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多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1及表皮生长因子受体在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义
目的 研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIGl)及表皮生长因子受体(EGFR)在子宫颈腺癌中的表达,并探讨LRIG1与预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测子宫颈腺癌47例、子宫颈腺上皮内瘤变(CGIN) 24例和正常子宫颈组织60例中LRIG1及EGFR的表达情况,并对二者相关性进行分析.结果 LRIG1蛋白在子宫颈腺癌组织、CGIN、正常子宫颈组织的阳性表达率分别为21.28 ％(10/47)、29.17％(7/24)和83.33％(50/60),差异有统计学意义(P＜0.05);EGFR蛋白在子宫颈腺癌组织、CGIN、正常子宫颈组织的阳性表达率分别为82.98％(39/47)、45.83％(11/24)、5.00％(3/60).不同年龄分层患者LRIG1的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05),而不同组织学分级、淋巴结转移及临床分期分层间,LRIG1的阳性表达率差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).LRIG1蛋白阳性表达患者生存率高于阴性表达者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LRIG1可能作为子宫颈腺癌的预后因素之一,对子宫颈腺癌的临床转归具有一定预测意义,其机制可能与抑制EGFR的信号转导有关.
关键词： 子宫颈肿瘤 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 受体 表皮生长因子 免疫组织化学 -
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响
目的 运用基因芯片技术研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)对U251胶质瘤细胞基因表达的影响.方法 提取正常U251细胞和转染了LRIG1的UJ251细胞的RNA,并反转录为cDNA,加用cy3、cy5染色标记后使用Roche-NimbleGen人全基因组表达谱芯片检测LRIG1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响.结果 转染LRIG1的U251细胞相对U251细胞,差异基因为808条,其中上调基因有397条,下调基因有411条,包括细胞骨架、细胞增殖、细胞凋亡、生长代谢等相关基因.结论 基因芯片能够高效地初步检测差异基因表达,有助于揭示LRIG1作用于胶质瘤细胞的分子机制.
关键词： 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 基因芯片 胶质瘤 差异基因 -
下调微小RNA-19a对胶质瘤细胞侵袭能力的影响及机制
目的 探讨下调微小RNA(miR)-19a的表达对人脑胶质瘤细胞株U87侵袭能力的影响及其机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测转染miR-19a抑制物的效率.转染后48 h,采用Western blot法检测U87细胞中多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)的表达,并通过Transwell实验检测U87细胞的侵袭能力.构建报告质粒,于转染后72 h用荧光素酶报告实验验证miR-19a和LRIG1的相互作用.结果 FQ-PCR结果显示转染miR-19a抑制物后,U87中miR-19a的表达量较对照组降低了(78.2±5.1)％,差异有统计学意义(P＜0.01).转染miR-19a抑制物后,U87穿膜细胞数较对照组明显减少,分别为(25.9±3.9)个和(85.3±6.1)个(P＜0.01).荧光素酶报告实验结果显示,下调miR-19a后野生型报告质粒的荧光素酶活性较对照组升高(4.89±0.26)倍(P＜0.01),而突变型质粒的荧光素酶活性较对照组无明显变化.Transwell实验结果表明在下调miR-19a后,LRIG1沉默组的穿膜细胞数较对照组明显增加,分别为(47.8±3.1)个和(22.7±4.2)个(P＜0.05).结论 下调miR-19a可以抑制U87细胞的侵袭力,其机制可能是上调LRIG1的表达.
关键词： 胶质瘤 微小RNA-19a 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 侵袭 -
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对人肝癌细胞株Hep-G2恶性表型的影响及其作用机制
目的 观察多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIGl)基因过表达对人肝癌细胞株Hep-G2恶性表型的影响并探讨其作用机制.方法 LRIG1基因重组过表达载体(pEGFP-N1-LRIG1)转染Hep-G2细胞,分别于转染后24、48、72 h用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测其对Hep-G2细胞增殖的作用；Transwell侵袭实验检测其对细胞侵袭能力的影响；应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法检测转染后LRIG1与细胞膜上表皮生长因子受体(EGFR)的mRNA与蛋白水平的变化.结果 CCK-8结果显示,在24、48、72 h作用时间时pEGFP-N1空载体组的细胞存活率分别为92.4％、86.4％、80.3％；而pEGFP-N1-LRIG1质粒组的细胞存活率分别为55.2％、50.9％、46.5％,与空载体组比较,LRIG1对Hep-G2细胞有明显的抑制效应(P＜0.01)；细胞侵袭实验结果表明,LRIG1过表达组、未处理及空载体组侵袭实验侵袭细胞比率分别为33.24％、100.00％、92.85％,与空载体组比较,LRIG1能显著抑制Hep-G2细胞的侵袭能力(P＜0.05)；Real-time PCR及Western blot实验结果显示,LRIG1过表达组能显著抑制EGFR在Hep-G2细胞中mRNA和蛋白水平的表达(P＜0.05).结论 LRIG1可能通过抑制EGFR的表达来抑制Hep-G2细胞的增殖.
关键词： 癌 肝细胞 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 表皮生长因子受体 表型 -
信号转导和转录激活因子3信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1诱导U251细胞凋亡中的作用
目的 探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡中的作用及机制.方法 传代培养U251细胞,随机分为对照组、空载体组及实验组,应用脂质体介导的基因转染技术分别将磷酸盐缓冲液(PBS)、PEGFP-N1质粒体、PEGFP-LRIG1质粒体转染入各组细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞体外生长活性,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法经流式检测各组细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组细胞中STAT3的mRNA表达,Westernblot法测定各组细胞中STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bax的蛋白表达.结果 成功转染LRIG1,实验组细胞中LRIG1基因表达明显上调(P＜0.05)；实验组细胞增殖显著受抑,48 h抑制率为(45.12±0.68)％,72 h抑制率为(52.24±1.77)％,总凋亡率由(2.54±0.43)％增高至(22.51±2.12)％ (P ＜0.05)；RT-PCR检测显示实验组细胞中STAT3 mRNA表达明显降低；Western blot检测显示实验组细胞中STAT3蛋白表达及磷酸化水平明显降低,bcl-2表达明显降低,bax表达明显升高.结论 LRIG1可促进U251细胞凋亡,其机制可能是通过下调STAT3信号通路,进而抑制STAT3激活的抗凋亡途径.
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多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1与胶质瘤细胞株化疗敏感性之间的关系
目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋向样蛋白1(LRIG1)与胶质瘤细胞化疗敏感性的相关性.方法 替莫唑胺诱导构建多药耐药细胞株U251/TR,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测该细胞株的多药耐药性,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测LRIG1在U251和U251/TR中的表达变化.转染LRIG1质粒体进入多药耐药细胞株,检测其对化疗药物敏感性变化.结果 成功构建多药耐药细胞株U251/TR,替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251的抑制率分别为:(19.30±0.04)％、(39.90±0.13)％、(28.10±0.09)％、(66.20±0.02)％、(26.30±0.11)％,而对U251/TR的抑制率分别为:(3.20±0.03)％、(15.30±0.09)％、(4.10±0.03)％、(45.60±0.10)％、(10.80±0.04)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).其LRIG1的表达明显降低,将LRIG1质粒体转入耐药细胞株后,TMZ、VP16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素对空白组(耐药细胞株)的抑制率为(2.60±0.02)％、(3.30±0.02)％、(9.50±0.06)％、(2.20±0.05)％、(2.90±0.03)％,而对转染组的抑制率为(19.10±0.34)％、(38.20±0.53)％、(29.10±0.25)％、(15.20±0.55)％、(17.40±0.41)％,耐药性被逆转,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LRIG1与肿瘤的化疗敏感性相关,LRIG1可能与肿瘤的多药耐药有关.
关键词： 胶质瘤 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 化疗敏感性 -
干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制
目的 探讨干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因表达促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制.方法 用携带U6启动子的LRIG1特异性短发夹RNA (shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG1-shRNA (siRNA)及含非特异shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染U251细胞株,通过G418筛选,鉴定得到稳定转染细胞株.采用侵袭实验验证干扰LRIG1对U251侵袭性的影响,通过明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶(MMP)-2、MMP-9的活性,Western blot法检测表皮生长因子(EGFR)及其下游丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B( P13K/AKT)信号通路蛋白的表达差异.结果 含U6启动子LRIG1 shRNA序列的质粒转染干扰组LRIG1 mRNA降低至对照组(35.3％～39.2％,P＜0.05).干扰LRIG1表达组U251细胞侵袭数[(159±15)～ (188±9)/视野],较空白对照组细胞侵袭数[(28±9)/视野]明显增多(P＜0.05)；干扰LRIG1激活EGFR通路传导；干扰LRIG1后干扰组MMP-2较对照组活性增加(1.66±0.11～1.96±0.12,P＜0.01),MMP-9干扰组较对照组活性增加(4.82±0.27～4.47±0.29).结论 LRIG1表达下调后MMP-2、MMP-9活性增强,从而促进U251细胞的侵袭性,可能通过激活EGFR信号通路引起.
关键词： 胶质瘤 基质金属蛋白酶 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 侵袭性 -
sLRIG1与胶质瘤耐药细胞株化疗敏感性的关系
目的 探讨可溶性多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 (sLRIG1)与胶质瘤耐药细胞株化疗敏感性之间的关系.方法 浓度梯度递增法建立多药耐药细胞株U251/VP16;CCK-8法检测sLRIG1对U251细胞的抑制率,确定sLRIG1对U251细胞的佳作用时间及适宜浓度;CCK-8法检测加入sLRIG1前后三种化疗药(依托泊苷、硫酸长春新碱、替莫唑胺)作用于U251/VP16的抑制率变化.结果 成功建立多药耐药细胞株U251/VP16;sLRIG1对U251细胞的佳作用时间为30 min,适宜浓度范围为100～200 ng/ml;sLRIG1对U251/VP16的抑制率为(23.76±0.02)％;依托泊苷、硫酸长春新碱、替莫唑胺对U251/VP16的抑制率分别为(9.79±0.08)％、(16.71±0.06)％、(27.14±0.09)％;而在加入sLRIG1后抑制率则分别为(20.34±0.03)％、(31.52±0.07)％、(35.21±0.05)％,加入sLRIG1前后三种化疗药的抑制率差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 sLRIG1不仅自身能抑制胶质瘤细胞生长,对耐药胶质瘤细胞的化疗也有增敏作用.
关键词： 胶质瘤 U251细胞 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 多药耐药性 化疗敏感性 -
LRIG1相关功能片段对EGFR活性和胶质瘤细胞增殖的影响
目的 探讨人多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)相关功能片段对表皮生长因子受体(EGFR)下游信号通路的影响及对人脑胶质瘤细胞增殖活性的影响.方法 构建缺失LRIG1胞内段(LRIG1-ET)的和缺失LRIG1胞外段(LRIG1-TC)的真核表达质粒,将这两个质粒及LRIG1全长(LRIG1-FL)质粒分别转染脑胶质瘤U251细胞系和原代星形胶质细胞瘤细胞,用蛋白质印迹技术检测EGFR下游信号蛋白有丝分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)的磷酸化水平,用MTT法检测转染细胞的增殖活性.结果 全长LRIG1、LRIG1胞外段、LRIG1胞内段对人脑U251细胞和原代胶质瘤细胞的增殖活性均有抑制作用;全长LRIG1蛋白的抑制作用强,其次为胞内段,再次为胞外段.全长LRIG1、LRIG1胞外段、LRIG1胞内段均使原代星形胶质细胞瘤细胞的MEK蛋白磷酸化水平下降.结论 LRIG1全长、胞外段、胞内段均能通过抑制EGFR下游信号抑制U251细胞和原代星形胶质瘤细胞的细胞增殖;LRIG1胞外段和胞内段具有独立的功能,均有可能对人脑胶质瘤的治疗发挥重要作用.
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LRIG1抑制人脑胶质瘤细胞增殖的研究
目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对人脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法 分别构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2和胶质细胞源性生长因子(BDMF)的质粒,将它们分别转染到人脑胶质瘤细胞系U251细胞内,应用细胞计数试剂盒8法检测细胞活性的变化,蛋白印迹法检测LRIG1、Bcl2、拓扑异构酶Ⅱ(topoⅡ)、GDNF的表达变化.结果 成功构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2、GDNF的质粒,并成功转入U251细胞株.过表达LRIG1显著抑制U251细胞增殖.蛋白印迹法结果显示LRIG1的表达和Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达呈显著负相关.结论 LRIG1通过负性调节Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞的增殖.
关键词： 胶质瘤 U251细胞 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 细胞增殖 -
LRIG1在胶质瘤细胞系U251细胞中的作用
目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)在胶质瘤细胞系U251细胞中的作用及引起的相关基因变化.方法 以PEGFP-LRIG1质粒转染体外常规培养的U251细胞,同时设PEGFP-N1组和空白组作为对照,RT-PCR检测3组细胞LRIG1、GDNF、拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)基因表达的变化.Western blotting检测细胞LRIG1蛋白的表达；绘制PEGFP-N1和PEGFP-LRIG1组细胞1～5 d的生长曲线并计算替莫唑胺对2组细胞的抑制率.应用siGDNF和siLRIG1敲低U251细胞中GDNF和LRIGI的表达,同时设单纯siGDNF、siLRIG1组和空白组作为对照,比较细胞增殖率的变化.结果 3组细胞LRIG1基因和蛋白、TOPOⅡ和GDNF基因表达不同,差异有统计学意义(P＜0.05)；与PEGFP-N1组和空白组比较,PEGFP-LRIG1组细胞LRIG1基因和蛋白的表达较高,TOPOⅡ和GDNF基因表达较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞生长1～5 d时,PEGFP-LRIG1组细胞计数低于PEGFP-N1组,差异有统计学意义(P＜0.05).加入替莫唑胺培养后,PEGFP-LRIG1组细胞抑制率高于PEGFP-N1组,差异有统计学意义(P＜0.05).Westernblotting结果显示应用siGDNF和siLRIG1敲低LRIG1和GDNF成功.siLRIG1组细胞抑制率高于对照组,siLRIG1 +siGDNF组胞抑制率低于siLRIG1组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LRIG1可以通过调节GDNF的表达来调节U251细胞的生长；LRIG1可以抑制GDNF、TOPOⅡ的表达,提高胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性.
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非小细胞肺癌患者LRIG1及Fascin-1的表达及其临床意义
目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)和成束蛋白1(Fascin-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测青海省人民医院2013年2月至2015年12月手术切除的86例癌组织标本和部分配对的42例癌旁正常肺组织中LRIG1及Fascin-1蛋白的表达水平,探讨LRIG1及Fascin-1表达与患者临床病理特征的关系.结果 Fascin-1在癌组织和癌旁组织中阳性表达率分别为73.2%和14.3%,差异有统计学意义(P<0.05);LRIG1在癌组织和癌旁组织中阳性表达率分别为55.8%和86.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Fascin-1阳性与阴性患者在肿瘤直径和纵膈淋巴结转移方面比较差异均有统计学意义(P<0.05);LRIG1阳性与阴性患者在病理类型、临床分期和纵膈淋巴结转移方面比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论 LRIG1及Fascin-1在肺癌组织和癌旁正常肺组织存在差异表达,并与NSCLC的发生发展及淋巴转移有关.
关键词： 非小细胞肺癌 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 成束蛋白1 免疫组化 临床病理
