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大黄素对人慢性髓细胞性白血病K562细胞增殖与凋亡及c-myc基因表达的影响
目的:观察中药大黄素对人慢性髓细胞性白血病K562细胞株的增殖与凋亡及c-myc基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,实验组、对照组和药物试验组应用荧光染色法观察不同浓度大黄素作用后细胞形态的改变判定凋亡效果,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞内DNA的损伤程度,流式细胞仪分析细胞周期变化,RT-PCR法检测大黄素作用前后c-myc mRNA表达水平的变化.结果:大黄素对K562细胞具有明显的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.01),其96 h半数抑制浓度(IC50)约为53.28 μmol/L.大黄素作用96 h后,荧光显微镜下可见细胞核不规则,核碎裂呈新月形改变,DNA琼脂糖凝胶电泳显示,基因组DNA显现典型的凋亡细胞的梯状图谱.流式细胞仪检测可见大黄素影响细胞周期,细胞阻滞于G0/G1期.RT-PCR法检测显示c-myc基因表达减弱(P＜0.01),100 μmol/L大黄素作用后表达强度较对照组减少54%.结论:大黄素能有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是使细胞受阻于G0/G1期而进入凋亡程序,c-myc表达降低可能是大黄素诱导白血病细胞凋亡重要途径之一.
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大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制
目的:观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期时相的影响,了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制.方法:指数增长期的平滑肌细胞同步化于G0期后,加入20 mg*L-1大黄素于含胎牛血清10%(体积分数)的细胞培养液中,24 h后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗PCNA蛋白单克隆抗体染色.结果:与对照组比较,用了大黄素以后,G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,下降率为75.5%,平滑肌细胞抗PCNA单克隆抗体染色呈阴性.表明PCNA蛋白的表达受到抑制,细胞受阻于G0期.结论:抑制PCNA蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一.
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大黄素干预鹌鹑脂肪肝病变的效果
目的:观察大黄素对鹌鹑脂肪肝模型肝系数、肝脏病理形态、血脂水平的影响,分析其量效关系,并与降脂药吉非罗齐和抗氧化剂维生素E作用效果进行比较.方法:实验于2005-03/09在怀化医学高等专科学校机能实验中心完成.①选用日本种雄性鹌鹑70只,20 d龄.鹌鹑在普通饲料喂养1周后用随机抽签法分为7组,每组10只:正常对照组:饲喂普通饲料.高脂饲料组:饲喂高脂饲料(100 g普通饲料中加入猪油15 g,蛋黄5 g,胆固醇1 g);20,40,80 mg/kg大黄素组:分别饲喂高脂饲料+大黄素20,40,80 mg/kg(洪江市光华生物制品有限公司提供,粉剂,批号041226);吉非罗齐组:饲喂高脂饲料+吉非罗齐20 mg/kg(湖南康普制药有限公司生产,批号040102);维生素E组:饲喂高脂饲料+维生素E 5 mg/kg(江西天海药业股份有限公司生产,批号040627).各组均以灌胃法喂药,1次/d,连续8周.②给药结束后,采用CHO-PAP双试剂法检测血清总胆固醇水平,采用GPO-PAP双试剂法检测三酰甘油水平,采用PTA-Mg2+沉淀法检测高密度脂蛋白胆固醇水平.将鹌鹑处死,称肝质量和体质量,计算肝系数(肝质量/体质量).肉眼观察肝脏的外观形态变化.经苏木精-伊红染色后,采用德国产莱卡光学摄像显微镜(×640)观察肝脏病理形态学变化.③计量资料差异比较采用t检验.结果:鹌鹑70只均进入结果分析.①大体观察:正常对照组鹌鹑肝脏外观正常.高脂饲料组鹌鹑肝脏明显肿大,呈脂肪肝表现.各用药组外观接近正常.②肝脏病理形态:正常对照组肝脏形态正常.高脂饲料组整个肝小叶的肝细胞内出现脂肪空泡,肝细胞索排列紊乱.各用药组肝脂肪病变程度轻于高脂饲料组.80 mg/kg大黄素组作用佳.③肝系数:高脂饲料组明显高于正常对照组,20,40,80 mg/kg大黄素组,吉非罗齐组,维生素E组(2.34±0.30,1.73±0.34,2.06±0.62,1.73±0.15,1.55±0.48,1.73±0.34,1.83±0.11,P＜0.05),且随着大黄素剂量增高,肝系数逐渐降低.④血脂水平:高脂饲料组鹌鹑血清三酰甘油和总胆固醇水平明显高于其他6组(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇/总胆固醇明显低于其他6组(P＜0.05),随着大黄素剂量增高,三酰甘油和总胆固醇水平逐渐降低,高密度脂蛋白胆固醇/总胆固醇逐渐升高.结论:大黄素具有抑制肝脂肪病变、改善血脂的作用,该作用有剂量依赖性,且与吉非罗齐和维生素E作用效果相近.
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积雪草甙合大黄素对TNFα诱导肾小管上皮细胞C3上调的干预作用
目的:探讨积雪草甙合大黄素对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞(nfIEc)补体核心成分C3mRNA及蛋白表达的干预作用.方法:采用BAIB/C原代mTCE,模型组TNFα 5ng/ml诱导24小时,治疗组在TNFα诱导的同时,分别以积雪草甙1、2、4μg/ml合大黄素0.1、0.2、0.4μg/ml进行干预,于24小时后分别提取细胞上清及RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫方法(ELISA)分别检测mTEC C3mRNA和蛋白的表达水平.结果:正常BALB/C小鼠肾小管上皮细胞具有一定的C3mRNA和蛋白表达,经TNFα诱导后,C3mRNA和蛋白表达均明显上调,积雪草甙合大黄素干预后,mTEC C3mRNA及蛋白表达水平均出现不同程度的下调,呈一定的剂量依赖关系.结论:积雪草甙合大黄素能够抑制炎性细胞因子TNFα所致的肾局部C3过度产生,具有一定的免疫抑制作用.
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大黄素激活AMPK/SREBP-1通路减少脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪变性
目的 研究大黄素对游离脂肪酸(FFAs)诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的脂质调节和氧化应激作用及其可能的相关机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法测定大黄素对HepG2细胞存活率的影响;采用1 mmol/L FFAs(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导HepG2细胞脂肪变性,将HepG2细胞分为5组:正常对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组.采用油红O染色及甘油三酯含量测定评价大黄素对肝细胞脂肪变性程度的影响.流式细胞术检测各组细胞脂质蓄积引起的活性氧(ROS)的变化;Western blot检测各组细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK (p-AMPK)、固醇调节元件蛋白1(SREBP-1)的表达变化.结果 1 mmol/L FFAs处理后的HepG2细胞24h后出现大量脂滴,TG含量明显增加(P＜0.05).与模型组相比,大黄素组的脂滴减少,甘油三酯蓄积下降(P＜0.05),并呈剂量依赖性;还可以降低脂肪酸氧化后的ROS水平(P＜0.01).另外,大黄素处理后增加AMPK与p-AMPK的表达水平(P＜0.01),下调SREBP-1的表达水平(P＜0.01).结论 大黄素可抑制FFAs诱导的HepG2细胞脂肪蓄积,减轻氧化应激损伤,其作用可能与激活AMPK/SREBP-1通路有关.
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大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗及瘦素作用的影响
目的 观察大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗、瘦素的作用,探讨其防治脂肪肝的可能机制.方法 将42只SD大鼠按体重大小编号后采用随机数字表法分为2组:正常组(A组、8只),给予普通饲料喂养；高脂饲料喂养组(M组、34只),给予高脂饲料喂养.于4周末验证有脂肪肝后,M组32只大鼠按体重大小编号后用随机数字表法分为M1、M2、M3、M4四个亚组,每组8只,各大鼠饲养饲料不变,其中,M2、M3、M4组分别予低剂量大黄素、高剂量大黄素、二甲双胍干预,大黄素、二甲双胍以0.5％羧甲基纤维素钠溶解,A组、M1组予0.5％羧甲基纤维素钠灌胃.8周末测定血清瘦素、稳态模式评估法胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI),评价肝脂肪变和炎症程度.结果 与M1组比较,低、高剂量大黄素均能改善由HOMA-IR和ISI所评价的胰岛素抵抗(P ＜0.05,P＜0.01).M1组血清瘦素较A组升高(P＜0.01),M2、M3组血清瘦素较M1组降低(P ＜0.05,P＜0.01)；M1组血清瘦素水平与HOMA-IR呈正相关(r=0.746,P＜0.05),与ISI呈负相关(r=-0.731,P＜0.05).与M1组比较,低、高剂量大黄素对大鼠肝脏脂肪变有不同改善(P ＜0.05,P＜0,01),而对肝脏炎症均有改善(P＜0.01).结论 大黄素降低血清瘦素水平,改善胰岛素抵抗,可能是其防治大鼠非酒精性脂肪肝的重要机制之一.
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大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制
目的 探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并探讨其作用机制.方法 建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型,并随机分为4组:对照组、大黄素组、Z-VAD-FMK组、大黄素+ Z-VAD-FMK组.观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,4周后处死全部裸鼠,取出肿瘤组织,称瘤质量；HE染色观察肿瘤细胞形态,流式细胞分析仪细胞凋亡,RT-PCR检测各组肿瘤组织中AIF和Endo G mRNA的表达,Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和Endo G蛋白的表达.结果 大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组,大黄素组[(0.41±0.05)g]和大黄素+ZVAD-FMK组[(0.69±0.07)g]肿瘤较其他2组[(1.08±0.13、1.04±0.09)g]轻,差异有统计学意义(F =90.56、27.49,P＜0.01),大黄素组与大黄素+Z-VAD-FMK组相比差异也有统计学意义(t=10.01,P＜0.01).流式细胞仪检测凋亡显示大黄素组细胞凋亡率[(42.71±2.69)％]明显高于大黄素+ Z-VAD-FMK组[(34.38±1.73)％](t=6.38,P＜0.01).RT-PCR和Western blot结果显示,大黄素+ Z-VAD-FMK组中AIF和Endo G的表达水平显著上调,与其他各组比较[(1.65±0.12)vs( 1.24±0.08)、(0.51 ±0.07)、(0.48±0.04);(2.12±0.16)vs( 1.75±0.13)、(0.57 ±0.06)、(0.59±0.07);(2.42 ±0.13) vs( 1.73 ±0.11)、(0.78±0.07)、(0.75±0.08);(3.13±0.25) vs(2.15±0.18)、(0.85±0.09)、(0.8l±0.14)],差异均有统计学意义(F=303.22,319.32,409.38,258.53,P＜0.01).结论 大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和Endo G的表达,通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关.
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大黄素影响调节性T细胞迁徙与抑制小鼠结肠癌发展相关性研究
[目的]探讨大黄素抑制小鼠结肠癌发展与影响调节性T细胞(Tregs)迁徙的相关性.[方法]选用BALB/c小鼠随机分为阴性对照组、模型组和大黄素组(剂量为100 mg·kg-1·d-1),后2组采用右前肢腋窝皮下接种CT26细胞制备结肠癌模型;采用流式细胞仪检测Tregs在结肠癌小鼠外周血、引流淋巴结和肿瘤局部的相对比例,以及趋化因子受体CCR4在Tregs的表达量差异,并研究其与肿瘤大小的相关性.[结果]大黄素组的肿瘤质量显著低于模型组(P＜0.05),抑瘤率达74％;大黄素组Tregs在肿瘤局部的比例及其CCR4+Tregs的比例显著低于荷瘤模型组(均P＜0.01).[结论]大黄素抑制小鼠结肠癌的发展与其影响Tregs的迁徙相关,其机制与大黄素降低了CCR4在Tregs上的表达有关.
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大黄素体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的药效学研究
[目的]探讨大黄素在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的抑制作用.[方法]采用细胞病变抑制法,观察大黄蒽醌类衍生物(大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄、大黄酚)对HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型病毒感染兔肾细胞的抑制作用.[结果]大黄素在无毒浓度3.75μg/mL时能抑制HSV-Ⅰ致细胞病变;在无毒浓度15.0μg/mL时能抑制HSV-Ⅱ致细胞病变.[结论]大黄素在体外能抑制HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ病毒,而其他大黄蒽醌类衍生物则无抑制作用.
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多种中药单体对人结肠癌HT-29细胞株TLR4 mRNA表达和IL-8分泌的影响
[目的]观察不同中药单体对人结肠癌细胞株HT-29细胞Toll样受体信使核糖核酸(TLR4 mRNA)表达及白细胞介素8(IL-8)分泌的影响.[方法]选用人结肠癌细胞株HT-29细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HT-29细胞的TLR4 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HT-29细胞的IL-8分泌.[结果]黄芪甲苷组和大黄素组可抑制干扰素-γ(IFN-γ)诱导的TLR4 mRNA表达,而姜黄素组、柚皮苷组和栀子苷组则对TLR4 mRNA表达无显著性影响;大黄素能显著性降低IFN-γ+脂多糖(LPS)所诱导的HT-29细胞IL-8的产生.[结论]大黄素抗炎细胞分子机制可能与其能抑制IFN-γ诱导的HT-29细胞TLR4 mRNA表达和IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌有关.
