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胃癌组织芯片快速制备及Reg Ⅳ编码产物检测
目的:建立快速胃癌组织芯片(tissue microarray,TMA)制作方法,探讨其在RegⅣ编码产物检测和研究中的应用.方法:收集日本富山大学医学部1993-04-20-2010-11-29胃癌石蜡标本372例和相应癌旁黏膜标本(距离癌组织＞4 cm) 198例,应用AZUMAYA芯片机构建48阵列组织芯片,利用免疫组化和原位杂交检测RegⅣ蛋白和mRNA的原位表达.在Olympus BX41显微镜下选定切取部位,利用2 mm的穿刺针切除供体蜡块,不用制备受体蜡块,直接将切除组织放入金属包埋皿的固定盒上制备48阵列芯片.结果:组织芯片经HE染色确定了组织病理学诊断,免疫组化和原位杂交均发现在肠上皮化生和黏液分泌性肿瘤细胞质中存在RegⅣ蛋白和mRNA表达.胃黏膜肠化生中RegⅣ蛋白表达为100％(63/63),高于胃炎的29.0％(27/93,x2=73.67,P＜0.001)、腺瘤的85.7％(36/42,x2 =9.54,P＜0.005)和胃癌的45.2％(168/372,x2 =65.06,P＜0.001).胃癌组织中,印戒细胞癌阳性率为95.3％(41/43),高于低分化癌的27.4％(32/117),x2 =55.89,P＜0.001.原位杂交发现,癌旁黏膜肠化生上皮细胞中RegⅣmRNA表达阳性率为95.2％(40/42),高于癌旁正常黏膜的38.6％(17/44,x2=30.63,P＜0.001)和胃癌的20.3％ (14/69,x2=55.74,P＜0.001).结论:制备TMA不需要制备受体蜡块,提高了TMA制作速度.异常RegⅣ表达与胃黏膜肠化生-球样异型增生-印戒细胞癌的发生途径关系密切.
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RegⅣ在结肠癌中的表达及其与血管新生的相关性研究
目的 研究RegⅣ在结肠癌中的表达及其与血管新生的相关性.方法 采用EnVision法进行免疫组化染色,对60例结肠癌、20例正常结肠组织中的RegⅣ、VEGF-A、FⅧ的表达水平进行检测,并分析RegⅣ与VEGF-A、微血管密度(MVD)的相关性.结果 结肠癌组织中RegⅣ、VEGF-A表达水平明显升高,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结肠癌患者癌组织中RegⅣ、VEGF-A表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05),与性别、肿瘤大小无关(P＞0.05).结肠癌组织中RegⅣ的表达与VEGF-A表达呈正相关(P＜0.05).RegⅣ阳性表达病例MVD值为(56.7±12.95),显著高于正常组MVD值(49.8±6.36) (P ＜0.05).结论 RegⅣ的表达可能在结肠癌的侵袭与转移中发挥着重要作用,推测结肠癌中的RegⅣ高表达可能通过促进VEGF-A表达增加血管密度,进而加速肿瘤的发生和进展.
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APRIL和Reg Ⅳ在卵巢癌中的表达及意义
目的 检测APRIL和Reg Ⅳ在卵巢肿瘤和正常组织中的表达情况及其临床意义.方法 采用免疫组化染色,光镜观察结果确定APRIL和Reg Ⅳ在良性、交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达,并结合临床病理资料进行分析.结果 在良性、交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤组织中皆有APRIL和Reg Ⅳ的表达,但卵巢癌组织中的表达明显高于良性及交界性肿瘤,其表达强度与淋巴结转移、病理类型、病理分级、年龄等无关.相关分析表明APRIL和Reg Ⅳ的表达呈正相关.结论 APRIL和Reg Ⅳ基因与癌组织的发生和进展密切相关.细胞的增殖和机体的免疫调控以及凋亡途径有着密切联系.
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血清Reg Ⅳ蛋白在胃癌患者血清中的表达
目的 检测Reg Ⅳ蛋白在胃癌患者血清中的表达,探讨其作为浸润性胃癌检测标志物的可能性.方法 酶联免疫分析法定量检测64例胃癌患者血清中Reg Ⅳ蛋白的表达水平.结果 肿瘤浸润至肌层(T2)和浆膜层(T3)的胃癌患者血清Reg Ⅳ蛋白水平要显著高于肿瘤局限在黏膜层和黏膜下层(T1)者(P<0.01);有淋巴结转移者血清Reg Ⅳ蛋白水平要高于无淋巴结转移者(P<0.05);病理Ⅲ期患者血清Reg Ⅳ蛋白水平高于病理Ⅰ期患者(P<0.05).结论 Reg Ⅳ蛋白可能与胃癌的生长侵袭有关.
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Reg Ⅳ基因缺失CRD 结构域片段获得及其表达载体的构建与转染
目的: 探讨应用基因重叠延伸拼接PCR (SOE-PCR)技术构建Reg Ⅳ基因缺失CRD 结构域表达载体,并转染Reg Ⅳ低表达结直肠癌细胞系.方法: 应用SOE-PCR法获得Reg Ⅳ缺失CRD 结构域片段,构建真核表达载体并转染Reg Ⅳ低表达结直肠癌LoVo细胞,G418筛选,RT-PCR检测鉴定.结果: 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,经pcDNA3.1-Reg Ⅳ-domain△转染的LoVo细胞Reg Ⅳ-domain △呈阳性表达.结论: 利用SOE-PCR技术可成功构建Reg Ⅳ基因缺失CRD 结构域的表达载体.
关键词： Reg Ⅳ 碳水化合物识别域 结直肠癌 基因转染 基因重叠延伸拼接PCR -
Reg Ⅳ与胃癌腹腔转移的相关性研究
[目的]探讨Reg Ⅳ表达与胃癌腹腔转移的相关性.[方法]利用实时荧光定量PCR检测50例胃癌患者腹腔冲洗液中Reg Ⅳ、CA72-4、CK20的表达水平.[结果]病理诊断已明确发生腹腔转移的12例胃癌腹腔冲洗液中Reg Ⅳ的相对表达量为34.3 (26.2～ 39.6),显著高于38例未发生腹腔转移的Reg Ⅳ的相对表达量22.7( 18.4-33.0)(P=0.017).Reg Ⅳ表达水平与患者淋巴结转移、淋巴管侵犯、临床分期等密切相关.淋巴结转移和淋巴管侵犯阳性的患者腹腔冲洗液中Reg Ⅳ的表达水平明显升高(均为P=0.024)；晚期胃癌(Ⅲ期和Ⅳ期)患者腹腔冲洗液中Reg Ⅳ的表达水平明显高于早期胃癌患者(Ⅰ期和Ⅱ期)(P=0.015).Reg Ⅳ在胃癌患者中敏感性(100.0％)优于CA 72-4(66.7％)和CK20(58.3％).[结论]Reg Ⅳ的表达与胃癌的腹腔转移密切相关,利用荧光定量PCR检测胃癌患者的腹腔冲洗液中Reg Ⅳ的水平,可以提高对胃癌腹腔转移的预测.
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Reg Ⅳ 与 EGFR 在胃癌中的表达
目的:研究Reg Ⅳ和EGFR在胃癌中的表达及两者的相关性.方法:采用免疫组织化学染色法,检测147例手术切除胃癌及癌旁正常胃组织中Reg Ⅳ和EGFR的表达情况,并与临床病理特征结合进行综合分析.结果:Reg Ⅳ蛋白在胃癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为60.54％,19.70％,差异具有统计学意义(P ＜0.05)；EGFR胃癌组织中表达率55.10％高于癌旁正常组织23.81％,二者之间差异具有统计学意义(P＜0.05).同时Reg Ⅳ和EGFR表达呈正相关(r=0.6909,P＜0.0001),与胃癌的组织学类型、浸润深度及淋巴结转移具有相关性.结论:Reg Ⅳ和EGFR与胃癌的恶性程度、浸润深度、淋巴结转移有一定的关系,二者在胃癌的发展中可能具有协同作用,联合检测两种指标可作为判断胃癌生物学行为和预后的重要参考指标.
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再生基因Reg Ⅳ在多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢中的表达
目的:探讨再生基因Reg Ⅳ在多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢组织中的表达情况.方法:采用Poretsky法用胰岛素联合hCG诱导SD大鼠建立PCOS模型,观察大鼠体质量变化及卵巢相对质量；测定血清T、LH、FSH、E2、Ins水平；HE染色观察卵巢形态改变；免疫组织化学方法检测Reg Ⅳ蛋白在卵巢组织的定位表达；定量RT-PCR和Western blotting分别检测Reg Ⅳ在mRNA水平和蛋白水平的表达.结果:Reg Ⅳ分别表达于大鼠颗粒细胞、卵泡膜细胞以及黄体等部位；模型组卵巢中Reg Ⅳ mRNA及蛋白表达均低于正常对照组(P＜0.05).结论:Reg Ⅳ的表达下调可能与PCOS的发病有关.
关键词： Reg Ⅳ 多囊卵巢综合征(PCOS) 大鼠模型
