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医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性与SCCmec分型及同源性研究
目的 研究医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学特点,为预防和控制医院感染提供参考.方法 采用药敏纸片法(K-B法)、SCCmec分型及葡萄球菌A蛋白(spa)分型技术,2009年3-4月对烧伤科、ICU、呼吸内科、急诊科、血液内科、儿童急救科和儿童呼吸科住院患者、医务人员及环境分离的MRSA,进行了药敏试验和同源性分析,并检测其杀白细胞毒素(pvl)基因.结果 从1352份标本中分离出108株金黄色葡萄球菌,MRSA为54株占50.0％,主要分离于烧伤科42株占77.8％；分离的临床菌株总体耐药率较高,除万古霉索外耐药率均＞50.0％,未发现万古霉素耐药株；SCCmec分型结果显示,54株MRSA以Ⅲ型为主占68.5％,pvl基因均为阴性；进行spa分型研究的23株MRSA中,22株为t030,1株为t2270,呈现高度的克隆一致性.结论 医护人员MRSA带菌率较高,部分医务人员、住院患者和环境中分离的MRSA有较高的同源性,存在人与人和人与环境之间的MRSA传播.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 SCCmec分型 葡萄球菌A蛋白 -
食源性金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素和葡萄球菌A蛋白的多重PCR检测法
目的 建立食源性金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素luk-F、luk-S和葡萄球菌A蛋白SPA基因的多重PCR检测方法.方法 设计luk-F、luk -S和SPA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性；建立多重PCR快速检测方法,并对方法的特异性进行评价.结果 利用单对引物对实验室的多个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致.多重PCR反应体系:25μl套装反应液2,上、下游引物(20 μmol/L)各0.4μl,0.25μl套装反应液1,基因组模板6μl,加超纯水至50μl.扩增条件:94℃预热2 min；94℃保持30 s,54℃保持60 s,72℃保持60 s,34个循环；72℃延伸5 min.结论 该方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性,快速简便,可以同时对大量菌株进行筛选.
关键词： 食源性金黄色葡萄球菌 杀白细胞毒素 葡萄球菌A蛋白 -
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型研究
目的 明确本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的基因型别及其分布规律,探讨MR-SA菌株进化及遗传特性.方法 收集2009年1月-2012年1月鄂尔多斯中心医院门诊及住院患者非痰标本分离的MRSA菌株61株,应用SCCmec基因分型和葡萄球菌A蛋白基因多态性分析(spa)方法进行基因分型.结果 应用SCCmec的方法分离的MRSA以SCCmecⅡ、Ⅲ型为主,分别占50.8％和44.3％;应用spa的方法分离的MRSA以t030和t002为主,分别占39.3％和34.4％.结论 本地区分离MRSA以SCCmecⅢ- t030和SCCmecⅡ- t002为主.
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E-coli和Yeast菌体蛋白ELISA定量测定方法的建立
目的:提高酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的灵敏度.方法:将聚苯乙烯微孔板(PS)经过紫外线(UV)辐照后,用葡萄球菌A蛋白(SPA)预包被,再应用生物素-链霉亲和素(BSA)反应建立双抗体夹心ELISA.结果:检测低限为1.95 ng/ml,方法的批内变异分别为7.96%和8.63%.结论:为菌体蛋白的测定提供了一种新的方法.
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应用葡萄球菌A蛋白快速检测金黄色葡萄球菌的诊断价值
目的 评价应用葡萄球菌A蛋白(SPA)快速检测金葡菌的临床诊断价值.方法 200株鉴定明确的菌株(金葡菌和非金葡菌各100株)采用SPA法检测,统计检测方法 的灵敏度和特异度;118份ICU患者的痰标本,采用双盲法分别对其进行传统痰培养鉴定和SPA镜下快速检测,计算该诊断试验的评价指标,并对痰培养和SPA方法 的相关性进行分析.结果 SPA检测的灵敏度和特异度均为100%;双盲法痰标本SPA检测敏感度为100%,特异度97.7%,SPA检测和痰培养的结果 呈高度相关性(P>0.05).结论 SPA检测法可早期诊断金葡菌感染,是一项快速的、灵敏度和特异度较高的诊断试验.
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烧伤科分离MRSA菌株的耐药特征和葡萄球菌蛋白A基因分型
目的 研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考.方法 采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析.结果 分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50％以上,未发现万古霉素耐药株.spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性.结论 我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 葡萄球菌A蛋白 基因分型 -
免疫吸附治疗抗肾小球基膜抗体疾病--附5例报告
目的:探讨免疫吸附(IA)治疗对抗肾小球基膜抗体(抗-GBM)疾病患者血清抗-GBM水平的影响及其临床疗效. 方法:5例抗-GBM疾病患者,4例伴有明显肺出血,1例仅有肾损害,临床均表现为急进性肾炎,SCr 312～1 290 μmol/L.肾活检显示肾小球新月体比例26.3%～100%.血清抗-GBM抗体40.6%～203.2 RU/ml.在激素治疗同时,应用葡萄球菌A蛋白吸附柱进行免疫吸附治疗,一疗程共10次,再生血浆30～60 L. 结果:吸附治疗10次后,3例血清抗-GBM抗体转阴,随访4个月时抗-GBM抗体仍阴性.1例吸附治疗后血清抗-GBM抗体仍阳性,但较治疗前下降62.8%,进行第二个疗程吸附后,抗-GBM抗体转阴.4例伴有肺出血患者治疗后肺出血迅速消失.4例治疗前需血液透析的患者治疗后1例摆脱透析,SCr由505 μmol/L降至157 μmol/L,另3例肾活检病理显示100%新月体形成者仍需维持性血液透析.1例治疗前不需血液透析者肾功能保持稳定. 结论:葡萄球菌A蛋白免疫吸附能有效降低血清抗-GBM抗体水平,迅速缓解肺出血,但改善肾功能的疗效受肾脏损害程度的影响.
关键词： 免疫吸附 葡萄球菌A蛋白 抗肾小球基膜抗体疾病 -
葡萄球菌A蛋白－聚乙烯亚胺交联物的制备及其理化特性观察
目的：制备葡萄球菌A蛋白－聚乙烯亚胺交联物（SPA-PEI交联物），并观察其理化性状。方法采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基3-（2-吡啶二硫基）丙酸酯（SPDP）化学偶联法将葡萄球菌A蛋白（SPA）与聚乙烯亚胺（PEI）化学交联，用SephadexG75柱层析法纯化SPA-PEI交联物。采用SDS-PAGE法鉴定交联物的纯度；紫外分光光度法测定交联物的吸收峰；采用粒度及Zeta电位分析仪测定交联物的粒径及表面Zeta电位、酸碱滴定法测定交联物的质子缓冲能力。结果 SPA与PEI共价结合形成SPA-PEI交联物，且交联物的纯度较高。SPA-PEI交联物在280 nm处有一吸收峰，其吸收曲线与SPA类似。SPA-PEI交联物粒径为（185．0±28．5）nm，表明Zeta电位为（38．0±6．6）mV，提示其粒径范围合理，带有较强的正电荷，可结合带负电荷的核酸片段。SPA-PEI交联物的酸碱滴定曲线与PEI类似，均有一个明显的缓冲平台，提示该交联物具有较强的质子缓冲能力。结论成功地制备出纯度良好的SPA-PEI交联物。SPA-PEI交联物粒度分布较合理、表面带较强正电荷、并且具有较强的质子缓冲能力。
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究
目的 了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景.方法 回顾分析华西医院127例MRSA感染者的病例资料,用SCCmec多重PCR技术、葡萄球菌A蛋白(spa)分型技术和多位点测序分型技术对其中10株MRSA临床分离株进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素基因.结果 病例资料显示127株MRSA中3株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),其余均为医院获得性MRSA(HA-MRSA).进行分型研究的10株MRSA中,7株HA-MRsA为SCCmecⅢ-ST239-PVL(一),呈现高度的克隆一致性,spa分型进一步显示4株为t030,另外3株为t037;CA-MRSA s19165分型为ST8-t008,与USA300属同一克隆,并且携带SCCmecⅣa和PVL基因,符合USA300一般基因特征.另外2株CA-MRSAs5301、s29635均为SCCmecⅣa-ST59-t437,与我国其他地区的报道不同.结论 该院分离的MRSA仍以医院获得性为主(124/127),HA-MRSA呈现高度的克隆一致性,并与我国的主要流行株为同一克隆;分离到与美国主要CA-MRSA流行株USA300相同克隆的菌株,另外分离到的CA-MRSA ST59-t437克隆株在我国其他地区未有报道.MLST和spa分型技术是金黄色葡萄球菌分子流行病学研究的更为简便快速的方法.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 多位点测序分型 葡萄球菌A蛋白 -
基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片的研究
目的:研制基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片.方法:以AT切型、基频10MHz的石英晶体为材料,设计压电免疫芯片.采用蛋白A法将禽流感H5亚型单克隆抗体和抗原的反应液固定在石英晶体的金膜电极表面,构建可用于禽流感检测的压电免疫芯片.结果:蛋白A法若先固定抗体,将无法检测到抗原:但可先进行抗原抗体反应再与蛋白A结合以达到定性检测的效果.结论:蛋白A法可作为禽流感压电免疫芯片抗体固定的方法,但在应用方面存在一定的局限性.
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免疫传感器载体上SPA法固定抗体的条件探讨
目的 以乙肝病毒表面抗体为研究对象,摸索在免疫传感器载体上用葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein, SPA)固定抗体的佳条件.方法 用SPA法在载体上固定系列浓度酶标记抗体,绘制抗体浓度-吸光度曲线,寻找SPA与抗体的佳结合条件.结果 实验表明5 μl浓度为1 mg/ml的SPA与10 μl浓度为300 mIU/ml的抗体固定效果佳.结论 用SPA法在免疫传感器载体上固定乙肝病毒表面抗体,能使检测达到较好的重现性、稳定性、线性和较宽的检测范围,为生物传感器用于临床免疫检测打下基础,具有实际的应用价值.
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无标记检测CD4+T淋巴细胞的免疫传感器构建
目的 构建一种无标记检测CD4+T淋巴细胞的免疫传感器.方法 采用葡萄球菌A蛋白(SPA)法定向固定单克隆抗体于金叉指微阵列电极表面以捕获CD4+T淋巴细胞,并用循环伏安法(CV)扫描对金叉指微阵列电极表面的修饰情况进行表征,后通过电化学交流阻抗谱法(EIS)对免疫传感器捕获的CD4+T淋巴细胞进行阻抗检测,通过等效电路拟合获得的阻抗值变化绘制标准曲线.结果 该免疫传感器检测CD4+T淋巴细胞的线性范围是(5.0×103-5.0×106)/mL,检测下限为5.0×102/m L.结论 该免疫传感器的结果 准确可靠,检测过程简便,价格低廉,有望用于实时检测系统,为实现快速、准确、价廉的CD4+T淋巴细胞分类计数提供帮助.
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压电免疫芯片检测禽流感病毒H9亚型抗原的方法研究
目的 为用压电免疫芯片检测禽流感病毒抗原寻找一种可行的抗体固定方法.方法 以AT切型、基频10 mHz的石英晶体为材料,分别采用聚乙烯亚胺-戊二醛交联法、葡萄球菌A蛋白法将禽流感病毒H9亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面构建禽流感压电免疫芯片,用于检测禽流感病毒H9抗原.结果 ①聚乙烯亚胺-戊二醛交联法构建的压电免疫芯片检测禽流感病毒H9抗原的线性范围为稀释度1∶10～1∶160,Y=-8.868X+73.514,r2=0.966 6,与H5抗原不存在交叉反应,与鸡胚分离法的符合率达到91.7%.②葡萄球菌A蛋白法若先固定抗体,则无法检测到抗原;如先进行抗原抗体反应再与葡萄球菌A蛋白结合,可以达到定性检测的效果.结论 聚乙烯亚胺-戊二醛交联法适合于构建禽流感病毒H9亚型抗原压电免疫芯片,其检测特异度、重复性和线性均满足检测要求;葡萄球菌A蛋白法在检测抗原时存在局限性,尚不能直接检测抗原.
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应用斑点金免疫渗滤试验测定阴道加特纳菌抗体
目的 探讨金免疫测定技术在免疫学检验的临床应用,建立阴道加特纳菌抗体检测的方法.方法 用斑点金免疫渗滤试验.结果 阴道分泌物涂片找线索细胞阳性率为21%,此法对加特纳菌抗体阳性检出率为38%;χ2检验P＜0.01.结论 此法快捷简单,可间接测定加特纳菌的感染.
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探讨金黄色葡萄球菌临床监测与葡萄球菌A蛋白快速检验
目的 对金黄色葡萄球菌(SA)临床监测与葡萄球菌A蛋白快速检验进行研究分析.方法 选取116株金黄色葡萄球菌(SA)作为实验对象,对其分布特性、耐药性进行分析,构建螯合免疫磁性微球,并对其表面形态、大小、表面基因吸收峰进行测定,之后采用磁性微球分离SPA,用于SA检测.结果 116例金黄色葡萄球菌(SA)分离自痰液59株(50.86％)、分泌物43株(37.07％)、血液9株(7.76％)、胆汁3株(2.59％)、器械导管2株(1.72％);对金黄色葡萄球菌(SA)检验出出甲氧西林敏感SA52株,且金黄色葡萄球菌(SA)磁性微球分散性较好,对于SA样品的灵敏度进行检测,可达到100CFU,且在一定的条件下可维持3周以上的活性.结论 金黄色葡萄球菌(SA)在临床应用上,其耐药性较强,免疫磁性微球技术可用于金黄色葡萄球菌(SA)的快速检测,具有较高的临床推广价值.
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金标记免疫渗滤法检测GV抗体
细菌性阴道病(bacterial vaginosis GV)是阴道内需氧或兼性厌氧乳酸杆菌被另一组以厌氧菌和阴道加特纳菌(Gardnerella vaginalis GV)为主的细菌及支原体所取代,在阴道内过度生长,造成阴道正常菌群微生态平衡失调,而引起的非特异细菌性阴道病,GV是其中一类重要的病原菌[1].
