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顺铂致聋后大鼠耳蜗螺旋神经元NeuroD的表达
目的 检测神经分化因子NeuroD在大鼠耳蜗螺旋神经元顺铂损伤后的表达变化.方法 通过免疫组织化学及Real-Time PCR技术,观察耳蜗螺旋神经元损伤1d、3d、5d后NeuroD的表达变化.正常成年SD大鼠32只随机分为对照组(生理盐水5 ml/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),用药1d组(顺铂5 mg/kg,腹腔注射),用药3d组(顺铂5 mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续3d),用药5d组(顺铂5mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),每组8只,建立顺铂耳毒性模型.采用Real-Time PCR、免疫组织化学染色检测不同时间螺旋神经元NeuroD的mRNA及蛋白表达变化.结果 成功建立顺铂耳毒性大鼠模型,随着用药时间的延长,神经分化因子NeuroD在耳蜗螺旋神经元中呈动态变化.NeuroD的mRNA和蛋白表达在用药1d及3d组分别为2.17±0.39、1.15.±0.20及7.02+0.69、2.42+0.40,与对照组及用药5d组比较具有统计学意义(P值＜0.01).结论 NeuroD在用药1d后开始增加,3d后达到高峰,5d后下降;在用药早期有一过性表达增强,后期表达下降同时听力损失明显.表明NeuroD可能参与顺铂损伤螺旋神经元后的修复过程.
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大鼠急性脊髓损伤后NeuroD的时空表达
目的:探讨神经源性分化因子NeuroD在大鼠急性脊髓损伤过程中的表达及意义.方法:以改良Allen's法建立急性脊髓损伤(SCI)大鼠模型,以假手术组为对照,应用免疫组织化学、半定量RT-PCR、免疫印迹分别检测脊髓损伤后不同时间点NeuroD的表达变化.结果:NeuroD特异性表达于脊髓灰质,与对照组相比,急性脊髓损伤后3d,NeuroD mRNA的相对表达量明显增加,5d达到峰值,7d后回落;Neurod的蛋白相对表达量则在急性脊髓损伤5d后明显升高,持续至第7天,14d明显回落.结论:急性脊髓损伤可上调NeuroD表达水平,提示NeuroD参与了急性脊髓损伤后的病理过程.
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神经分化因子-1/B细胞E盒转录激活因子2基因与糖尿病
神经分化因子1(NeuroD-1)又名B细胞E盒转录激活因子2(BETA-2),以往也称为NeuroD,属B类碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族,作为转录因子,其能高亲和力地与胰岛素基因的E盒结合,在胰岛B细胞中激活胰岛素基因的转录,对胰腺B细胞的发育及生理功能具有重要的作用;也可与其他转录因子相互作用,协同调节胰岛素基因的终活性状态,故被认为是糖尿病的候选基因之一.现将NeuroD-1的特点及其与糖尿病的关系综述如下.
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NeuroD在神经细胞分化中的调控作用
神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持.近年来的研究表明, NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程.这些研究为NeuroD参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据.
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NeuroD腺病毒载体的构建以及在小鼠胰岛β细胞中的过表达
目的 构建小鼠NeuroD重组腺病毒载体及相应的对照病毒载体,并验证NeuroD基因在小鼠胰岛中的表达活性.方法 设计合成一对小鼠NeuroD的cds区的引物序列,以小鼠胰岛cDNA为模板PCR扩增目的 片段,凝胶电泳回收DNA片段,经双酶切,将目的 片段克隆至AdTrack-CMV穿梭质粒上,并用腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,挑选阳性克隆小提质粒转染293A细胞,经包装得到pAd-NeuroD和pAd-CMV重组腺病毒,感染小鼠胰岛,Western 印迹法检测胰岛内NeuroD蛋白表达水平.结果经验证构建成功带有NeuroD基因的腺病毒载体,能在小鼠胰岛中稳定过量表达.结论 成功构建了小鼠胰岛β细胞来源的NeuroD腺病毒载体,为进一步研究NeuroD基因在胰岛β细胞中功能奠定了基础.
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慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响
本实验通过观察慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响,探讨慢性复合应激与海马神经发生的关系.将成年雄性大鼠32只随机分为慢性复合应激组(简称应激组)和正常对照组(简称对照组).应激组动物每天不规律交替暴露于四种复合应激原中,共持续6周.然后运用免疫组织化学染色、Western-blot和RT-PCR技术分别观察海马内NeuroD阳性神经元数量、NeuroD蛋白水平和核酸水甲的变化.结果显示:慢性复合应激组动物海马齿状回NeuroD阳性神经无数量明显增多(P＜0.05);海马NeuroD蛋白的表达明显增强(P＜0.05);海马NeuroD mRNA水平明显上调(P＜0.05).表明慢性复合应激可引起海马NeuroD阳性神经无数量增多和NeuroD表达水平升高,提示慢性复合应激可能促进大鼠海马的神经发生.
