首页 > 文献资料
-
雷公藤红素对IL-1β致软骨终板退变的影响
目的 通过IL-1β与雷公藤红素体外刺激小鼠椎间盘软骨终板细胞,探讨雷公藤红素能否抑制IL-1β对软骨终板细胞的影响.方法 不同浓度的雷公藤红素刺激软骨终板细胞,CCK-8法检测不同时间点其对软骨终板细胞增殖作用的影响;实验共分3组:空白对照组(无血清DMEM培养基),IL-1β诱导组(IL-1β 5 ng/mL共同孵育2h),雷公藤红素干预组(经IL-1β 5ng/mL共同孵育2h后,再以雷公藤红素共同孵育24 h).分组处理后,ELISA法检测MMP-1、MMP-3的水平,同时荧光定量PCR检测蛋白多糖及II胶原的mRNA表达水平.结果 与空白对照组相比,IL-1β刺激软骨终板细胞2h后,MMP-1、MMP-3表达水平明显增高,雷公藤红素可抑制细胞中IL-1β介导的MMP-1、MMP-3的表达,同时IL-1β明显抑制软骨终板细胞的蛋白多糖及U胶原mRNA的表达,而雷公藤红素可上调IL-1β诱导的蛋白多糖及II胶原mRNA的表达水平.结论 雷公藤红素能够抑制IL-1β介导的软骨终板退变进程,上调蛋白多糖及II胶原mRNA的表达水平,可能在防治椎间盘退变性疾病中发挥重要作用.
-
外源性转化生长因子-β1作用下胎儿软骨终板细胞II型胶原与蛋白多糖的相关性
目的 观察外源性转化生长因子-β1(TGF-β1)作用下胎儿软骨终板细胞II型胶原和蛋白多糖的变化及相关性.方法 用含10 μg/L外源性TGF-β1培养基培养第2代胎儿软骨终板细胞,分别培养0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d.Western blot和RT-PCR检测培养细胞II型胶原和蛋白多糖及其mRNA的表达.结果 0天与第1天之间相比较,第4天、第5天与第6天之间相互比较,II型胶原和蛋白多糖及其基因表达的差异皆无统计学意义(P＞0.05);第1天、第2天、第3天和第4天之间相互比较,II型胶原和蛋白多糖及其基因表达的差异有统计学意义(P＜0.05).II型胶原和蛋白多糖的mRNA表达及蛋白表达均呈正相关(分别为R=0.9991和R=0.9931).结论 TGF-β1能促进体外培养的胎儿软骨终板细胞合成II型胶原和蛋白多糖,且二者在变化过程中具有显著的相关性.
-
白藜芦醇通过调节SIRT1活性促进退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质
目的 探讨白藜芦醉(Res)干预对退变椎间盘终板软骨细胞(DEC)合成细胞外基质的影响.方法 老年腰椎间盘突出症患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分为5组,即Res组、二甲基亚砜对照组、Res+尼克酰胺(Nam)组、Res+ siRNA转染组及空白对照组.各组进行对应处理后检测沉默信息调节因子2相关酶1( SIRT1)、Ⅱ型胶原(COLA2)、蛋白聚糖聚合物(agg recan)及SIRT1 mRNA表达水平.结果 Res干预上调DEC SIRT1 mRNA及蛋白的表达,促进细胞外基质(COLA2,aggrecan)的合成；Nam及siRNA干预分别有效抑制了SIRT1酶括性及SIRT1 mRNA的表达,并抑制了细胞外基质的合成.结论 Res可促进DEC合成细胞外基质,抑制椎间盘软骨终板退变,其机制与调节SIRT1活性有关.
-
白藜芦醇干预对已退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1表达的影响
目的 探讨不同浓度及不同时间的白藜芦醇干预对退变椎间盘终板软骨细胞沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达的影响.方法 老年患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分组,分别用不同浓度及不同作用时间的白藜芦醇干预,终止培养后检测SIRT1蛋白及mRNA表达水平.结果 与空白对照组相比较,DMSO组SIRT1蛋白及mRNA表达无显著差异(P＞0.05)；白藜芦醇干预的浓度在12.5 μmol/L、作用24 h,以及浓度在50 μmol/L、作用12h以上时能够显著促进已退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA(P ＜0.05).结论 白藜芦醇干预可促进退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA,且该作用呈现浓度、时间依赖关系；0.1％ DMSO对细胞表达SIRT1蛋白无抑制作用.
-
苦杏仁苷对 IL-1β诱导后大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响
目的：观察不同浓度的苦杏仁苷对 IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响，并进一步探讨其作用的可能机制。方法从1月龄 SD 大鼠椎间盘中分离软骨终板并培养，经鉴定后，随机分为正常组、诱导组、苦杏仁苷10－2、10－3、10－4、10－5 mol·L －1给药组，采用流式细胞仪检测大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡，Real-time PCR （RT-PCR）检测凋亡相关基因的表达情况，Western blot 检测细胞内 Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果不同浓度的苦杏仁苷能够拮抗 IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡。流式分析显示各浓度的苦杏仁苷可以降低 IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例；RT-PCR 结果提示苦杏仁苷各浓度组可拮抗 IL-1β上调 Bax mRNA 的表达，下调 Bcl-2 mRNA 的表达，各组与诱导组相比较，其差异具有统计学意义（P ＜0.05）；Western blot 检测结果显示苦杏仁苷10－4 mol·L －1给药组能够拮抗 IL-1β上调 Bax 蛋白的表达，下调 Bcl-2蛋白的表达。结论苦杏仁苷能够拮抗 IL-1β诱导大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡，起到延缓椎间盘退变的作用。
-
大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡体外模型的建立
[目的]建立大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡体外模型.[方法]为了模拟椎间盘内部低营养低代谢环境,采用低胎牛血清培养法培养椎间盘软骨终板细胞分别含0％,1％,3％,5％,8％,10％胎牛血清,设置不同浓度梯度筛选佳浓度,检测凋亡率、凋亡蛋白表达及caspase酶活性.[结果]低胎牛血清培养组细胞发生形态改变,DAPI染色阳性细胞增多；流式细胞仪检测凋亡率随着FBS浓度降低而升高,1％为有效诱导凋亡浓度；Western blot示FAS、caspase-3、PARP、细胞色素C表达在1％ FBS组明显高于10％时,同时caspase-3/8/9酶活性增高.[结论]低胎牛血清培养法能诱导体外培养的软骨终板细胞发生凋亡,终会引起细胞功能丧失和椎间盘退变,caspase家族可能参与了这一过程.
-
体外培养胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原与蛋白多糖表达相关性
目的 观察体外培养过程中胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖变化的相关性.方法 采用含体积分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养胎儿软骨终板细胞,应用Western blot和RT PCR法检测第1代到第8代胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖及其mRNA的表达情况,直线回归分析Ⅱ型胶原和蛋白多糖及其mRNA表达的相关性.结果 第1～8代培养细胞的Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA及蛋白表达水平两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；Ⅱ型胶原及其mRNA表达与蛋白多糖及其mRNA的表达呈明显正相关(r=0.994 7,P=0.014;r=0.945 3,P=0.017).结论 抑制Ⅱ型胶原或蛋白多糖中一种物质下降可同时阻止另一种物质下降,从而延缓椎间盘退变发生.
-
IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响
目的:探讨IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响.方法:分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-1β,用MTT测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3表达的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果:50 ng/ml、100 ng/ml浓度IL-1β可抑制细胞增殖;10 ng/ml、50 ng/ml浓度IL-1β可促进Bax、Fas、caspase-3的表达,但仅浓度为50 ng/ml时才可降低Bcl-2的表达;10 ng/ml、50ng/ml浓度IL-1β可降低Aggrecan、Collagen Ⅱa mRNA的表达.结论:IL-1β可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成,促进软骨终板细胞凋亡,从而促进椎间盘的退变.
-
IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响
目的 探讨IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响.方法 分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-6,MTT法测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;流式细胞仪检测软骨终板细胞生长周期的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果 10、50、100 ng/ml IL-6对软骨终板细胞的增殖无影响,50 ng/ml IL-6对软骨终板细胞细胞周期无影响,10、50 ng/ml IL-6均对Aggrecan mRNA的表达无影响,仅50 ng/ml浓度时IL-6可降低Collagen Ⅱa mRNA的表达.结论 较大剂量IL-6时可抑制软骨终板基质合成,从而促进椎间盘的退变.
-
两种软骨终板细胞体外培养方法效果的比较研究
目的 比较原代椎间盘软骨终板细胞实验室培养中Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶消化效率的差异.方法 提取新西兰大白兔椎间盘软骨终板组织,将其剪碎并随机分成2等份,标记为Ⅰ型胶原组和Ⅱ胶原型组;用0.25％的胰蛋白酶预消化后,分别用0.02％Ⅰ型胶原酶和0.02％Ⅱ型胶原酶在37 cc消化3次,每次lh;将3次消化所得的细胞悬液混匀后离心,获取细胞并进行培养与传代;对两组软骨终板细胞分别进行细胞计数、细胞形态学观察和细胞增殖情况检测等处理,比较两组软骨终板细胞数目、形态及增殖情况的差异.结果 1)细胞计数:Ⅰ型胶原组细胞3次细胞计数结果分别为5.75×104个/mL、5.50×104个/mL、6.25×104个/mL,获得软骨终板数目(5.83±0.31)×104个/mL;Ⅱ胶原型组细胞3次细胞计数结果分别为8.75×104个/mL、9.50×104个/mL、8.25×104个/mL,获得软骨终板数目(8.83±0.51)×104个/mL,Ⅰ型胶原组细胞总量明显少于Ⅱ胶原型组;2)细胞形态:两组软骨终板细胞多呈多角形,胞核大而圆,形态无明显差异.3)细胞增殖:Ⅰ型胶原组细胞MTT读数OD值为(0.561±0.003),Ⅱ胶原型组细胞MTT读数OD值为(0.562±0.002),组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ⅱ型胶原酶较Ⅰ型胶原酶更适用于原代椎间盘软骨终板细胞的分离培养.
-
SIRT1去乙酰化修饰p53抑制IL-1β介导的软骨终板细胞衰老
目的 探讨沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent information regulation 2 homolog-1,SIRT1)对软骨终板细胞衰老的调控作用及相关机制.方法 IL-1β处理软骨终板细胞,通过细胞周期检测、衰老相关β-半乳糖苷酶染色、衰老相关通路激活情况,判断IL-1β对软骨终板细胞衰老的影响;调控SIRT1的表达或活性后,通过上述方法明确SIRT1对IL-1β介导软骨终板细胞衰老具有调控作用,并通过抑制相关通路活性,进一步探讨SIRT1调控软骨终板细胞衰老的机制.结果 IL-1β处理软骨终板细胞后G1期细胞比例明显增加(P＜0.05),衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性率升高(P＜0.05),衰老相关通路p53-p21中p53、p21 mRNA表达水平明显增加(P＜0.05);增加SIRT1的表达后p53蛋白乙酰化水平明显降低(P＜0.05),p21蛋白表达明显降低(P＜0.05),G1期细胞比例较对照组明显较少(P＜0.05),β-半乳糖苷酶染色阳性率明显降低(P＜0.05),而尼克酰胺抑制SIRT1活性后p53蛋白乙酰化水平升高(P＜0.05),p21蛋白表达增加(P＜0.05),G1期细胞比例较对照组明显增加(P＜0.05),β-半乳糖苷酶染色阳性率明显增高(P＜0.05).无论使用尼克酰胺抑制SIRT1激活p53-p21通路与否,在使用p53抑制剂PFT-α后,p21的表达、G1期细胞比例、β-半乳糖苷酶染色阳性率均无明显变化(P＞0.05).结论 IL-1β介导了软骨终板细胞的衰老,SIRT1能够通过去乙酰化修饰p53抑制IL-1β介导的软骨终板细胞的衰老.
关键词： 沉默信息调节因子2同源蛋白1 去乙酰化 椎间盘退变 软骨终板细胞 细胞衰老 -
IL-1β 诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞炎性退变的细胞模型研究
目的 通过IL-1β体外诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞建立退变细胞模型,并研究其作用机制.方法 10 ng/ml IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞24h后,用cck-8法检测不同时间点IL-1β对软骨终板细胞增殖作用的影响,透射电镜观察细胞退变情况,细胞免疫荧光和Western blot检测细胞退变相关蛋白表达.结果 诱导组细胞较正常组细胞增殖减慢,细胞肥大化比例增加,出现线粒体肿胀、核扭曲、染色质边集,染色质及胞质松散等细胞坏死及凋亡表现,且colⅡ、Aggrecan表达下降,colX、MMP-1、MMP-3、MMP-13、TIMP-1表达增加.结论 IL-1β可诱导软骨终板细胞发生退变.
