板软骨细胞,慢病毒为载体转染终板软骨细胞沉默ASIC1a,钙离子成像分析细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验分析酸诱导的细胞活力;ELISA测定凋亡率;荧光染料Hoechst 33342检测细胞凋亡.免疫印迹检测活化型半胱天冬酶-9 (cleaved caspase-9)、活化型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)等凋亡相关蛋白的表达.结果:阻断ASIC1a可以抑制酸诱导的[Ca2+]i升高;用ASIC1a-siRNA或PcTX1特异性阻断ASIC1a,明显抑制酸诱导的终板软骨细胞凋亡;胞外钙离子浓度降低抑制酸诱导的终板软骨细胞凋亡,与阻断ASIC1a结果一致,提示ASIC1a介导的钙离子内流在酸诱导凋亡中的作用.阻断ASIC1a,抑制酸诱导的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达.结论:酸激活的ASIC1a可能通过钙超载促使大鼠椎间盘终板软骨细胞凋亡.
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椎间盘生物学及细胞表型的研究进展
椎间盘退变是腰背痛的主要原因,研究椎间盘发育、退变,结构功能以及椎间盘中各种细胞的特异性标志物有助于椎间盘疾病的治疗.近年来的研究发现,椎间盘起源于脊索,椎间盘退变始于髓核细胞类型和数量的改变,同时也伴随着纤维环细胞和终板软骨细胞的改变.髓核细胞有相对系统的标志物,而纤维环细胞和终板软骨细胞尚无明确的标志物.作者就椎间盘的生物学特征以及椎间盘内各种细胞标志物的研究进展作一综述.
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淫羊藿素通过抑制Hedgehog信号通路保护终板软骨细胞退变
目的:探讨淫羊藿素药物在体外力学诱导终板软骨细胞退变中的作用机制.方法:应用FX-5000T flexcell细胞应力加载系统体外建立大鼠终板软骨细胞退变模型,实验分正常对照组(NC组)、力学刺激组(ICMT组)、力学刺激+药物处理组(ICT+ICMT组).甲苯胺蓝及鬼笔环肽染色观察力学刺激后细胞形态变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,Western blot及RT-qPCR分别检测软骨细胞相关基因及蛋白水平变化.结果:大鼠终板软骨细胞力学刺激后出现退变,细胞形态由多边形被拉成长梭形,ICMT组、ICT+ ICMT组细胞增殖率均高于NC组,但ICMT组与ICT+ ICMT组间细胞增殖率比较无统计学差异,ICT+ICMT组细胞凋亡率较ICMT组明显改善,加入淫羊藿素药物处理后终板软骨细胞因力学刺激导致的退变程度有所缓解,Hedgehog信号通路被抑制.结论:淫羊藿素药物可通过抑制Hedgehog信号通路活性起到保护因力学诱导而引起的终板软骨细胞退变作用.
关键词： 淫羊藿素 终板软骨细胞 细胞退变 Hedgehog信号通路 -
中药胡椒碱在终板软骨细胞退变中的保护作用的研究
目的:探讨中药胡椒碱对椎间盘终板软骨细胞退变的保护作用.方法:分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞加力退变模型.设空白对照组(未加力细胞)、加力组(10％间歇性循环牵张力,10％ ICMT,0.5 Hz,8h/d,加力3d)及加力加药物组(加力组中加入中药胡椒碱40 μmoL/L).倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型.实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,Ⅱ型胶原,蛋白聚糖,MMP13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65表达变化.结果:细胞体外加力后表型丢失,甲苯胺蓝染色可见细胞外基质减少,加力加药组细胞外基质未见明显减少.加力组细胞(ICMT)较空白对照组细胞(NC组)SOX-9(ICMT/NC=0.22,P＜0.01)、蛋白聚糖(ICMT/NC =0.15,P＜0.01)、Ⅱ型胶原(ICMT/NC=0.18,P＜0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,NF-κB信号通路相关基因MMP13 (ICMT/NC=1.68,P＜0.05)表达明显上升.40 μmol/L胡椒碱处理的加力加药组较加力组细胞核内p-P65减少,NF-κB信号通路相关基因MMP13(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT=0.70,P＜0.05)表达降低,40μmol/L胡椒碱处理的加药加力组中Ⅱ型胶原(40 μmol/L胡椒碱/ICMT=1.93,P＜0.05)、蛋白聚糖(40 μmol/L胡椒碱/ICMT=1.78,P＜0.05)、SOX-9(40 μmol/L胡椒碱/ICMT=1.70,P＜0.05)等基因表达明显回升.结论:中药胡椒碱可以抑制椎间盘终板软骨细胞的退变发生,从而起到对椎间盘及终板软骨的保护作用.
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短时间机械循环压力对3D培养脊柱终板软骨细胞的影响
目的：探究短时间的机械循环压力对终板软骨细胞的影响，并探讨其机制。方法：大鼠终板软骨细胞的分离制备大鼠终板软骨细胞琼脂糖模板进行培养，然后通过FX－5000 T对大鼠终板软骨细胞琼脂糖模板加载短时间的机械循环压力。通过活死染色对细胞进行活死分析，通过RT－PCR和Western blotting检测ANK基因表达。通过RT－PCR和ELISA检测TGF－β1的表达。结果：大鼠终板软骨细胞加载短时间的机械循环压力后ANK基因和TGF－β1表达量增加，加载短时间的机械循环压力的实验组跟实验对照组活死染色没有显著改变。结论：短时间的压力刺激下终板软骨ANK基因和TGF－β1表达量上调抑制终板软骨的退变，短时间的压力刺激并不影响终板软件细胞的活死。这个实验结果可能在椎间盘退变的防治中提供一种新的方法。
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磷酸化p38MAPK及ANK在终板软骨细胞退变模型中表达的变化
目的:探讨终板软骨细胞退变后磷酸化p38MAPK和ANK的表达变化.方法:取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板细胞,建立终板软骨细胞体外自然退变模型.采取甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色法,对该模型进行鉴定.以western-blot检测原代及第四代磷酸化p38MAPK及ANK的表达;RT-PCR检测原代及第四代Ank基因mRNA表达.结果:与原代相比第四代终板软骨细胞磷酸化p38MAPK表达量明显增加(P<0.01);ANK表达量明显下调(P<0.05).结论:终板软骨细胞的退变伴随p38MAPK表达增强和ANK蛋白的表达减弱,两者与终板软骨细胞的退变存在明显关联,提示通过调控p38MAPK和ANK的表达可能影响终板软骨细胞的退变,可能有助于阻止终板软骨的退变.
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印第安刺猬蛋白信号通路在人终板软骨细胞退变中的表达变化及意义
目的 研究印第安刺猬蛋白(Ihh)信号通路在人终板软骨细胞自然退变进程中的表达变化,揭示其与终板软骨退变之间的内在联系.方法 获取9例因颈椎外伤经皖南医学院弋矶山医院脊柱骨科手术治疗的患者术中废弃椎间盘组织,分离并体外培养终板软骨细胞.根据细胞传代次数分为空白对照组、自然退变组和抑制组.空白对照组为P1代细胞,自然退变组为P3代细胞,抑制组为传代过程中加入Ihh信号通路特异性抑制剂环巴胺(Cyclopamine)的P3代细胞.通过倒置相差显微镜、甲苯胺蓝染色和阿新蓝染色观察3组细胞形态学及表型变化;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测3组细胞中聚集蛋白聚糖(AGN)、Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、人性别决定区Y框蛋白9(SOX9)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达;Western blot检测3组细胞中Ihh信号通路关键蛋白Ihh、Gli1以及MMP-13蛋白水平.结果 随着体外传代次数的增加,人终板软骨细胞增殖能力逐渐减弱,细胞趋于梭形变,细胞表型逐渐丧失;自然退变组较空白对照组AGN、ColⅡ表达下降(0.36±0.05比1.00±0.03,P＜0.叭;0.28±0.06比1.00±0.01,P＜0.01),MMP-13表达上升(1.66±0.15比1.00±0.02,P＜0.01),抑制组较自然退变对照组AGN,ColⅡ表达上升(0.54±0.05比0.36±0.05,P＜0.01;0.61±0.07比0.28±0.06,P＜0.01),MMP-13表达下降(1.28±0.07比1.66±0.15,P＜0.01),SOX9在3组表达差异无统计学意义(P＞0.05);Western blot提示自然退变组较空白对照组Ihh、Gli1和MMP-13蛋白水平明显增高;抑制组较自然退变组Gli1和MMP-13蛋白水平有所下降,Ihh变化不明显.结论Ihh信号通路在人终板软骨退变过程中起重要促进作用,调控Ihh信号通路有望成为阻止终板软骨退变进而治愈椎间盘退变新的治疗靶点.
关键词： 印第安刺猬蛋白信号通路 终板软骨细胞 椎间盘退变 -
退变腰椎软骨终板细胞生物学特征实验研究
目的 通过对人腰椎软骨终板细胞的培养,观察细胞的形态学和生物学性状,探讨影响其生物学行为的因素.方法 取腰椎退变和未退变终板软骨细胞,在加10%灭火胎牛血清的DMEM培养液中培养.建立体外终板软骨细胞培养模型,采取HE染色、绘制细胞生长曲线、Annexin-V/PI法、免疫组织化学染色、real-time PCR等方法,对细胞形态、活力、生长情况、凋亡、及软骨细胞基质合成进检测.结果 软骨终板细胞可以在体外进行培养;终板软骨细胞的生长情况及细胞表型类似关节软骨,有Ⅱ型胶原表达.退变软骨终板较未退变软骨终板活性及增殖能力降低.细胞凋亡增加,Ⅱ型胶原合成减少.结论 体外成功培养了人腰椎终板软骨细胞,并证明了退变软骨终板细胞凋亡增加,而活性降低,基质合成减少.该研究也为进一步研究终板软骨的生物学性状奠定基础.
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蜂毒肽对IL-1β诱导的大鼠腰椎终板软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响研究
目的 观察蜂毒肽(Melittin)对IL-1β诱导的大鼠终板软骨细胞(endplate chondrocytes,EPCs)Ⅱ型胶原表达的影响.方法 取4周龄SD大鼠进行腰椎EPCs培养,并行形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定.取第3代EPCs,采用MTT法确定IL-1β及Melittin对细胞干预的适浓度.然后将第3代EPCs随机分为4组:A组为正常组,不加任何药物;B组加入适浓度的IL-1β;C组加入适浓度的Melittin;D组加入适浓度的IL-1β及Melittin;干预48 h后采用Western blot法检测Ⅱ型胶原表达.结果 倒置显微镜观察示,第1代细胞多呈多角形,第5代后细胞增殖能力逐渐减弱,细胞形态向梭形转变.细胞质中的酸性黏液物质(如蛋白多糖)被甲苯胺蓝染成深蓝色.免疫荧光染色标记Ⅱ型胶原后,可见细胞骨架部分呈阳性表达(呈绿色荧光).MTT法检测示,在干预24、48 h后,IL-1β及Melittin对EPCs均有抑制作用,并呈剂量依赖性,终确定IL-1β及Melittin干预的适浓度分别为10 ng/mL和1.0 μg/mL.Western blot法检测示,与A组比较,B组IL-1β干预后Ⅱ型胶原表达明显减少,C组Melittin干预后Ⅱ型胶原表达明显增加,但D组与A组比较无明显差异.A、B、C、D组Ⅱ型胶原相对表达量分别为0.991±0.024、0.474±0.127、1.913±0.350、1.159±0.297,除A、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 研究表明Melittin 具有保护终板软骨作用,为其用于防治脊柱退变性疾病提供了相关实验依据.
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低氧诱导因子1α基因在大鼠终板软骨细胞中的表达及意义研究
目的 探讨低氧诱导因子1α (hypoxia-inducible factor lα,HIF-tα)基因在大鼠终板软骨细胞中的表达情况及其与终板软骨细胞凋亡的关系.方法 取8只10周龄SPF级雄性SD大鼠L1-5腰椎终板软骨组织,采用酶消化法分离培养终板软骨细胞并传代,取第3代细胞进行实验.首先将终板软骨细胞分为两组,分别于20％O2常氧条件下(A组)以及0.5％O2低氧下条件(B组)培养;培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测HIF-1α基因表达,Western blot检测凋亡蛋白HIF-1α、Bax、Bcl-2表达.然后,构建LipofectaminTM2000载体试剂和HIF-1α siRNA/LipofectaminTM2000载体混合剂分别转染终板软骨细胞后,于0.5％O2低氧条件下培养(分别为C、D组).培养24 h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,行HIF-1α免疫荧光染色观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测HIF-1α、Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9基因表达,Western blot检测凋亡蛋白HIF-1α、Bax、Bcl-2表达.结果 培养24h后,A、B组均见少量空泡坏死细胞;细胞凋亡率比较差异无统计学意义(t=1.026,P=0.471);B组HIF-1α基因及蛋白相对表达量显著高于A组(t=22.672,P=0.015;t=18.396,P=0.013);两组Bax、Bcl-2蛋白表达比较,差异均无统计学意义(t=0.594,P=0.781;t=1.251,P=0.342).低氧培养24h后,D组空泡坏死细胞较C组增多,且可见大量HIF-1α阳性终板软骨细胞;与C组相比,D组细胞凋亡率显著增高(t=27.143,P=0.002),D组HIF-1α、Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9基因表达较C组显著降低(t=21.097,P=0.015;t=34.829,P=0.002;t=18.673,P=0.022;t=31.949,P=0.007),HIF-1α、Bcl-2蛋白相对表达量较C组均显著降低(t=37.648,P=0.006;t=16.729,P=0.036),而Bax蛋白表达较C组提高(t=25.583,P=0.011).结论 缺氧条件下,终板软骨细胞中HIF-1α表达上调,以提高细胞耐氧性;HIF-1α可抑制终板软骨细胞在低氧环境中发生凋亡.
