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中国南方先天性白内障一家系GJA8基因C＞G新突变
目的 对一个常染色体显性遗传先天性白内障(ADCC)家系进行候选基因筛查,以期寻找其可能的致病基因.设计 实验研究.研究对象 一个中国南方ADCC家系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序方法,对该家系进行ADCC常见致病基因突变筛查.主要指标基因序列.结果 临床眼科检查显示该家系先天性白内障类型为核性白内障.候选基因序列测定显示在GJA8基因c.565位置上存在C＞G的突变,该突变导致在缝隙连接蛋白Cx50 p.189位置上的脯氨酸突变为丙氨酸,此氨基酸改变位点位于缝隙连接蛋白结构中第二个细胞外段.而该家系中非患者和100名对照者基因组序列均无此改变.结论 位于GJA8的c.565C＞G突变是导致此先天性白内障家系可能的致病原因,缝隙连接蛋白第二个胞外结构域对晶状体的透明性起着重要作用.
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心脏缝隙连接通道连接蛋白43的蛋白质调控因子
缝隙连接通道是连接相邻心肌细胞的特殊通道,其主要功能是介导心肌细胞间化学信息的交换和心肌细胞间的电耦联,其表达和功能的正常是心脏整体正常电活动的重要保证.心脏缝隙连接通道由不同的连接蛋白组成,心室的缝隙连接通道主要由连接蛋白43组成.心脏缝隙连接通道的功能受胞内pH值、胞内Ca2+浓度、ATP浓度、连接蛋白的磷酸化状态、跨通道电压和一些神经体液因子等的调控.近年的研究发现,心肌细胞内存在一些能够与连接蛋白43存在相互作用的蛋白质,并且发现这些蛋白质能够通过这种相互作用改变连接蛋白43的结构状态或磷酸化状态,从而进一步发挥调控缝隙连接通道的功能.现仅就近年来发现的与Cx43存在相互作用的蛋白质及其调控作用综述如下.
关键词： 心脏 缝隙连接通道 连接蛋白43 蛋白质-蛋白质相互作用 -
缝隙连接蛋白Cx43磷酸化的研究进展
相邻细胞间主要快速的通讯方式是缝隙连接通道(GJ),而缝隙连接蛋白(Cx)形成的连接子是其主要组成部分.Cx大多属于磷蛋白,其磷酸化状态不同程度地影响其自身的合成装配以及GJ的功能.Cx43是哺乳动物身上分布广泛的Cx,尤其是在心血管系统和神经系统,它的磷酸化状态受到多重激酶途径调节,发生磷酸化的位点也不尽相同,且Cx43的磷酸化参与了多种疾病的发生、发展.
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蜂胶总黄酮对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制
目的:探讨蜂胶总黄酮(TFP)对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:随机选取6只雄性SD大鼠为正常对照(NC)组;余下大鼠采用腹腔注射阿霉素造模,将造模成功的大鼠随机分成5组(n=6):慢性心力衰竭模型(CHF)组、蜂胶总黄酮低剂量(LD)组、蜂胶总黄酮中剂量(MD)组、蜂胶总黄酮高剂量(HD)组和地高辛(DIG)组.6周后通过生物信号系统记录大鼠血流动力学相关指标;检测各组大鼠血浆中脑钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量;取材后HE和Masson染色观察心脏结构改变及胶原纤维增生情况;Western blot检测缝隙连接蛋白43(P-Cx43)表达水平;TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果:与NC组相比,CHF组大鼠心脏血流动力学指标左室峰压(LVSP)及左室内压变化速率(±dP/dtmax)绝对值明显下降(P＜0.01),左室舒张期末压(LVEDP)明显升高(P＜0.01);血浆中BNP、cTnI、TNF-α及IL-6含量均明显升高(P＜0.01);与CHF组相比,MD、HD组大鼠心脏血流动力学指标LVSP和±dP/dtmax绝对值明显升高(P＜0.05),LVEDP明显降低(P＜0.01),LD组LVEDP明显降低(P＜0.01),LVSP和±dP/dtmax变化均不明显.MD、HD组大鼠血清中BNP、cTnI、TNF-α及IL-6含量明显降低(P＜0.01),LD组各指标变化不明显;Western blot结果显示:与NC组相比,CHF组P-Cx43条带明显增粗,给予TFP灌胃后,随着TFP剂量的增加,TFP各组P-Cx43条带逐渐变细变淡;进一步半定量分析显示,与NC组相比,各组中P-Cx43表达量显著升高(P＜0.01);与CHF组相比,TFP各组P-Cx43表达量均降低;MD组P-Cx43表达量低于LD组(P＜0.01),高于HD组(P＜ 0.05);CHF组心肌细胞凋亡指数(％)(22.61±3.39)较NC组(1.12±0.24)明显增高(P＜0.01);与CHF组相比,蜂胶总黄酮LD、MD、HD组心肌细胞凋亡指数(％)分别为(15.79±2.80)、(9.28±2.10)、(4.73±1.14)均明显低于CHF组(P＜0.01);大鼠心肌组织P-Cx43表达水平与心肌细胞凋亡指数呈显著正相关(P＜0.01).结论:蜂胶总黄酮呈剂量依赖性对阿霉素诱导的大鼠慢性心力衰竭心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与Cx43表达调控特别是磷酸化状态的调控密切相关.
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连接蛋白与心律失常
心肌细胞缝隙连接通道(GJC)是细胞间电偶联的有效方式,主要由连接蛋白(Cx)40、43和45组成.近年来随着对其与心血管疾病关系研究的深入,尤其是在心律失常发生中的作用正备受关注,本文就GJC与心律失常的关系作一综述.
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缝隙连接蛋白40与心房颤动的关系
缝隙连接通道大量分布于心脏组织,介导心肌细胞之间直接通讯,在维持心肌电活动的同步性及冲动在心肌快速传导方面发挥着重要的生理功能.缝隙连接蛋白(connexin,Cx) 40的表达量、分布及分子结构变化均与心房颤动有关.该文介绍Cx40的表达、分子变异与心房颤动的关系以及基于Cx40靶标的抗心律失常治疗进展.
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卫星胶质细胞对痛性糖尿病周围神经病变影响的研究进展
痛性糖尿病周围神经病变是糖尿病常见并发症,是以疼痛症状为主的周围神经性痛.卫星胶质细胞(SGC)是外周神经的胶质细胞,广泛存在于背根神经节中.SGC通过缝隙连接蛋白相互联系在周围神经中,表达多种神经活性递质及嘌呤受体,是感觉神经节信号沟通和传递的参与者,并在神经痛觉过敏中发挥重要作用.神经损伤后SGC上的嘌呤受体P2X7会被高浓度的三磷腺苷激活,发生自身通透性改变.SGC之间缝隙连接蛋白表达异常,导致神经元兴奋,增强机械和热痛觉过敏,加重神经性疼痛.因此,了解周围神经元中SGC的细胞交流及病理条件下促进感觉神经元产生慢性疼痛的作用机制非常关键.本文就SGC与周围神经元的作用机制加以综述,旨在为痛性糖尿病周围神经病的治疗提供研究方向和潜在靶点.
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心脏连接蛋白43羧基末端相互作用蛋白的酵母双杂交筛选
目的 研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用.方法①通过PCR方法得到编码心脏Cx43羧基末端(AA235-382)的cDNA片段,并在其两端分别加上EcoRI和BamHI酶切位点,应用EcoRI/BamHI酶切PCR产物及pGBKT7空载体,凝胶分离后应用T4连接酶进行连接; ②通过化学转化法将pGBKT7-Cx43-CT转化酵母菌A H109; ③通过"尿素/SDS " 法从被转化的酵母菌中提取蛋白质; ④应用抗C-myc抗体,通过Western blot方法检测"诱饵"蛋白的表达(即Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT融合蛋白); ⑤检测"诱饵"蛋白自我激活报告基因与否后,将已被"诱饵"质粒转化的AH109与人心脏cDNA文库进行杂交,筛选阳性克隆分离阳性克隆中的cDNA,并测序.结果①诱饵载体测序结果证明pGBKT7中的"Gal4 DNA binding domain-C-myc"与Cx43的羧基末端在同一读框中; ②"诱饵"质粒转化AH109酵母菌成功率100%; ③从被转化的AH109中能提取到浓度满意的总蛋白; ④Western blot 能检测到特异性条带,其位置与Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT的分子量相当; ⑤"诱饵"蛋白不能自激活报告基因Ade2和Mel1,但可自激活His3, 5 mmol/L的3-AT可有效抑制"诱饵"蛋白本身自激活报告基因His3,以利于下一步的杂交筛选,筛选得到10个准阳性克隆.结论心脏连接蛋白43羧基末端能与心肌细胞中的多种蛋白质存在相互作用, 这些蛋白质可能参与对间隙连接通道的功能调控.
关键词： 缝隙连接通道 连接蛋白43 心律失常 蛋白质-蛋白质相互作用
