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化合物ent-kaur-16-en-19-oic acid对胃癌BGC-823细胞生长抑制作用的实验研究
目的:研究化合物K1(ent-kaur-16-en-19-oic acid)对BGC-823胃癌细胞的生长抑制作用.方法:采用MTT法观察不同浓度化合物K1对BGC-823胃癌细胞的生长抑制作用.结果:化合物K1对BGC-823胃癌细胞增殖有明显的抑制作用.
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DON对体外培养胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响及其可能机制.方法 体外培养的胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823细胞经100、500、1 000μg/L DON处理72h,以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况及其量效关系,流式细胞术、免疫细胞化学和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 FCM定量检测结果表明,DON各处理组细胞凋亡率均高于时照组,且均随DON浓度升高凋亡率相应增加,具有明显量效关系(SGC-7901:r=0.660,P<0.05,n=4;BGC-823:r=0.750,P<0.01,n=4).FCM、免疫细胞化学和Western blot结果显示,DON处理后SGC-7901、BGC-823细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降.结论 DON可剂量依赖地诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达有关.
关键词： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 SGC-7901细胞 BGC-823细胞 细胞凋亡 胃癌 -
人参皂苷Rg5通过miR-125b/STARD13/NEU1信号通路对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响
目的:研究人参皂苷Rg5对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移的影响,并通过微小RNA-125b(microRNA-125b,miR-125b)/类固醇敏感性调节蛋白相关脂类转运体结构域13(StAR-related lipid transfer domain protein 13,STARD13)/唾液酸酶l(neuraminidase 1,NEU1)信号通路探讨人参皂苷Rg5抑制胃癌侵袭迁移的作用机制.方法:人参皂苷Rg5(12.5,25,50 μmo1·L-1)处理BGC-823细胞后,采用transwell小室实验检测人参皂苷Rg5对BGC-823细胞侵袭、迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测STARD13,NEU1蛋白的表达.结果:人参皂苷Rg5(25,50 μmol· L-1)可有效抑制BGC-823细胞的侵袭、迁移.miR-125b,STARD13,NEU1 mRNA的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg512.5 μmol· L-1组的miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平升高,但无统计学差异;人参皂苷Rgs(25,50 μmobL-1)组miR-125b相对表达水平降低,STARD13,NEU1 mRNA相对表达水平增高(P＜0.01).STARD13,NEU1蛋白的表达,与空白组比较,人参皂苷Rg5(12.5,25 μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高,人参皂苷Rg5(12.5 μmol·L-1)组的NEU1蛋白相对表达水平升高,但差异无统计学意义;人参皂苷Rg5(50 μmol·L-1)组的STARD13蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),人参皂苷Rg5(25,50 μmol· L-1)组NEU1蛋白相对表达水平升高(P＜0.01).结论:人参皂苷Rg5可能通过降低miR-125b的表达,上调miR-125b靶基因STARD13,NEU1的表达,抑制胃癌BGC-823细胞的侵袭、迁移.
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蛋白激酶B在佛波酯诱导人胃癌细胞系凋亡中的作用
目的 讨佛波酯(TPA)诱导胃癌细胞系凋亡过程中蛋白激酶B(PKB)的作用.方法 通过BrdU处理,流式细胞术检测以及DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌BGC-823细胞的影响;免疫印迹法检测TPA对PKB蛋白表达水平、磷酸化的影响;核浆分离获得核浆蛋白,用于免疫印迹法检测TPA对胃癌细胞内PKB和其Ser 473位点磷酸化的核浆表达影响,以及激光扫描共焦显微镜观察TPA是否改变胃癌细胞内PKB的分布. 结果TPA诱导BGC-823细胞凋亡;TPA下调BGC-823细胞内PKB蛋白表达,并且与TPA作用时间和TPA浓度呈正相关,与PP2A降解作用无关;TPA抑制PKB的Ser 473位点磷酸化,而对其Thr 308位点磷酸化没有明显影响;TPA下调细胞核内PKB的表达以及Ser 473位点的磷酸化;TPA并不改变PKB在胃癌细胞内的分布. 结论 PKB的抑制作用可能参与TPA诱导胃癌细胞凋亡过程;由TPA诱导的胃癌细胞凋亡可能部分是由于细胞核内PKB蛋白表达和Ser 473位点磷酸化下降所致.
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抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响
目的:探讨抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响及其机制.方法:采用脂质体转染法将带有全长Pdcd4cDNA的质粒转入BGC-823细胞,MTT法测定羟基喜树碱对Pdcd4cDNA转染BGC-823细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测羟基喜树碱作用前后细胞周期和凋亡率的变化,Western blot蛋白印迹法检测Pdcd4蛋白表达.结果:建立了稳定转染Pdcd4cDNA的BGC823细胞系:羟基喜树碱作用转染细胞24,72 h后,药物对Pdcd4cDNA转染组细胞的半数抑制浓度均低于两对照组(pCDNA3.1与pCDNA-Pdcd4-D418A)(74.48 μmol/L vs 87.67,102-30 μmol/L;14.30 μmol/L vs 40.59,29.54μmol/L,均P＜0.05);流式细胞仪测定结果表明,80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞24h,处于细胞周期G0/G1期的细胞比例下降,S期细胞比例升高,出现细胞周期S期阻滞,72h,细胞凋亡率显著升高(pCDNA3.1:45.40%vs 5.65%:pCDNA-Pdcd4-D418A:36.21%vs 3.07%;pCDNA-Pdcd4:46.17% vs 4.25%,P＜0.05):Westem blot结果表明80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞72 h,Pdcd4蛋白表达水平升高.结论:提高人胃腺癌细胞BGC-823中Pdcd4蛋白的表达能增强其对羟基喜树碱的敏感性:羟基喜树碱能引起BGC-823细胞s期阻滞,并能诱导细胞凋亡;羟基喜树碱本身也可上调BGC-823中Pdcd4的表达.
关键词： 程序性细胞凋亡因子4 羟基喜树碱 人胃腺癌 BGC-823细胞 -
衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡
目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10 mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48 h.Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Western blot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.
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凋亡抑制因子Survivin和Livin在胃癌中的表达及意义
目的:探讨凋亡抑制因子Survivin和Livin在胃癌中的表达和临床病理因素及预后的关系.方法:采用免疫组化SP法检测胃癌组织70例、癌旁组织48例及人胃癌细胞株BGC-823中Survivin及Livin的表达,分析Survivin和Livin的表达与临床病理因素及预后之间的关系.结果:Survivin和Livin在胃癌组织的高表达率显著高于癌旁组织(32.86% vs 2.08%,44.29%vs4.17%,P＜0.01);胞质Survivin和Livin高表达与胃癌的分化程度(P=0.007,P=0.018)及组织学类型有关(P=0.005,P=0.049),胞质Survivin还与胃癌转移有关:胞核Survivin高表达与胃癌的生长方式及远处转移有关,其5年生存率明显低于Survivin核阴性和低表达组(40% vs 66%,P=0.04).结论:Survivin、Livin可作为判断胃癌恶性程度和预后的标志.
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survivin反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨survivin反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞株BGC-823凋亡、增殖的作用及分子机制.方法 分别以survivin ASODN-1、survivin ASODN-2和survivin ASODN-3转染人胃癌BGC-823细胞株,采用共聚焦显微镜检测转染率,四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞凋亡指数、增殖指数和细胞周期分布及survivin、血管内皮生长因子(VEGF)、Smac/DIABLO蛋白表达改变,逆转录聚合酶链反应检测survivin、VEGF、Smac/DIABLO mRNA表达改变.结果 转染各序列survivin ASODN均可下调survivin蛋白的表达,且以ASODN-2作用为显著.以600 nmol/L survivin ASODN-2转染BGC-823细胞48 h后,G0/G1期细胞比例[(72.25±2.95)%]明显高于空脂质体对照组[(56.25±0.75)%,均P＜0.05],凋亡指数[(11.31±0.38)%]明显高于空脂质体对照组[(1.62±0.36)%,均P＜0.05],增殖指数[(27.77±2.97)%]低于空脂质体对照组[(43.80±0.80)%,均P＜0.05].转染后survivin mRNA及蛋白表达(0.523±0.091,0.733±0.009)低于空脂质体对照组(0.861±0.047,0.997±0.233;均P＜0.05),VEGF mRNA及蛋白表达(0.519±0.076,0.75±0.006)低于空脂质体对照组(0.779±0.059,1.000±0.01;均P＜0.05),Smac/DIABLOmRNA及蛋白表达(0.899±0.113,1.637±0.023)高于空脂质体对照组(0.558±0.041,1.000±0.049;均P＜0.05).结论 survivin ASODN具有诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用,其作用是通过下调survivin和VEGF、上调Smac/DIABLO基因表达实现的.
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人胃癌侧群细胞的分离鉴定和生物学特性分析
目的 检测和分选胃癌细胞系中具有干细胞特性的侧群(SP)细胞,分析其生物学特性.方法 制备胃癌细胞株BGC-823悬液,经Hoechst 33342染色后,用荧光激活细胞分选技术分选出人胃癌SP和非SP(NSP)细胞,测定SP细胞亚群所占的比例.通过平板克隆实验检测SP细胞的克隆形成能力,无血清培养检测SP细胞的增殖能力.以不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)处理BGC-823细胞后,检测SP细胞的耐药性,通过小鼠体内成瘤实验检测SP细胞的致瘤性.结果 流式细胞仪分析结果表明,BGC-823细胞中含少量SP细胞,占0.9％ ～2.1％.SP细胞组克隆形成数量为(217.67±15.50)个/孔,高于NSP细胞组[(147.00 ±17.58)个/孔,P＜0.01];SP细胞组克隆形成率为(72.56±5.17)％,高于NSP细胞组[(49.00±5.86)％,P＜0.01],表明SP细胞较NSP细胞有较强的克隆形成能力.经2.5、5、10和25 μg/ml的5-Fu作用36 h后,SP细胞所占比例分别为12.9％、9.9％、4.0％和2.1％,化疗药物对SP细胞的抑制作用随着药物浓度的递增而加强.体内成瘤实验显示,SP细胞组瘤体质量为(0.176 ±0.034)g,NSP细胞组瘤体质量仅为(0.045 ±0.046)g,两组细胞所致瘤体质量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胃癌细胞BGC-823中存在具有干细胞特性的SP细胞,进一步开展对人胃癌干细胞生物学特性的研究,将可能提示胃癌新的诊断和治疗途径.
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藏红花素联合顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响
目的 探讨藏红花素联合顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖的作用.方法 将BGC-823细胞分为对照组、顺铂组、藏红花素组和联合组.对照组不加药物培养48 h,顺铂组予以0.8μg·mL-1顺铂培养48 h,藏红花素组予以8mg·mL-1藏红花素培养48 h,联合组予以0.8 μg· mL-1顺铂+8 mg·mL-1藏红花素培养48 h.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定BGC-823细胞增殖抑制率,用Western blot检测Beclinl、ATG和LC3Ⅱ蛋白的表达.结果 培养24,48 h后,藏红花察组的光密度值与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);培养48 h后,顺铂组的光密度值显著低于对照组和藏红花素组(P＜0.05);培养24,48 h后,联合组的光密度值显著低于对照组、藏红花素组、顺铂组(P＜0.05).培养48 h后,藏红花素组和顺铂组的Beclinl、LC3Ⅱ、ATG7的蛋白相对含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).培养48 h后,联合组的Beclinl的蛋白相对含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但联合组的LC3Ⅱ、ATG7的蛋白相对含量显著低于对照组(P＜0.01).结论 藏红花素对BGC-823细胞抗增殖作用较弱,但藏红花素联合顺铂可能下调LC3Ⅱ和ATG7表达,提高对BGC-823细胞的生长抑制作用.
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染料木素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡及其分子机制的研究
目的 探讨染料木素(genistein)体外抑制人胃癌BGC-823细胞生长及诱导其凋亡的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测染料木素对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制效应;DAPI荧光染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测染料木素作用24 h后BGC-823细胞的周期分布和凋亡率;RT-PCR方法检测环氧合酶-2(COX-2)在mRNA水平的表达;进一步采用Western blotting法检测COX-2在蛋白质水平的表达.结果 染料木素对BGC-823细胞具有增殖抑制效应,并有时间及浓度依赖性.染料木素作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(81.04±1.03)、(31.85±2.26)、(20.73±2.11)μg/mL.10～80 μg/mL染料木素作用24 h后,BGC-823细胞出现核碎裂,呈现典型的凋亡特征,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,细胞内COX-2表达在mRNA水平和蛋白质水平均下调.结论 染料木素对人BGC-823细胞有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2表达有关.
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五龙消癥丸抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移作用及机制研究
目的 探究五龙消癥丸对胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移能力的影响及其作用机制.方法 分别用五龙消癥丸、PI3K激动剂胰岛素样生长因子l (IGF-1)及PI3K特异性抑制剂LY294002作用于BGC-823细胞,采用MTT法检测不同质量浓度五龙消癥丸对BGC-823细胞增殖的影响;Transwell小室模型研究五龙消癥丸对BGC-823细胞垂直侵袭和迁移能力的影响;采用ELISA法检测五龙消癥丸对血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达的影响;采用Western blotting及RT-PCR法检测脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中相关蛋白及mRNA的表达.结果 五龙消癥丸可显著抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,显著抑制BGC-823细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,显著抑制p-PI3K、p-Akt、磷酸化IkB激酶-α(p-IKK-α)、p-NF-κB p65Ser276蛋白及PI3K、Akt、IKKα、NF-κB mRNA的表达,并且呈现一定的时效和量效关系.结论 五龙消癥丸通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA表达,从而达到抑制BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭作用.
关键词： 五龙消癥丸 BGC-823细胞 侵袭 迁移 PI3K/Akt/NF-κB信号通路 -
白毛藤对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响
目的:探析白毛藤对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响.方法:将人胃癌BGC-823细胞分为空白对照组与白毛藤(4mg/mL、8mg/mL)观察组(观察1组、观察2组),采用MTT法测定BGC-823细胞生长抑制率,采用RT-PCR法测定BGC-823细胞Fas、Bcl-2基因表达,并对各组测定结果予以统计比较.结果:观察2组BGC-823细胞生长抑制率明显大于观察1组(P＜0.05);观察组BGC-823细胞Fas、Bcl-2基因表达明显低于对照组(P＜0.05).结论:白毛藤可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,促进BGC-823细胞凋亡,且浓度越大,作用越强.
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塞来希布对胃癌细胞增殖抑制作用
目的 观察塞来希布对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进胃癌BGC-823细胞的增殖抑制影响,探讨塞来希布抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法 不同浓度组的塞来希布作用于经25 ng/ml bFGF作用后的胃癌BGC-823细胞,用蛋白印迹(westem blot)分析法检测环氧化酶-2(COX-2)、核转录因子-KB(NF-kB)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达变化.结果 25 ng/ml bFGF通过PKB信号转导通路能增强胃癌BGC-823细胞中COX-2、NF-kB、VEGF蛋白的表达,对胃癌BGC-823细胞有促增殖作用,呈时间依赖性(P＜0.01).不同浓度组的塞来希布对经25 ng/ml bFGF作用的胃癌BGC-823细胞中COX-2、NF-kB、VEGF蛋白的表达均有抑制作用(P＜0.01).结论 塞来希布对bFGF促进BGC-823胃癌细胞的增殖有一定的抑制作用.
关键词： 塞来希布 BGC-823细胞 碱性成纤维细胞生长因子 增殖 -
穿心莲内酯联合5-FU对人胃癌BGC-823细胞的体内外抑制作用
目的:探讨穿心莲内酯联合5-Fu对人低分化胃癌细胞株BGC-823的协同抗肿瘤作用.方法:以人胃癌BGC-823细胞株为靶细胞,通过体外细胞培养和裸鼠移植瘤试验,采用MTT法检测、绘制效应一合用指数曲线、抑瘤率计算等方法.结果:穿心莲内酯在7.5～120μg/mL、5-FU在3.75～60μg/mL范围内均能抑制BGC-823细胞的生长,具有剂量一效应关系和时间一效应关系.两药联合作用24h、48h、72h时的中效抑制浓度分别为17.32、9.54、4.11μg/mL,显著小于单药应用组.72h效应一合周指数曲线表明两药在抑制效应≤0.97范围内可产生协同作用.穿心莲内酯联合5-FU对人BGC-823细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率为(75.51±12.57)%.与单药组相比差异均有显著性.结论:穿心莲内酯、5一Fu能在体内外抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,两药联合产生协同或相加作用.
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益生元对人胃癌细胞株BGC-823细胞抑制作用的研究
目的 探讨益生元对胃癌细胞的作用效果,为开发安全、有效的预防和辅助治疗胃癌的药物奠定基础,并为益生元的有效应用打开新思路.方法 用MTT法研究不同浓度大豆低聚糖、低聚木糖、低聚果糖和低聚甘露糖在不同时间对BGC-823细胞的抑制作用.结果 大豆低聚糖、低聚木糖、低聚果糖和低聚甘露糖4种益生元对BGC-823细胞均有一定程度的抑制作用(P<0.05),抑制效果基本呈浓度时间依赖关系,但大豆低聚糖、低聚果糖的作用在48h和72h差别不大.在这4种益生元中,大豆低聚糖的抑制效果强,低聚木糖次之,低聚果糖、低聚甘露糖的抑制效果较弱.作用48h、72h达到对BGC-823细胞半数抑制率的大豆低聚糖的浓度是100ms/ml左右;作用72h时达到对BGC-823细胞半数抑制率的低聚木糖浓度在100～125mg/ml;而125mg/ml低聚果糖和低聚甘露糖处理胃癌BGC-823细胞72h,均未达到50%的抑制率.结论 大豆低聚糖、低聚木糖、低聚果糖和低聚甘露糖对人胃癌细胞株BGC-823细胞有一定程度的抑制作用.
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胃癌BGC-823细胞中HIF-1α、HIF-2α对PKM2的调控作用
目的 研究siRNA特异性沉默人胃癌BGC-823细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α)后PKM2的表达情况,探索HIF-1α、HIF-2α对胃癌细胞内PKM2的调控作用.方法 用Realtime RT-PCR及Western blot法检测转染HIF-1α、HIF-2α及Control siRNA后细胞内PKM2表达情况.结果 RNA干扰技术能有效沉默BGC-823细胞中的HIF-1α、HIF-2α.转染HIF-1α、HIF-2α siRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均下降(P<0.05),其中siRNA抑制HIF-1α后,PKM2下调明显;转染Control siRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均无明显变化(P>0.05).结论 HIF-1α和HIF-2α均参与调控PKM2的表达,其中HIF-1α起主要调控作用,HIF-1α、HIF-2α与PKM2共同促进肿瘤的Warburg效应.
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蓝莓花青素提取物对H2O2诱导人胃癌BGC-823细胞氧化损伤的保护作用
目的 在细胞水平上分析蓝莓花青素提取物的抗氧化活性.方法 用6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL和100 μg/mL蓝莓花青素提取物预处理人胃癌BGC-823细胞24 h后,再加入1 mmol/L H2O2诱导损伤2h.按不同处理分为对照组、H2O2处理组和蓝莓花青素保护组.采用MTT比色法检测细胞活力、相差显微镜观察细胞形态、荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧(ROS)生成量、比色法和可见光法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性,分析不同浓度的蓝莓花青素提取物预处理对H2 O2诱导BGC-823细胞氧化损伤的影响.结果 与H2O2处理组相比较,6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50μg/mL和100 μg/mL蓝莓花青素提取物预处理均能增加BGC-823细胞活力(P＜0.05).25 μg/mL和100μg/mL蓝莓花青素提取物预处理能阻止H2O2诱导的BGC-823细胞形态损伤,抑制ROS生成,增加GSH-Px和CAT的活性.结论 蓝莓花青素提取物对H2O2诱导人胃癌BGC-823细胞氧化损伤具有保护作用.
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TLR3激动剂poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响
目的:poly(I:C)是双链RNA (dsRNA) 的结构类似物,可被模式识别受体TLR3、RLRs识别,具有抗肿瘤作用.本文旨在研究poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响并进行机制探讨.方法:以胃腺癌细胞系BGC-823细胞为模型,采用半定量RT-PCR检测TLR1-TLR10 mRNA基础表达水平,然后用MTT法、CCK-8法、EdU掺入法检测poly(I:C)对BGC-823细胞的增殖能力的影响;MTT法、CFSE-7-AAD法评价NK细胞对poly(I:C)处理后的BGC-823细胞杀伤能力的影响;实时定量PCR法检测细胞因子mRNA水平的变化;流式细胞术分析BGC-823细胞中TLR3、Cyclin D1表达水平以及NKL细胞中CD107a、Perforin和TNF-α的表达水平.结果:TLR3在BGC-823细胞有明显表达.poly(I:C)可抑制BGC-823细胞的增殖,这一过程的主要分子特征是DNA合成减弱、Cyclin D1的表达水平降低、炎症因子的mRNA表达水平下降;同时NK细胞对于poly(I:C)处理后的BGC-823细胞的杀伤功能增强,NK细胞表达CD107a、Perforin、TNF-α的能力提高.结论:poly(I:C) 可直接抑制肿瘤的生长并提高BGC-823细胞对NK细胞杀伤的敏感性,为设计和利用基于TLR的抗肿瘤治疗药物提供有益的启示.
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白蚁菌圃水提液抑制体外肿瘤细胞生长的作用
目的 探讨白蚁菌圃水提液对BGC-823细胞的作用,探索其抗肿瘤活性.方法 以BGC-823肿瘤细胞为研究对象,观察细胞的形态的改变,MTT法检测白蚁菌圃水提液对细胞生长的抑制作用.台盼蓝染色法,流式细胞法检测其对细胞的凋亡率的影响.结果 形态学观察,白蚁菌圃水提液作用后细胞变圆变小,核浆变少.MTT法显示白蚁菌圃水提液成浓度及时间依赖方式对BGC-823细胞增殖有抑制作用.台盼蓝染色及流式细胞法均表明其以浓度依赖方式促进凋亡.结论 白蚁菌圃水提液能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进凋亡,具有体外抗肿瘤作用.
