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蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰在妇科肿瘤中的研究进展
妇科恶性生殖系统肿瘤在中国具有发病率高、病死率高和症状隐匿等特点.虽然目前对于妇科肿瘤的研究比较多,但是缺乏有效的特异性分子靶向研究.故寻求针对妇科恶性肿瘤的新型早期诊断标志物或新的治疗靶点已经成为临床研究的关键.蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰是广泛存在于细胞内的一种翻译后修饰,随着科学技术的不断发展,不仅发现多种蛋白质可以被O-GlcNAc糖基化修饰,而且发现在部分肿瘤中都存在O-GlcNAc糖基化修饰的异常表达.蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰逐渐成为分子领域的研究热点,有望成为新的肿瘤标志物或是分子靶点治疗.本文就O-GlcNAc糖基化修饰的形成过程、修饰过程、潜在功能及其在妇科肿瘤发生发展中的作用作一综述.
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O-GlcNAc糖基化对Nalm-6细胞生物学行为及依托泊苷诱导凋亡的影响
目的 研究O连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化及乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)对Nalm-6细胞生物学行为及对依托泊苷(Vp16)诱导凋亡的影响.方法 利用OGT抑制剂Alloxan构建低O-GlcNAc修饰的Nalm-6细胞模型,CCK-8法检测Alloxan对细胞增殖的影响,流式细胞术检测Alloxan对细胞凋亡及细胞周期的影响;以不同浓度的Vp16处理Nalm-6细胞12 h,Western blot检测O-GlcNAc糖基化修饰程度及OGT表达量的变化;以Alloxan处理Nalm-6细胞24 h后再加入Vp16(5μg/ml)处理12 h,应用流式细胞术检测不同组别细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况.结果 随着Vp16浓度的增加,Nalm-6细胞O-GlcNAc修饰及OGT表达均逐渐上调(P<0.05);Alloxan可抑制Nalm-6细胞增殖,诱发Nalm-6细胞凋亡[(15.190±2.539)%对(21.910±4.105)%,P=0.007],阻滞细胞周期[G1期:(43.534±4.453)%对(57.322±6.091)%,P=0.003;S期:(50.747±5.937)%对(37.201±4.661)%,P=0.001];Alloxan可抑制Vp16诱导的Nalm-6细胞凋亡[(75.195±13.845)%对(52.741±10.815)%,P=0.011],并伴随Bax表达下调(5.496±1.998对2.950±0.703,P=0.015)、Bcl-2表达上调(0.454±0.125对0.803±0.223,P=0.013).结论 通过抑制OGT而改变Nalm-6细胞O-GlcNAc修饰程度可影响其增殖、凋亡、改变细胞周期并抑制Vp16诱导的细胞凋亡.
关键词： Nalm-6细胞 O-GlcNAc 乙酰氨基葡萄糖转移酶 依托泊苷 糖基化 -
O-GLcNAc糖基化介导的β-catenin水平变化对卵巢癌细胞增殖的影响
目的:探讨O-GLcNAc糖基化修饰对卵巢癌细胞内β-catenin水平以及细胞增殖的影响.方法:利用慢病毒转染技术构建O-GLcNAc低表达SKOV3细胞模型.利用O-GLcNAc水解酶(OGA)抑制剂PUGNAc构建高表达A2780细胞模型.流式细胞技术检测构建O-GLcNAc糖基化对细胞周期的影响.MTT法检测O-GLcNAc糖基化对细胞增殖的影响.Western blot法检测不同细胞模型内β-catenin表达情况.CO-IP法检测不同细胞模型内β-catenin的糖基化修饰水平.结果:下调细胞内O-GLcNAc糖基化水平能抑制细胞的增殖能力,上调细胞内O-GLcNAc糖基化水平能增强细胞的增殖能力.下调细胞内O-GLcNAc糖基化水平后,β-catenin表达以及糖基化修饰水平降低;上调细胞内O-GLcNAc糖基化水平后,β-catenin表达以及糖基化修饰水平增高.结论:卵巢癌细胞内O-GLcNAc糖基化水平变化能通过β-catenin对细胞增殖产生影响.
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高血糖通过HBP途径增加 SD大鼠子宫内膜细胞内β-catenin稳定性
目的：探讨高血糖通过HBP途径增加子宫内膜细胞内β-catenin稳定性的相关机制。方法50只SD雌性大鼠随机分为正常对照组、禁食组、高糖高脂组、葡萄糖胺组和葡萄糖组。高糖高脂组给予高糖高脂饲料喂养，其他组普通饲料喂养。8周后将高糖高脂组和正常对照组大鼠处死；禁食组禁食24h后处死；葡萄糖胺组禁食24h后给予葡萄糖胺2．50g／kg灌胃，3h后处死；葡萄糖组禁食24 h后给予葡萄糖5 g／kg灌胃，3 h后处死。分别取各组大鼠子宫内膜组织，检测相关蛋白和基因表达水平。结果 HSHF组和NC组相比，各饲养周空腹血糖水平均明显升高（t值2．34～2．78，均P＜0．05）。 GLU组和FASTING组相比，血糖水平明显升高（t＝3．46，P＜0．05），而GLN组和FASTING组相比血糖水平无统计学差异（t＝0．84，P＞0．05）。 Western blot检测结果相对表达量分析显示， GLN组和GLU组子宫内膜组织内β-catenin、O-GlcNAc表达量均明显高于FASTING组（ t值3．44～5．08，均P＜0．05），而GLN组和GLU组之间β-catenin、O-GlcNAc表达量均无统计学差异（t值分别为0．75、0．66，均P＞0．05）。 RT-PCR检测HSHF组Ctnnb1表达水平与NC组相比无统计学差异（t ＝0．43，P＞0．05），而β-catenin特异性靶基因CyclinD1和Axin2表达水平HSHF组明显高于NC组（t值分别为4．48、5．26，均P＜0．05）。结论高血糖能够通过HBP途径，使β-catenin的O-GlcNAc化增加，从而增加其稳定性，使进入细胞核内的β-catenin增多，持续作用于下游靶基因引起细胞异常增殖分化。
关键词： 高血糖 内膜癌 Wnt/β-catenin O-GlcNAc
