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DD3和PSA基因在前列腺癌组织中的定量表达分析
目的 探讨DD3 mRNA和PSA mRNA在前列腺组织中表达的临床意义及诊断前列腺癌(PCa)的价值.方法 荧光定量RT-PCR法分析21例PCa组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织DD3 mRNA和PSA mRNA的表达,ROC曲线对DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA比值诊断PCa的价值进行分析.结果 PCa组织中DD3 mRNA、PSA mRNA表达量和DD3 mRNA/PSA mRNA比值均显著高于BPH组织,差异有统计学意义(P＜0.01).不同临床分期和分化程度之间DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA比值差异无统计学意义(P值均＞0.05).ROC曲线分析结果显示,DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA的曲线下面积分别为0.937、0.755和0.839.当DD3 mRNA、PSA mRNA和DD3 mRNA/PSA mRNA临界值分别为1.4×105拷贝/mg组织、3.0×107拷贝/mg组织和5.0×10-3时,敏感性分别为90.5%、81.0%和81.0%,特异性分别为85.0%、62.0%和66.7%.若将DD3 mRNA和PSA mRNA联合用于PCa的诊断,其特异性与DD3 mRNA相同,为85.0%,敏感性可达100.0%.结论 PCa组织中DD3 mRNA和PSA mRNA表达量均增加,但组织中DD3 mRNA的定量检测更具诊断价值,联合检测有利于提高诊断敏感性,对PCa的诊断具有一定临床应用价值.
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整合素β样1 mRNA在乳腺原发癌中的表达及其临床意义
目的 探讨乳腺原发癌组织中整合素β样1(integrin bate-like 1,ITGBL1) mRNA水平与临床病理因素的关系,评估其对预测患者预后的临床价值.方法 采用实时定量RT-PCR方法 检测180例行乳腺癌根治术并随访3年以上的乳腺浸润性导管癌组织中ITGBL1 mRNA的水平.采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定ITGBL1 mRNA水平分组的阈值;用χ2检验比较组间差异;用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;用Log-rank时序检验比较组间生存期的差异.结果 ER阴性乳腺癌患者的ITGBL1 mRNA高表达率低于ER阳性患者(χ2=7.475,P=0.006),组织学Ⅲ级的乳腺癌患者ITGBL1 mRNA高表达率低于Ⅰ～Ⅱ级乳腺癌患者(χ2＝4.410,P=0.036),而在不同年龄和绝经状态、肿瘤大小、淋巴结转移状态、临床分期以及PR和HER-2状态各组间比较差异无统计学意义(P>0.050).ITGBL1 mRNA低表达组患者3年无转移生存率低于高表达组,差异有统计学意义(χ2=4.569,P=0.033);3年无病生存率、5年无病生存率和5年无转移生存率组间比较虽差异无统计学意义(P>0.050),但随ITGBL1 mRNA表达降低而有下降趋势.结论 乳腺原发癌中ITGBL1 mRNA高表达是ER阳性乳腺癌的生物学特征之一;ITGBL1 mRNA低表达的乳腺癌恶性程度高、组织分化差且患者预后不良,提示ITGBL1基因是潜在的乳腺癌预后预测分子标志物.
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流体剪切应力对EA.Hy926细胞IL-8基因表达的影响
目的 探讨流体剪切应力作用下,人内皮细胞株EA.Hy926细胞白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)基因的表达规律.方法 观察体外培养的人内皮细胞株EA.Hy926细胞的生长形态,检测EA.Hy926细胞Ⅷ因子相关抗原以及Weibel-Palade小体的表达情况,并以低剪切应力(0.420 Pa)作用于人内皮细胞株EA.Hy926细胞,定量RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达情况.结果 EA.Hy926细胞在体外生长特性类似于人脐静脉内皮细胞,并表达内皮细胞特征性的Ⅷ因子相关抗原以及Weibel-Palade小体,与未受剪切应力对照组相比,1 h时 IL-8 mRNA表达量明显增加,2 h时IL-8 mRNA表达量至峰值,3 h后随着剪切应力作用时间的延长,IL-8 mRNA表达量逐渐下降.直至实验结束(12 h),IL-8 mRNA表达量仍高于未受应力对照组.不同流体剪切应力水平(0.182、0.420、1.000、1.640 Pa)作用人内皮细胞株EA.Hy926细胞2 h后,IL-8 mRNA 的表达与剪切应力作用强度呈反变关系.结论 流体剪切应力可以诱导人内皮细胞株EA.Hy926细胞表达IL-8,并且这一表达规律与人脐静脉内皮细胞相似,EA.Hy926细胞可作为研究流体剪切应力影响内皮细胞IL-8表达研究的细胞源.
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纤维粘连蛋白mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义
目的:探讨乳腺癌纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义.方法:采用荧光定量RT-PCR方法,检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌以及116例乳腺原发癌的FN mRNA表达量,比较30例乳腺原发癌和淋巴结转移癌的FN mRNA表达量,分析FN mRNA表达量与乳腺癌临床病理因素的关系.结果:30例乳腺淋巴结转移癌FN mRNA表达量低于原发癌(P＜0.05).肿瘤＞5cm的FN mRNA表达量低于肿瘤≤5cm(P＜0.05),临床期的FN mRNA表达量低于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05),淋巴结4枚以上阳性FN mRNA表达量低于1～3枚阳性(P＜0.05),雌、孕激素受体阳性的FN mRNA表达量高于雌、孕激素受体阴性.FN mRNA表达量与病理类型、组织学分级、Her-2表达、CA153表达无关.结论:FN mRNA表达量在临床早期及淋巴结转移早期上调,随着肿瘤的进展表达量下调.FN mRNA转录水平的表达与乳腺癌转移有关.
关键词： 乳腺癌 纤维粘连蛋白(FN) 转移 定量RT-PCR -
POSTN mRNA在乳腺原发癌中的表达及其临床意义
目的:前期研究发现POSTN mRNA表达在乳腺癌的淋巴结转移癌中较其配对的原发癌下调,是潜在的乳腺癌转移相关基因.本研究进一步通过大样本临床病例验证,阐明乳腺癌组织中POSTNmRNA水平与乳腺癌临床病理因素的关系,并评估其预测患者预后的临床价值.方法:采用实时定量RT-PCR方法检测174例乳腺浸润性导管癌原发癌组织中POSrrN mRNA水平;采用ROC(Receiver Operating Characteristic)曲线确定POSTN mRNA水平分组的阅值;X2检验比较组间差异;Kaplan-Meier法绘制生存曲线;Log-rank时序检验比较组间生存期的差异.结果:POSTN mRNA水平在雌激素受体(ER)阴性乳腺癌组织中低于ER阳性组织(P=0.007),在其它临床病理因素各组间无统计学差异.ER阳性乳腺癌患者POSTN mRNA低水平组3年无瘤生存率和无转移生存率均低于高水平组(P=0.052,P=0.033),而在其它临床病理因素各组中POSTNNmRNA状态与患者预后无关.结论:POSTNmRNA高表达是ER阳性乳腺癌的生物学特征之一,且POSTN mRNA低表达是ER阳性乳腺癌患者早期复发转移的危险指征.
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Foxf2表达与乳腺癌转移及预后的关系
目的:前期研究发现叉头框(forkhead box,Fox)转录因子Foxf2 mRNA在乳腺淋巴结转移癌中的表达较对应的原发癌下调,是潜在的乳腺癌转移相关基因.本研究通过大样本临床病例检测(分析),阐明乳腺原发癌组织中Foxf2 mRNA水平与临床病理因素的关系,评估其对预测患者预后的临床价值.方法:采用实时定量PCR方法检测233例乳腺原发癌组织中Foxf2 mRNA表达水平;χ2检验比较组间差异;Kaplan-Meier法绘制生存曲线;Log-rank时序检验比较组间生存期的差异.结果:Foxf2 mRNA低表达率在乳腺癌临床Ⅰ～Ⅱ期低于Ⅲ期组(P=0.003),ER阳性组低于ER阴性组(P=0.014),随着阳性淋巴结数的增加,Foxt2 mRNA低表达率逐渐升高(P=0.041),Foxf2 mRNA低水平组患者5年无病生存率低于高水平组(P=0.001).结论:Foxf2 mRNA低表达与肿瘤进展和患者预后不良相关,Foxf2 mRNA水平是潜在的乳腺癌患者预后分子标志物.
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缺氧诱导因子在食管鳞癌中的表达研究
目的:探讨食管鳞癌中缺氧诱导因子HIF-1α的表达及其与临床病理之间的关系.方法:采用荧光定量RT-PCR和免疫组化分别测定食管鳞癌组织和正常组织HIF-1α表达水平.对比分析HIF-1α在食管鳞癌组织和正常组织中的表达以及HIF-1α与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移、肿瘤组织分化程度之间的关系.结果:食管鳞癌组织中HIF-1α mRNA表达高于食管正常组织(P=0.14),食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白阳性率50%,明显高于正常组织的14%.HIF-1αmRNA表达趋向于与淋巴结转移相关(P=0.73).HIF-1α蛋白表达在胞核和(或)胞浆中,HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移、肿瘤组织分化相关(分别P=0.013、P=0.028).结论:肿瘤组织中HIF-1α表达高于正常食管组织,其表达除蛋白水平受缺氧调节外,还可能存在转录及转录后水平调节;HIF-1α亦与淋巴结转移和肿瘤组织分化程度密切相关.因此,HIF-1α有可能作为反映食管癌诊断及进展的生物学指标,成为抗血管生成治疗的靶点.
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miRNA-30c在结直肠癌的表达与预后相关性分析
目的 探讨结直肠癌中miRNA-30c的表达与结直肠癌患者的临床病理及预后的相关性.方法 采用实时定量PCR方法检测200对结直肠癌组织和邻近正常组织的miRNA-30c的表达水平,并对其与临床特征和预后的关系进行了统计分析.结果 与正常的相邻组织相比,结直肠癌组织标本miRNA-30c的表达水平显著降低(P<0.001).miRNA-30c的表达与肿瘤大小(P=0.012)、TMN分期(P=0.002)和淋巴结转移(P=0.004)呈正相关.单因素分析显示,miRNA-30c表达低的患者总生存明显短于表达水平较高的患者(P<0.001).多因素分析显示miRNA-30c低表达可能是预后不良的独立预后因子(P<0.001).结论 miRNA-30c可以用于预测结直肠癌患者的预后,并对选择合理的治疗措施有一定帮助.
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RNA干扰抑制BUB1基因表达对染色体分离的影响
目的:研究BUB1基因表达调控对染色体分离的影响.方法:用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因BUB1的mRNA水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析.结果:干扰后BUB1基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的21.80%,染色体数目异常率均值由干扰前5.02%上升到29.61%.经统计分析,RNA干扰前后BUB1基因mRNA水平和染色体数目异常率有显著差异.结论:BUB1基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系.
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原发性肝细胞癌患者转化生长因子β1的基因表达及临床意义
目的 研究转化生长因子β1(TGF β1)mRNA在原发性肝细胞癌患者中的表达及其临床意义.方法 用RT-PCR加Dot Blot法检测原发性肝细胞癌患者肝组织和外周血单个核细胞(PBMC)中TGF-β1 mRNA水平,并以正常肝组织和正常人的PBMC为对照.结果 TGF-β1mRNA水平在原发性肝细胞癌患者组肝组织(2.22±0.84,n=16)和PBMC中(1.83±1.2,n=25)比较,差异无显著性(P＞0.05),但两者均高于正常肝组织(0.94±0.76,n=5) 和正常人的PBMC(0.62±0.40,n=16)水平.结论 TGF-β1 mRNA水平与原发性肝细胞癌有关,PBMC中TGF-β1mRNA检测可望作为一项代替肝组织活检的指标,其表达水平与肝癌有关.
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人类激肽释放酶基因4、5在卵巢癌中的表达
目的 研究人类激肽释放酶基因4(KLK4)与激肽释放酶基因5(KLK5)在卵巢癌组织中的表达水平,探讨其在恶性肿瘤中的作用机制.方法 50例卵巢肿瘤组织标本分为恶性肿瘤组(n=23)、交界性肿瘤组(n=6)和正常或良性肿瘤组(对照组,n=21).采用荧光定量RT-PCR技术对各组卵巢肿瘤组织标本进行检测,获得KLK4与KLK5的表达水平.结果 KLK4在卵巢癌中的表达水平显著高于对照组(P＜0.05);KLK5在卵巢癌和交界性卵巢肿瘤中的表达水平也显著高于对照组(P＜0.001);KLK5在浆液性囊腺癌中的表达水平显著高于其他组织学类型的恶性肿瘤(P＜0.05)和对照组(P＜0.001),且低分化浆液性囊腺癌的表达水平高于中分化浆液性囊腺癌的表达(P＜0.05).KLK5的表达水平与血清CA125水平呈正相关.结论 KLK5在卵巢癌,尤其是浆液性囊腺癌的发生与发展过程中可能具有潜在促进作用.
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定量RT-PCR检测肝细胞P450酶基因与苦参的关系
目的明确肝脏微粒体中细胞色素P450酶活性与苦参中对抗CVB病毒的有效成分抗柯注射液药物剂量及用药时间的关系.方法用定量RT-PCR法,在Begale犬长毒试验的不同时期(45、90、135 d),用不同剂量抗柯注射液(7.5、15、30 mg/kg)检测肝脏微粒体中细胞色素P450酶基因(β-actin/P450)的特异mRNA.结果 P450酶基因(β-actin/P450)特异信使核糖核酸mRNA随所用抗柯注射液剂量及用药时间而增加(P＜0.01).结论 P450的比值随药物剂量及时间延长而上升,可视为机体抵抗中毒而作出的一种适应性反应,可用于有关药物的毒理研究.
关键词： 定量RT-PCR 肝微粒体CYP450 长毒试验 苦参 抗柯注射液 -
定量RT-PCR法对"苦参"在心肌炎模型中药效学研究
目的用定量RT-PCR法检测"苦参"中抗柯萨奇B病毒有效成份"抗柯注射液",在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗"柯萨奇B病毒"的药效.方法取48只雄性18～22g8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A～H共8组,每组6只.1.各治疗组(A～F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml104TCID50CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d.2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.结果空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量"抗柯注射液"治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(%)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即"抗柯"剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5～30mg/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用.结论用定量RT-PCR法检测到"抗柯注射液"对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,小有效剂量为5mg@kg-1@d-1.
关键词： 苦参 抗柯注射液 柯萨奇B病毒 定量RT-PCR 病毒性心肌炎小鼠模型 -
定量RT-PCR检测穿孔素mRNA方法的建立与临床初步应用
目的建立检测穿孔素mRNA的定量RT-PCR方法。方法用限制性内切酶制备竞争性模板，建立定量RT-PCR方法，检测正常人及部分肿瘤病人外周血的穿孔素mRNA水平。结果 6例正常人的外周血穿孔素mRNA含量为0.51±0.40 pmol/ml,消化道肿瘤患者的穿孔素mRNA水平与正常相比，有显著差异(P<0.01)，乳腺肿瘤及白血病患者的穿孔素mRNA水平与正常人相比，没有差异。结论穿孔素mRNA水平的降低可能是肿瘤发生的一个重要原因；除穿孔素途径以外，还存在别的抗肿瘤的效应机制。
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肾透明细胞癌患者血清miR-362的异常表达及意义
目的 检测肾透明细胞癌患者血清miR-362水平,探讨其作为肾透明细胞癌分子诊断指标的可能性.方法 采集107例肾透明细胞癌患者治疗前血清(其中TNM Ⅰ期76例、Ⅱ期16例、Ⅲ期2例、Ⅳ期8例及未知者5例),用实时荧光定量RT-PCR法检测各组miR-362含量,并以107例年龄、性别匹配的健康人作为对照组.结果 miR-362在肾透明细胞癌患者血清中的相对含量为0.81(0.65,1.15),与健康对照组0.62(0.46,0.78)相比,表达水平明显升高(U=3 122,P ＜0.01).Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅳ期患者血清miR-362的相对含量分别为0.76(0.66,0.95)、0.76(0.66,0.95)和0.69(0.37,1.03),均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(U分别为2 197、474和98,P均＜0.01).miR-362诊断肾透明细胞癌的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.727(95％ CI:0.661 ～0.793).当cut off值为0.696时,miR-362诊断肾透明细胞癌的敏感性和特异性分别为64.5％和63.6％.进一步对TNM Ⅰ期患者进行分析,结果其AUCROC为0.715(95％ CI:0.641～0.790).当cut off值为0.696时,miR-362诊断TNM Ⅰ期患者的敏感性和特异性分别为65.3％和63.6％.结论 早期肾透明细胞癌患者血清中miR-362水平升高,具有一定的早期诊断潜能.
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联用免疫磁珠及定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移
目的探讨联用免疫磁珠和定量RT-PCR检测胃癌患者外周血微转移的方法学及意义.方法首先将人胃癌MGC-803细胞以不同浓度加人到健康人外周血中,其次用淋巴细胞分离液收集单核细胞,然后等分成4份分别用4种方法处理--直接扩增(A方法)、阴性磁珠筛选(B方法)、阳性磁珠筛选(C方法)及联用阴性和阳性磁珠筛选(D方法),后用定量RT-PCR检测β2 微球蛋白mRNA和癌胚抗原(CEA)mRNA并计算出相对CEA.mRNA值.同法测定41例胃癌、10例良性胃病患者和5例健康人外周血CEA mRNA.结果参照模型中D方法测出的相对CEA mRNA值均小于A、B和C方法测出的,其检测灵敏度为每ml血含有1个癌细胞.41例胃癌患者中用A、B、C和D方法测出的阳性例数分别为19例(46.34%)、23例(56.10%)、22例(53.66%)和27例(65.85%);D方法与A方法比较,P＜0.05.D方法检测10例良性胃病均为阴性,而用其它3种方法检测有1例阳性;5例健康人均未见扩增.结论联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和定量RT-PCR可提高胃癌患者外周血微转移的检出率.
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免疫磁珠联合定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移的临床意义
目的研究免疫磁珠联合定量RT-PCR检测胃癌患者外周血微转移的临床意义.方法提取41例胃癌患者外周血有核细胞RNA,先后加入抗人CD45免疫磁珠和抗人Ber-EP4免疫磁珠,再用定量RT-PCR检测癌胚抗原(CEA)mRNA和β 2微球蛋白(MG)mRNA,计算出相对CEA mRNA值(CEA mRNA/β2MG mR-NA).比较CEA mRNA的检出与患者性别、年龄、病变部位、组织学类型、pTNM分期、淋巴转移以及肝转移的关系.结果良性对照组与正常对照组均未见扩增;41例胃癌患者中有27例CEA mRNA阳性,其中贲门3例/6例,胃体10例/16例,胃窦14例/19例;腺癌19例/26例,粘液腺癌2例/7例,低分化癌6例/8例;Ⅰ期2例/7例,Ⅱ期5例/8例,Ⅲ期7例/10例,Ⅳ期13例/16例;淋巴转移19例/29例,肝转移8例/8例.结论正常人外周血中无CEA mRNA的表达;早期胃癌外周血可检测到CEA mRNA;CEA mRNA表达的差别在不同pTNM分期、组织学类型、有无肝转移时有显著性意义,与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴转移的关系无显著性意义.
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siRNA干扰ERK1/2表达对食管癌细胞ezrin基因的转录调控作用
目的 检测siRNA干扰细胞外信号调节激酶ERK1/2基因表达对ezrin基因的转录调控作用,探讨食管癌细胞ezrin基因的表达调控机制.方法 采用定量RT-PCR技术,检测转染ERK1/2 siRNA对食管癌EC109细胞ERK1/2和ezrin基因mRNA表达水平的影响;采用双荧光素酶报告基因分析系统.检测siRNA干扰ERK1/2表达对EC109细胞ezrin基因启动子活性的影响.结果 在食管癌EC109细胞中,转染ERK1/2 siRNA,降低ERK1/2和ezrin基因的mRNA表达水平以及ezrin基因启动子活性.结论 ERK1/2对食管癌细胞ezrin基因的转录具有调控作用.
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无症状乙型肝炎病毒携带者外周血单个核细胞穿孔素基因表达
目的:检测无症状乙型肝炎病毒携带者(ASCs)与正常对照组消减文库中的差异基因穿孔素(perforin )在相应人群中的表达.方法:分离43例ASCs和41例正常对照者的外周静脉血单个核细胞(PBMC)并提取RNA, 做定量RT-PCR检测.结果:穿孔素在HBV 携带者中表达水平是正常对照的3.58倍. 结论:穿孔素基因在ASCs高表达,对于阐明ASCs的发病机制有重要意义.
关键词： 无症状乙型肝炎病毒携带者 抑制消减杂交 定量RT-PCR -
实时定量PCR检测乳腺癌组织SCARA5基因表达及其意义
目的:检测人乳腺癌组织中SCARA5mRNA的表达情况及其在乳腺癌发生发展中的意义.方法:收集55例乳腺癌患者的乳腺癌组织及其配对癌旁正常乳腺组织,提取总RNA,采用SYBR Green1实时荧光定量RT-PCR技术检测SCARA5 mRNA表达情况.结果:在55例样本中,在45例患者中SCARA5mRNA的表达下调(81.82％),在10例患者中SCARA5mRNA的表达上调,其表达差异具有统计学意义(P＜0.05),但与临床病理因素差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:SCARA5基因在大部分乳腺癌组织中表达下调,其可能在乳腺癌的发生过程发挥重要作用.
