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微滴式数字PCR技术用于检测产前诊断标本母体细胞污染的初步研究
目的 探讨微滴式数字PCR(DD-PCR)技术检测产前诊断标本母体细胞污染的临床应用价值.方法 2015年10月至2016年12月间以40例因夫妇双方均为地中海贫血基因βIVS-Ⅱ-654/βN杂合携带者、在广州医科大学附属广东省妇女儿童医院行侵入性产前诊断的孕妇作为观察样本.通过设计特异性引物、探针,建立母体细胞污染程度梯度50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%模型,采用DD-PCR技术及短串联重复序列的荧光定量PCR技术检测产前诊断标本母体细胞污染,分别评估两种检测方法的敏感性;并分别检测40组产前诊断标本,以比较DD-PCR技术与荧光定量PCR技术检测母体细胞污染的准确性.结果 DD-PCR技术可以检测到产前诊断标本中低至1.5625%的母体细胞污染,检测结果与母体细胞污染程度梯度改变基本相符,而荧光定量PCR技术只能在母体细胞污染≥6.25%时才提示产前诊断标本存在400 bp的母源性特有峰.DD-PCR技术共检测到6例(15%,6/40)产前诊断标本存在母体细胞污染,荧光定量PCR技术只检测到3例母体细胞污染的产前诊断标本(7.5%,3/40),两种检测方法比较,DD-PCR技术的准确性更高(P=0.002).结论 DD-PCR技术可对产前诊断标本进行母体细胞污染精确定量,并具有较高的敏感性,具有良好的临床应用价值.
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产前诊断标本的母体细胞污染及其影响
目的 评估国内现有的有创性产前诊断技术中母体细胞污染(MCC)的发生率及其对产前诊断结果的影响.方法 采用单中心大样本量研究方案,在2011年10月至2012年1月期间采用PowerPlex 16系统对519例孕中期羊水标本、57例孕早期绒毛标本及对应的576例孕妇外周血标本进行短串联重复序列(STR)分型,根据分型结果判断是否存在MCC及MCC的程度；结合核型分析结果和分子遗传学诊断结果分析MCC对产前诊断的影响.结果 3.1％(16/519)未经培养的羊水标本和1.3％(7/519)培养后的羊水标本存在MCC;5％(3/57)未经培养的绒毛标本存在MCC.MCC对于正常核型女性胎儿的核型分析无影响,但是增加了男性胎儿被误判为两性嵌合体,或者异常核型胎儿被误判为异常/正常核型嵌合体的风险.MCC对不同分子遗传学诊断方法的影响不同,对于基于PCR的基因定性分析,10％ MCC即可造成错误的分析结果；对于定量分析,10％及以上的MCC即对分子遗传学诊断结果产生干扰,30％ MCC可导致错误的诊断结果.结论 MCC可能影响产前诊断结果,核型为嵌合体的产前诊断羊水标本和可疑MCC的绒毛标本均应当进行MCC排除实验；MCC对于分子遗传学诊断结果的影响更为明显,建议产前分子遗传学诊断应尽可能常规进行胎儿组织标本的MCC排除实验.
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生物技术药物中残留DNA检测方法的比较
生物技术药物是所有以生物质为原料的生物活性物质及其人工合成类似物通过现代生物技术制得的药物,包括细胞因子、重组蛋白、抗体、疫苗和寡核苷酸等,临床上已开始广泛应用,为制药工业带来了革命性变化.但是生物技术药物中残留DNA可能存在安全性问题,因此应尽可能将产品中残留DNA的水平降到低.新版美国药典将推荐实时定量PCR法作为生物技术药物中宿主残留DNA检定的唯一标准方法.该法的技术优势在于序列特异性高、灵敏度高、重现性好,还可以实现定量检测,使得结果更为精确,从而为生物技术药物企业在工艺研究和成品质量控制方面提供了可靠的检测手段.此综述对4类检测方法进行了比较,重点比较两种实时定量方法.
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗宿主细胞DNA残留量检测方法研究
目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留量的检测方法.方法 提取Vero细胞基因组DNA,制备地高辛标记探针.比较样品不同处理方式的检测差异.对建立的残留DNA检测方法进行特异性、灵敏度和稳定性验证.结果 Vero细胞基因组DNA的质量浓度为295 μg/ml,260nm与280nm波长处的吸光度比值为1.88.探针灵敏度达到0.01 pg/μl.采用苯酚抽提方式处理DNA参考品,检测灵敏度为1 ng;而用碘化钠处理DNA参考品,灵敏度达到10 pg.特异性检测表明,探针与非同源DNA无杂交.灵敏度和稳定性检测结果显示,探针于-70℃保存9个月,灵敏度仍为10 pg.结论 建立了Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留量的检测方法.采用碘化钠提取DNA,回收率高,操作简单,适用于Vero细胞的残留DNA检测.
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PCT鉴别凝固酶阴性葡萄球菌血流感染与污染价值
目的 探讨血清降钙素原(PCT)鉴别儿童凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)血流感染与污染价值.方法 回顾性分析我院2014年通过血培养检出CNS的128例病儿的临床资料,根据血流感染诊断标准,将病儿分为血流感染组(62例)及污染组(66例).比较两组病儿血清PCT等实验室指标,并根据受试者工作特征曲线分析PCT鉴别儿童CNS血流感染与污染的诊断性能.结果 血流感染组内科住院病儿比例显著低于污染组(x 2=20.976,P＜0.01),血清PCT水平显著高于污染组(Z=5.20,P＜0.01).PCT鉴别血流感染与污染的灵敏度、特异度、准确度分别为86.6％、82.5％和85.0％,佳截断值为0.195 μg/L.结论 血清PCT对鉴别儿童CNS血流感染与污染具有重要临床价值.
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Identifiler体系在绒毛取样术中取材鉴定的应用
[目的]研究利用Identifiler体系对孕早期绒毛取材进行鉴定,以避免母体DNA的污染影响产前诊断的准确性.[方法]收集15例需行绒毛取样产前诊断的早孕期病人.用Identifiler体系的16基因位点进行检测病人外周血及绒毛DNA,判断绒毛DNA是否存在污染,从而决定是否利用绒毛进行产前基因诊断.[结果]检出2例存在母体DNA污染,于孕中期重新取羊水进行产前基因诊断,13例判断不存在污染的绒毛DNA进行基因诊断,其结果与出生后新生儿的结果完全符合.[结论]Identifiler体系在判断孕早期绒毛取样术取材的污染鉴定方面,有着非常准确的作用,可以考虑采用.
关键词： Identifiler体系 绒毛取样术 取材鉴定 DNA污染 产前基因诊断 -
法医DNA实验室污染问题分析与对策
DNA污染是指生物物证检材在提取至检验的过程中,混入含DNA的外源性物质,造成DNA检验结果的改变[1].避免DNA污染,以获得稳定、可靠的检验结果,是法医DNA实验室应高度关注的问题.本文统计了所在法医DNA实验室2008年1月至2013年4月发生的DNA污染情况的记录,分析并探讨其成因与防控措施.
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环氧乙烷消杀DNA污染效果初探
目的 初探环氧乙烷消杀DNA污染的效果.方法 收集98例分别含有唾液、皮屑、汗斑、毛发、血斑、肋软骨的法医物证样本,分两组进行环氧乙烷灭菌6h和8h,提取DNA后扩增,使用3130XL或3500XL测序仪检测进行STR分型.结果 EO 6h 组44例样本中有2例口腔拭子检出阳性结果,EO 8h 组54例样本中有1例毛发检出阳性结果,阳性样本STR图谱表明仅有少量DNA残留,其余生物样本未检测到STR图谱.结论 环氧乙烷能有效消杀DNA污染,可适用于DNA检验耗材的灭菌.
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泥土污染胶带上脱落细胞DNA检验1例
1 案例1.1 简要案情某年2月春节期间,某县夜间连续发生多起抢劫停在偏僻路段轿车内青年男女的案件.嫌疑人蒙面持刀、戴手套将车内人员挟持到山上,用胶带捆绑在山上逼问受害人的银行卡密码.现场勘验中仅提取到一段被雨水淋湿且附着大量黄泥土的胶带(图1),为侦破案件,对胶带进行DNA提取、分型.
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二步擦拭转移联合硅珠法提取高度污染检材DNA 2例
1 案 例1.1 简要案情案例1:某日凌晨2:00左右,在某国道汽车西站路段发现一名老年妇女因头颈部严重碾压伤死亡,民警通过视频监控摸排,找到两辆肇事嫌疑车辆.经仔细观察发现,在其中一辆厢式货车右后轮内侧有一处污泥混杂的疑似人体血迹.案例2:某木材厂内发现一男子疑似被车辆撞击死亡,无现场目击证人,现场勘验发现两辆转运木材的推土汽车为肇事嫌疑车辆.经仔细观察发现,其中一辆车左前轮外侧缘有疑似人体血斑痕迹,表面黏附大量木屑.
